ПРИГОТОВЛЕНИЕ ДЕСЯТИКРАТНЫХ РАЗВЕДЕНИЙ

⇐ ПредыдущаяСтр 2 из 3Следующая ⇒

1. При подсчете микроорганизмов, культуральные среды (разбавители) или их разведения, разливают в количествах, превышающих 9 мл. Вместимость пробирок, колб или флаконов должна быть соответственно указана.

2. Жидкую испытуемую пробу встряхивают в руке, производя 25 движений вверх и вниз с амплитудой около 30 см за 7 с. Пипеткой отбирают 1мл исследуемой пробы и вносят его в 9 мл разбавителя, избегая контакта пипетки с разбавителем. Осторожно смешивают исследуемую порцию с разбавителем путем десятикратного втягивания другой пипеткой или в механическом смесителе в течение 5-10 с. Частоту вращения смесителя надо подбирать так, чтобы жидкость, которая образует воронку, не доходила до края сосуда на 2-3 см. Конкретный способ смешивания указан в стандарте, касающемся изучаемого продукта.

3. Другие продукты. Взвешивают навеску испытуемой пробы массой (10±0, 01) г или массой, кратной 10 г в резервуаре вращательного встряхивателя или в пластиковой емкости, достаточной для выполнения исследования и приготовления всех дальнейших разведений, требуемых специальным стандартом для исследуемого продукта.

Добавляют объем разбавителя, равный 9 мл или кратный 9 мл. Вращательный встряхиватель используют в течение времени, достаточного для того, чтобы получить от 15000 до 20000 оборотов, но не более 2, 5 мин.

4. Дальнейшие десятикратные разведения. В случае исследования на наличие или отсутствие микроорганизмов в 0, 1 мл или 0, 1 г продукта готовят следующие разведения.

Переносят чистой пипеткой (если смесь исходной суспензии была получена пипеткой, используют ту же пипетку) 1 мл исходной суспензии (первичное 1+9 (10^-1) разведение в другую пробирку, содержащую 9 мл стерильного разбавителя, избегая контакта пипетки с разбавителем.

Тщательно перемешивают или путем десятикратного втягивания чистой пипеткой, или в механическом смесителе в течение 5-10 с, чтобы получить разведение 10^-2. Частоту вращения смесителя подбирают так, чтобы жидкость во время образования воронки не доходила до краев сосуда на 2-3 см. При необходимости повторяют эти операции, т.д. до тех пор, пока не будет получено приемлемое число микроорганизмов (рисунок 1).

§ 5

ПОДСЧЕТ ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ ПЛОТНЫХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД

1. Чашка Петри должна быть маркирована этикеткой, на которой указывают номер образца, разведение, дату посева и другую необходимую информацию.

2. Необходимо выбрать определенные разведения, чтобы обеспечить получение определенного количества колоний на чашках и преодолеть возможные ингибирующие свойства.

Для переноса каждого разведения используют отдельную стерильную пипетку, кроме случаев, когда работу ведут от самого высокого разведения к самым низким разведениям.

3. Количество чашек Петри на каждое разведение. В микробиологии пищевых продуктов обычно используют одну чашку на каждое разведение микроорганизмов согласно требованиям ISO/IEC 17025. В других случаях следует использовать две чашки для каждого разведения в соответствии с ISO 8199

. § 7

МЕТОДЫ ПОСЕВА В ЧАШКИ

Посев в глубину питательной среда

1. Отбирают определенные объемы разведений для исследования, касаясь наконечником пипетки боковой стенки пробирки, чтобы удалить избыточную жидкость с внешней стороны пипетки.

2. Поднимают крышку стерильной чашки Петри так, чтобы было возможно внести содержимое пипетки в чашку.

3. Расплавленную агаровую среду выливают при температуре 44 °С - 47 °С в каждую чашку Петри. Необходимо наливать расплавленную среду таким образом, чтобы избежать ее попадания непосредственно в инокулят (посевной материал).

4. Расплавленную среду и инокулят немедленно тщательно перемешивают для получения равномерного распределения микроорганизмов в питательной среде.

5. Далее чашки помещают на горизонтальную поверхность, чтобы дать время охладиться и затвердеть питательной среде (время затвердевания агара не должно превышать 10 мин).

6. После расплавления агаровой среды, доведенной до необходимого состояния, флакон из водяной бани высушивают сухим чистым полотенцем, чтобы предотвратить загрязнение чашек водой бани.

7. Необходимо следить, чтобы среда не попадала на внешнюю сторону флакона или на внутреннюю часть крышки чашки Петри во время разливки е чашки. Для этого флакон или колбу необходимо держать фактически в горизонтальном положении и воздержаться от возврата флакона в вертикальное положение между этапами разливки питательной среды.

8. Если в исследуемом продукте предполагается присутствие колоний (например, виды Proteus) с " ползучим" ростом, используют для анализа слой со стерильным " голодным" агаром или идентичной питательной средой, наносимой на затвердевший агар в чашки с посеянным материалом, чтобы предотвратить или свести к минимуму распространение такого " ползучего" роста.

Поверхностный посев

1. Методы посева, предназначенные для получения только поверхностных колоний на агаровых чашках, имеют некоторые преимущества по сравнению с методом разливки в чашки для выращивания микроорганизмов внутри агара. Микроорганизмы не подвергаются действию высокой температуры расплавленной агаровой среды, поэтому количество колоний может быть выше, а подсчет - более точным.

2. Используют предварительно заполненные агаровой средой чашки, толщина агарового слоя которых составляет не менее 3 мм. Слой агара должен быть ровным и не содержать пузырьков воздуха и поверхностной влаги.

3. Чтобы облегчить равномерное распределение, поверхность затвердевшего агара необходимо подсушить в соответствии с ISO/TS 11133 или, как определено другим соответствующим международным стандартом. В таком случае посевной материал абсорбируется в течение 15 мин.

⇐ Предыдущая 123 Следующая ⇒