Методы микробиологической диагностики инфекционных заболеваний, их характеристика.

Бактериоскопический (микроскопический) метод - совокупность способов обнаружения и изучения морфологических и тинкториальных свойств бактерий (микробов) в лабораторной культуре, патологическом материале или пробах из внешней среды с помощью микроскопии. Применяют для установления диагноза инфекционного заболевания или иного вызванного микробами процесса, а также при идентификации выделенной чистой культуры. Для диагностики большинства инфекций микроскопия, как первый этап микробиологического исследования, имеет лишь вспомогательное, ориентировочное значение.

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ                    

Классическое бактериологическое (вирусологическое, микологическое) исследование (называемое «золотым стандартом» микробиологической диагностики). Егоцелью является выделение и идентификация возбудителя.

Алгоритм бактериологического (вирусологического, микологического) исследования складывается из следующих основных этапов:

1) первичная микроскопия (необязательный);

2) первичный посев для выделения чистой культуры;

3) накопление чистой культуры;

4) изучение комплекса биологических свойств выделенной культуры и ее идентификация.

Идентификацию чистых культур (до вида микроорганизма) проводят с учётом морфологических, тинкториальных, культуральных, биохимических, токсигенных и антигенных свойств микроорганизма. Большинство исследований включает определение чувствительности к антимикробным препаратам у выделенного возбудителя. Для эпидемиологической оценки роли микроорганизма проводят внутривидовую идентификацию определением фаговаров, биоваров, резистентваров и т.д.

Прежде всего, это достаточно длительный процесс. Его минимальный срок 3-4 дня, но могут пройти многие дни и даже недели, прежде чем выделенный возбудитель будет точно идентифицирован. Для некоторых патогенных бактерий (холерного вибриона, дифтерийных бактерий) разработаны ускоренные методы выделения и идентификации, но и они позволяют получить ответ не ранее 36-48 часов.

Для идентификации микроорганизмов изучают следующие свойства:

· Морфологические

· Тинкториальные

· Культуральные

· Биохимические

· Патогенные

· Антигенные (серологические)

· Чувствительность к антимикробным препаратам: антибиотикам, химиотерапевтическим препаратам и антисептикам

Характер материала определяется клиническими особенностями заболевания: это должны быть те субстраты или биологические жидкости, в которых на данной стадии заболевания наиболее вероятно присутствие возбудителей. Успех проведения бактериологического метода во многом зависит от предварительного этапа, включающего забор исследуемого материала и его транспортировку, оформление направления в бактериологическую лабораторию.

БИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ

Биологические методы направлены на определение наличия токсинов возбудителя в исследуемом материале и на обнаружение возбудителя (особенно при незначительном исходном содержании в исследуемом образце или когда возбудитель не может быть обнаружен методом посева, - например, при вирусных и риккетсиозных заболеваниях).

Методы включают заражение чувствительных лабораторных животных (чувствительных к предполагаемому возбудителю) исследуемым материалом споследующим выделением чистой культуры патогена либо установлением фактаприсутствия микробного токсина и его природы, либо воспроизводят характерную клиническую картину. Инфекционный материал вводят внутрь, в дыхательные пути, внутрибрюшинно, внутривенно, внутримышечно, внутрикожно и подкожно, в переднюю камеру глаза, черезтрепанационное отверстие черепа, субокципитально (в большую цистерну головногомозга). У животных прижизненно забирают кровь, экссудат из брюшины, после гибели —кровь, кусочки различных органов, СМЖ, экссудат из различных полостей.

СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ метод заключается в определении титра специфических антител в сыворотке больного. Для его реализации используют различные реакции иммунитета, как простые (агглютинация и ее разновидности), так и сложные (РСК, ИФА и др.).

