Архитектура Аудит Военная наука Иностранные языки Медицина Металлургия Метрология
Образование Политология Производство Психология Стандартизация Технологии


Метод культивирования клеток и тканей

 

Метод основан на выращивании (эксплантации) изолированных клеток, кусочков тканей, органов вне организма (in vitro).

Различают клеточное, тканевое и органное культивирование. При клеточном и тканевом культивировании отдельные клетки или кусочки ткани выращивают погруженными в питательную среду.

Такой способ позволяет сохранить морфологическую структуру культивируемых клеток, тканей.

Культуры клеток дают возможность получить однородный клеточный материал в больших количествах. На клеточных культурах можно изучать физические и химические воздействия.

Наиболее удобным объектом для медицинских генетиков оказалась культура лимфоцитов периферической крови (рис. 1.36).

Для ее получения достаточно взять 1-2 мл венозной крови и добавить ее в смесь питательной среды с фитогемагглютинином (белок бобовых растений). Он вызывает деление лимфоцитов.

Продолжительность культивирования составляет 48-72 ч.

Вторым методическим условием цитогенетических исследований является использованиеколхицина, разрушающего веретено деления и останавливающего клеточное деление на стадии метафазы.Его добавляют в культуры клеток за 2-3 ч до окончания культивирования.

После этого клетки окрашивают и помещают под микроскоп (рис. 1.36).

 

 

 

Рис. 1.36. Приготовление цитогенетических препаратов путем культивирования лимфоцитов периферической крови

 

Метод слияния клеток

 

Метод искусственного слияния клеток путем склеивания поверхностей клеток - гибридизация соматических клеток и образование гетерокарионов.

При органном культивировании клетки кусочки ткани или органа (чаще всего взятые у эмбриона) выращивают на поверхности питательной среды. Кусочек органа или ткани в стерильных условиях извлекают из эмбриона, измельчают (до 0,2 мм), промывают в растворе и помещают на поверхность мембранного фильтра, расположенного на плотике из органического стекла. Плотик помещают в чашку Петри с питательной средой так, чтобы нижняя поверхность фильтра касалась поверхности питательной среды.

Органное культивирование позволяет сохранить морфологическую структуру выращиваемого органа, свойственную ему в условиях целого организма.

При этом сохраняется не только морфологическая структура, но и функциональные свойства ткани, что позволяет наблюдать процессы дифференцировки, пролиферации, выявлять действие биологически активных веществ на культуру, проследить за динамикой возникающих изменений.

Гибриды соматических клеток были открыты лишь в 60-х годах нашего столетия. В 1960 г. Барский с сотрудниками сообщили о выделении линии гибридных клеток. Гибридные клетки были получены путем смешения двух линий, выделенных ранее из 1 клетки мышиной саркомы. Было установлено, что клеточные гибриды можно получить, используя клетки различных видов животных.

При изучении межвидовых гибридных клеток, способных к пролиферации были сделаны два очень важных наблюдения:

- в гибридах могут проявиться оба генома;

- в долгоживущих межвидовых гибридах элиминируются хромосомы одного вида (рис. 1.37).

 

 

Рис. 1.37. Получение химерных животных методом слияния клеток

1.3. Практическое задание

1. Рассмотрите фотографии объектов (рис. 1.38-1.44) и определите, какие методы использовались при получении данных объектов

 

Рис. 1.38. Фото хлоропластов водорослей

Рис. 1.39. Фото крови человека

 

Рис. 1.40. Фото инфузории туфельки

 

Рис. 1.41. Фото клеток гладкой мускулатуры

 

Рис. 1.42. Фото кариотипа человека

 

Рис. 1.43. Фото Т-лимфоцита, зараженного вирусом иммунодефицита человека

 

Рис. 1.44. Фото одноклеточного простейшего под микроскопом

 

Рис. 1.45 Фото вируса Эбола

Вопросы теста

Какое из перечисленных положений согласуется с клеточной теорией?

 

а) клетка является элементарной единицей наследственности

б) клетка является единицей размножения

в) клетки всех организмов различны по своему строению

г) клетки всех организмов обладают разным химическим составом

Последнее изменение этой страницы: 2016-03-25; Просмотров: 50; Нарушение авторского права страницы


lektsia.com 2007 - 2017 год. Все права принадлежат их авторам! (0.006 с.) Главная | Обратная связь