Архитектура Аудит Военная наука Иностранные языки Медицина Металлургия Метрология
Образование Политология Производство Психология Стандартизация Технологии


Ионоэксклюзионная хроматография



Ионоэюсклюзионная хроматография является широко извест­ным зффективным методом, вторая волна популярности которой наблюдаемся в настоящее время. В основе данного механизма раз­деления лежит эффект доннановского распределения, в результате которого соединения в ионизированной форме не удерживаются на ионообменнике, тогда как соединения в молекулярной форме распределяются между неподвижной водной фазой внутри пор ионообменника и подвижной фазой, мигрирующей в пространстве между частицами сорбента. Разделение основано на электростати­ческом отталкивании, полярных и гидрофобных взаимодействиях между растворённым соединением и сорбентом.

Механизм разделения схематично приведён на рис. 1.23. и в уп­рощённом виде может быть описан как "отторжение" ионов анионо- или катиоиообменными сорбентами и удерживание соедине­ний в молекулярной форме за счёт совокупности полярных и гид­рофобных взаимодействии. Слой сорбента можно условно разде­лить на три части: I -твёрдая матрица катионообменного сорбен­та с анионогенными функциональными группами на поверхности, П - жидкости (молекул воды), находящейся внутри пор сорбента и образующей стационарный "гидрофильный щит", Ш - подвижной фазы, мигрирующей между частицами сорбента. Анионогенные группы на поверхности сорбента действуют как полупроницаемая "доннановская мембрана" между стационарной (II) и подвижной (III) жидкими фазами. Отрицательно заряженные компоненты не доcтигают стационарной подвижной фазы II, так как отталкива­ются одноименно заряженными функциональными группами и по­кидают колонку с "мёртвым" (свободным) объёмом. Компоненты в молекулярном виде не "отторгаются" катионообменным сорбен­том и распределяются между стационарной (II) и подвижной (III) жидкими фазами. Различие степени удерживания неионных ком­понентов смеси продиктовано совокупностью полярных взаимо­действий неионных компонентов смеси с функциональными груп­пами катионообменного сорбента и гидрофобных взаимодействий неионных компонентов смеси с неполярной матрицей сорбента.

Подавляющее большинство сорбентов для ионоэксклюзионной хроматографии сделано на основе сульфированного сополимера стирол дивинилбеюола (СДВБ) с высокой ёмкостью и размером частиц 8-15 мкм. Дивинилбензол, являющийся сшивающим реа­гентом, играет значительную роль в удерживании слабоионизиро-ванных компонентов. Меньшая степень сшивки (4%) приводит к более высокому доннановскому проникновению электролитов в смолу и как следствие более медленному элюированию компонен­та. В то же время более высокая степень сшивки (8%) обеспечивает дополнительную твёрдость полимерной матрице, благодаря чему удаётся снизить неприятный эффект "разбухания" полимерного сорбента при использовании органического модификатора в элюенте, приводящий к катастрофическому росту обратного давления в хроматографической системе.

Одним из лидеров по производству хроматографических коло­нок для ионоэксклюзионной хроматографии является компания Phenornenex (США). Колонки марки Rezex ROA (300 х 7.8 мм, сте­пень сшивки - 8%) широко используются на территории РФ для анализа пищевой продукции. Характерными особенностями коло­нок данного типа являются использование низких линейных ско­ростей элюирования (0.5 - 0.8 мл/мин) и необходимость избегать использования сильных кислот и оснований, а также органических растворителей свыше 10% в качестве элюента. В качестве подвиж­ной фазы чаще всего используют разбавленные (0.0025 - 0.005 N) растворы сильных неорганических кислот −серной или фосфор­ной. Рекомендуемый диапазон рН злюента: 1 -3. Максимально до­пустимое давление не колонне 40 бар.

Несмотря на то, что при помощи ионоэксклюзионной хрома­тографии можно разделять достаточно широкий спектр органи­ческих соединений (аминокислоты, сахара, спирты и фенолы), клас­сической областью применения данного механизма разделения яв­ляется анализ органических кислот в продуктах питания (безалко­гольных напитках, соках, винах, виноматериалах и т.д.). Наиболее сильные и ионизированные кислоты такие как, серная, соляная и азотная, отталкиваются отрицательным зарядом сульфогруппы и элюируются со свободным объёмом колонки. Более слабые кисло­ты находятся, как правило, в молекулярном виде и не отторгаюгся смолой. ЗАО "НПКФ Аквилон" (Москва, Россия) совместно с Ко­ломенским ЦСМ был разработан метод определения массовой концентрации органических кислот (щавелевой, уксусной, лимонной, винной, яблочной, суммы молочной и янтарной) в напитках мето­дом высокоэффективной жидкостной хроматографии (свидетель­ство ФГУП "ВНИИМС" № 9-02 об аттестации МВИ). Пример ти­повой хроматограммы и условия хроматографирования приведе­ны на рис. 1.24. Ещё одной интересной областью применения ионо-эксклюзионной хроматографии является метод контроля фермен­тативной динамики бражек при производстве спирта, разработан­ный ЗАО "НПКФ Аквилон". Метод основан на одновременном ионоэксклюзионном разделении четырёх классов соединений (оли-госахариды, моносахариды, органические кислоты, спирты) и их последовательном рефрактометрическом и спектрофотометричес-ком детектировании. Метод позволяет отслеживать динамику про­цесса брожения на спиртовых заводах. Пример типовой хроматог­раммы и условия хроматографирования приведены на рис. 1.25.

 
Рис. 1.24. Пример хроматограммы разделения органических кислот в красном столовом вине 1–лимонная, 2–винная, 3–яблочная, 4–молочная+янтарная, 5–уксусная кислота. Элюент–0,005 N H2SO4, колонка–Rezex ROA (300x7 vv, 8 мкм), УФ–230 нм Рис 1.25. Пример хроматограммы разделения стандартной смеси (1-мальтоза, 2 - глюкоза, 3 - фруктоза, 4 - молочная кислота, 5 - глицерин, уксусная кислота, 7- метанол, 8 этанол). Условия разделения: элюент-0,0025 N H2S04, колонка-Rezex ROA (300x7.8мм, 8 мкм), детектирование-УФ 230 им (компоненты 4 и 6) и рефрактометрическое (1,2,3,5,7,8)  

 






Читайте также:

Последнее изменение этой страницы: 2016-03-16; Просмотров: 39; Нарушение авторского права страницы


lektsia.com 2007 - 2017 год. Все права принадлежат их авторам! (0.086 с.) Главная | Обратная связь