Классическая серодиагностика основана на:

1. 1). Определении антител к возбудителю в диагностическом титре;

2. 2).Обнаружение в исследуемой сыворотке крови антител к возбудителю ряда инфекционных болезней недостаточно для постановки диагноза, поскольку оно может отражать наличие постинфекционного или поствакцинального иммунитета. Именно поэтому исследуют парные сыворотки больного, взятые в первые дни болезни и через 7-10 дней (иногда этот интервал может быть более длительным). В этом случае оценивают нарастание титра антител. Нарастание титра антител в 4 раза и более свидетельствуетоб инфекционной природе антител.

3. 3).При экзотических инфекционных болезнях, а также при гепатитах, ВИЧ- инфекции и при некоторых других заболеваниях сам факт определения антител свидетельствует об инфицированности пациента и имеет диагностическое значение.

Серологический метод диагностики применяют с конца первой-начала второй недели заболевания. Для обнаружения антитела к исследуемой сыворотке прибавляют известный антиген. Эти препараты, называемые диагностикумами, представлят собой взвесь убитых микроорганизмов (их отдельных антигенов) или эритроцитов (частиц латекса), на которых адсорбированы микроорганизмы или их антигены. Серологическими называют реакции иммунитета между антигенами (АГ) и антителами (AT).

Реакция агглютинации В реакции агглютинации (РА) антиген участвует в виде корпускулярной частицы. Это могут быть суспензии микроорганизмов, клеток организма, например эритроцитов. При смешивании со специфической антисывороткой происходит склеивание и оседание визуально различимых хлопьев — иммунных комплексов.

Реакцию агглютинации можно ставить качественно — на стекле и количественно — в пробирках, где готовятся разведения сыворотки. Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА) является своеобразной модификацией РА. Сущность ее состоит в том, что молекулы антигена адсорбируются на поверхности эритроцитов (после обработки эритроцитов танином или формалином). Такие «нагруженные» АГ эритроциты приобретают способность агглютинироваться иммунной сывороткой, специфичной для данного АГ.

Образование комплекса АГ—AT влечет за собой и склеивание эритроцитов (на дне лунки или пробирки образуется гемагглютинат в виде «перевернутого зонтика»), что легко учитывать. Таким образом, эритроциты не участвуют непосредственно в образовании комплекса АГ—AT, но служат его индикаторами. РНГА более чувствительна, чем РА.

Реакция преципитации В реакции преципитации (РП) участвует мелкодисперсный (растворимый антиген). При контакте с антителами — преципитинами образуется осадок.

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) Прямая (метод Кунса). Микроорганизмы, обработанные антителами, меченными флюорохромами, способны светиться в люминесцентном микроскопе.

Непрямая. На первом этапе микроорганизмы взаимодействуют со специф ческой сывороткой. Далее воздействуют на образовавшийся иммунный комплекс антиглобулиновой сывороткой, меченной флюорохромом. Иммунный комплекс с помощью этого конъюгата светится в люминесцентном микроскопе.

Реакция связывания комплемента (РСК) Это реакция лизиса антигена (например, цитолиза, бактериолиза) под действием антител с участием комплемента. Если антиген - это бактериальная клетка или вирус, то лизис не сопровождается видимыми проявлениями. Поэтому, чтобы обнаружить наличие комплекса АГ + AT + комплемент в опытной системе, где неизвестен один из компонентов (АГ или AT), используют индикаторную систему АГ + AT, где оба компонента известны и лизис антигена хорошо проявляется, так как в качестве АГ берут эритроциты. Реакция основана на способности комплемента — комплексной системы белков нормальной сыворотки позвоночных — фиксироваться на комплексе АГ—AT и последующем лизисе антигена. В РСК участвуют пять компонентов: АГ—AT опытной системы, в которой один из реагентов неизвестен, комплемента и индикаторной системы. Таким образом, наличие гемолиза означает отрицательный результат РСК, а отсутствие гемолиза — положительный результат.

Иммуноферментный метод Высокочувствительный метод выявления АГ или AT на основе реакции АГ—AT с применением меченных ферментами АГ или AT.

⇐ Предыдущая11121314151617181920Следующая ⇒

Поделиться: