Метод Ниссля в модификации Снесарева

⇐ ПредыдущаяСтр 2 из 5Следующая ⇒

Одновременно с нервными клетками на препаратах, окрашенных по Нисслю, выявляются клеточные элементы мягкой мозговой оболочки и ее сосудов, внутримозговых сосудов, ядра глии и инфильтративные клетки, липофусцин, зеленый пигмент, базофильные коагуляты в сосудах, протоплазменная реакция астроцитов. Метод Ниссля также может быть использован для предварительной диагностики нейроэктодермальных опухолей и паразитарных поражений мозга.

Срезы материала, залитого в целлоидин, получают на санном микротоме. Толщина срезов 8-10 мкм. Их хранят в 96 % спирте.

Методика окраски

1. Срезы в 96 % спирте подогревают на водяной бане до появления пузырьков и охлаждают.

2. Переносят в 0, 2 % раствор тионина, подогревают до появления паров и охлаждают.

3. Промывают в 2 сменах дистиллированной воды; проводят через 2 смены 96 % спирта (до побледнения срезов) по 30 —40 с в каждой.

4. При недостаточной дифференцировке тионина в спиртах проводят через эвкалиптовый спирт (10 мл 96 % спирта + 1 капля эвкалиптового масла) 3-5 с; тщательно ополаскивают в 3 сменах 96 % спирта, проводят через спирт-ксилол (2 части ксилола и 1 часть 96 % спирта), 100 % спирт-ксилол, ксилол.

5. Переносят на предметное стекло и заключают в бальзам.

6. Готовые препараты укладывают на доски и держат на свету до просветления фона (контроль под микроскопом).

Раствор тионина. Готовят из 1 г тионина и 500 мл дистиллированной воды. Тионин растирают в ступке в течение 45-60 мин, добавляя по каплям подогретую дистиллированную воду. Затем доливают оставшуюся дистиллированную воду, подогревают, доводят до кипения и фильтруют через 6 фильтров.

Перед использованием приготовленного раствора тионина его также следует профильтровать. Использованный краситель сливают в отдельный сосуд, так как он может быть вновь использован.

Результаты: на светлом фоне выявляются нервные клетки сине-фиолетового цвета различных оттенков.

Метод Ниссля отличается постоянством и большой надежностью результатов. Основой его успешного использования являются правильная фиксация материала и, что особенно важно, тщательное обезвоживание в спиртах восходящей концентрации при заливке в целлоидин или парафин. При несоблюдении этих условий препараты дают неотчетливое изображение, имеют зеленый оттенок и быстро обесцвечиваются.

==========================================================

ОКРАШИВАНИЕ НЕРВНЫХ ВОЛОКОН

Методика выявления миелиновой оболочки по Шпильмейеру

Данная методика предназначена для элективного окрашивания миелиновых оболочек нервных волокон. Одновременно в белом веществе выявляется дренажная олигодендроглия.

Кусочки хранят в 10 % формалине, режут на замораживающем микротоме (толщина срезов 15 — 20 мкм). Срезы можно хранить также в 10 % формалине.

Методика окраски

1. Срезы промывают в 3 сменах дистиллированной воды.

2. Переносят на предметное стекло, смазанное смесью белка с глицерином, и подсушивают на воздухе.

3. Погружают в 2, 5 % раствор железоаммонийных квасцов на 2 сут (можно дольше) и держат в темном месте.

4. Промывают в 3 сменах дистиллированной воды и обезжиривают в 96 % спирте 15 — 30 мин.

5. Помещают в гематоксилин (15 мл гематоксилина Бемера и 85 мл дистиллированной воды) на 1 сут и держат на свету.

6. Промывают в 3 сменах дистиллированной воды и дифференцируют в 2, 5 % растворе железоаммонийных квасцов (контролируя процесс под микроскопом).

7. Промывают в дистиллированной воде, затем оставляют на 30 мин в проточной воде.

8. Просушивают на воздухе, проводят через ксилол и заключают в бальзам.

Гематоксилин Бемера готовят из двух растворов. Первый раствор: 1 г гематоксилина в 10 мл абсолютного спирта; второй: 8 г алюмокалиевых квасцов растворяют при нагревании в 200 мл дистиллированной воды, после чего раствор остужают и фильтруют. Через 1 сут после приготовления растворы смешивают и дают смеси созреть на свету в широкогорлом открытом сосуде 10—14 сут, после чего фильтруют и добавляют несколько кристаллов тимола.

Раствор железоаммонийных квасцов: 2, 5 г железоаммонийных квасцов и 100 мл дистиллированной воды размешать и профильтровать.

Результаты: на светлом слегка желтоватом фоне миелиновые волокна темно-серо-синеватого оттенка; ядра дренажной олигодендроглии в белом веществе того же оттенка.

В одном препарате редко удается одновременно выявить касательные (тангенциальные) и проекционные волокна, потому что для выявления миелиновых волокон разных систем (интракортикальные, проекционные и спаечные) требуется различная длительность дифференцировки срезов в железоаммонийных квасцах. В связи с этим одно стекло со срезом, окрашенным гематоксилином, с тем чтобы получить четкую архитектонику волокон, а также тонкую структуру миелиновой оболочки проекционных волокон, нужно более длительно дифференцировать в 2, 5 % растворе железоаммонийных квасцов, тогда как для выявления архитектоники волокон и структуры миелиновой оболочки касательных (тангенциальных) волокон другое стекло со срезом, окрашенным гематоксилином, погружают в 2, 5 % раствор железоаммонийных квасцов на более короткий срок. В процессе окрашивания могут появляться артефактные контрастные белые пятна неокрашенной ткани. В таких случаях срезы нужно более длительное время обезжиривать в 96 % спирте.

==========================================================

⇐ Предыдущая 123 4 5 Следующая ⇒