Титрационный метод предназначен для проведения текущего анализа питьевой воды.

Принцип метода заключается в предварительном подращивании колифагов в среде обогащения в присутствий Е. сoli и последующем выявлении бляшек колифага на газоне Е. сoli на питательном агаре (МПА).

Теоретический материал по теме занятия студенты конспектируют в тетрадь и выполняют практические задания.

Практическое задание 1: Провести санитарно-микробиологическую оценку воздуха учебной аудитории седиментационным методом.

Этапы выполнения:

1 Провести посев воздуха помещения в МПА, агар Эндо, солевой агар, агар Сабуро.

2 Поместить посевы в термостат для культивирования, выбрать соответствующий режим.

3 Учесть результаты проведенных исследований, сделать заключение и отчитаться преподавателю.

Практическое задание 2: Провести санитарно-микробиологическую оценку питьевой воды.

Этапы выполнения:

1 Провести посев предоставленной пробы воды в питательные среды с целью определения общего микробного числа методом посева в МПА, колиформных бактерий титрационным методом и спор сульфитредуцирующих клостридий прямым посевом.

2 Поместить посевы в термостат для культивирования, выбрать соответствующий режим.

3 Учесть результаты проведенных исследований, сделать заключение и отчитаться преподавателю.

Вопросы и задания для контроля знаний. 1 Назовите методы санитарной оценки воздуха закрытых помещений. 2 На чем основан седиментационный метод? 3 По каким микроорганизмам оценивают санитарное состояние закрытых помещений? 4 Поясните фильтрационный метод исследования воздуха. 5 С какой целью используют аппарат Кротова? 5 Как осуществляют отбор проб воды из различных источников для микробиологического исследования? 6 Назовите микробиологические показатели санитарной оценки питьевой воды. 7 В чем отличие общих и термотолерантных колиформных бактерий? 8 Какими методами определяют колиформные бактерии в воде? 9 На чем основаны методы обнаружения спор сульфитредуцирующих клостридий в воде? 10 Что такое колифаги? 11. О чем свидетельствует наличие колифагов в воде? 12 Поясните методы определения колифагов в воде.

Тема 15 «Санитарно – бактериологическое исследование кормов»

Цель – формирование знаний о показателях санитарно-микробиологической оценки, методах микробиологического исследования кормов для животных, формирование умения отбора, подготовки и посева различных кормов для микробиологического исследования с целью санитарной оценки кормов на соответствие требованиям нормативных документов, делать заключение по изученному материалу, навыков работы с источниками информации.

План

1. Отбор, хранение, транспортировка проб кормов в лабораторию для микробиологического исследования.

2. Микробиологические показатели санитарной оценки кормов для животных, методы их определения.

Материальное обеспечение: пробы корма (сено, мясо-костная мука, комбикорм), стерильная лабораторная посуда (чашки Петри, пипетки на 1, 2, 5, 10 мл), инструменты для отбора проб, нормативная документация, пробирки со стерильным физ. раствором по 9 мл, стерильные питательные среды (МПА в чашке Петри, МПА столбик, агар Сабуро, агар Эндо, среда Китта-Тароцци), микроскоп, спиртовки, предметные стекла, анилиновые красители.

Теоретический материал

Для бактериологического исследования от каждой партии корма составляют два средних образца весом не менее 500 г. Один из них направляют в лабораторию, а другой сохраняют на предприятии (хозяйстве) до окончания исследования. На пробы корма составляют сопроводительный документ в двух экземплярах. В лаборатории проводят следующие исследования:

1Определение общего количества микробных клеток.

 В стерильную пробирку помещают 1 г корма, взятого из среднего образца (взятие корма для навески одноразовое), добавляют 9 мл физиологического раствора и тщательно встряхивают (получают разведение 1 : 10). Из полученной взвеси готовят последующие разведения (1 : 100, 1 : 1000, 1 : 10 000, 1 : 100 000, 1 : 1 000 000). После оседания взвешенных частиц из верхнего слоя жидкости делают посевы.

Для количественного учета микробного обсеменения в стерильные бактериоло­гические чашки вносят по 1 мл каждого разведения и заливают 10—15 мл стерильного, расплавленного и охлажденного до температуры 44—45° С мясо-пептонного агара. Осторожно покачивая чашки, засеянный материал равномерно распределяют в агаре. После застывания среды чашки помещают (вверх дном) в термостат при температуре 37° С. После 24—48-часового термостатирования проводят подсчет выросших колоний только в чашках, где содержатся не более 300 колоний. Результаты, полученные при подсчете колоний, умножают на разведения, суммируют и определяют количество микробов в 1 г корм

2 Исследование на патогенные сальмонеллы.

Навеску исследуемого материала 50—200 г (50 г от 10 и менее, 100 г от 10 до 100 и 200 г от 101 и выше упаковочных единиц) измельчают в стерильной фарфоровой ступке и вносят в колбу, содержащую среду предварительного обогащения (пептонная вода, МПБ с содержанием 5% маннита) при соотношении материала и среды 1:5.

Содержимое колбы тщательно перемешивают и ставят в термостат при температуре 37° С. Через 16—18 часов производят посевы на бактериологические чашки с твердыми дифференциально-диагностическими средами: висмут-сульфит агар, средой Плоскирева или Левина (по две чашки) и на две (по выбору) основные среды обогащения (селенитовый бульон, магниевую среду, среды Киллиана, Мюллера, Кауфмана) в соотношении 1:5. Лучшими являются селенитовый бульон и магниевая среда.

После 16—18-часового выдерживания в термостате при 37° С из обогатительных сред бактериологической петлей производят вторично посевы на чашки с твердыми дифференциально-диагностическими средами, которые помещают в термостат при 37° С. Засеянные чашки просматривают через 16, 24, 48 часов.

На висмут-сульфит агаре S. typhi и S. paratyphi А растут в виде мелких, нежных, серовато-зеленых колоний с черным центром; S. cholerae suis — в виде зеленых колоний. Колонии почти всех других сальмонелл значительно крупнее, темно-коричневого цвета с металлическим блеском, окруженные светлым ореолом, цвет участка среды под колонией черный. На среде Плоскирева сальмонеллы растут в виде прозрачных или нежно-розовых колоний, на среде Левина — в виде прозрачных, бледных, нежно-розовых или розо­вато-фиолетовых колоний.

3 Исследование на энтеропатогенные типы кишечной палочки.

50 г корма помещают в колбу, содержащую 500 мл стерильного физиологического раствора, встряхивают на шуттель-аппарате в течение 30 минут и из полученной взвеси стерильными пипетками готовят разведения

1:100, 1: 000, 1:10 000, 1:100 000, 1:1 000 000. По 1 мл каждого разведения вносят в пробирки (по выбору) со средами Эйкмана, Кесслера или Кода. Посевы помещают в термостат при температуре 43° С для первых двух сред и при 37° С — для последней.

Через 24 часа учитывают рост: на среде Эйкмана —по помутнению среды и образованию газа, на средах Кесслера и Кода — по изменению цвета сред. Титр кишечной палочки устанавливают по наибольшему разведению, в котором еще наблюдался ее рост.

Из пробирок, где наблюдается рост микробов, производят посев на плотные дифференциально-диагностические среды Эндо, Левина в бактериологических чашках, разделенных на секторы для каждого разведения.

4 Исследования на анаэробы.

50 г корма растирают в стерильной ступке с физиологическим раствором и засевают в несколько пробирок со средой Китта — Тароцци, молоком и по две чашки со средами Вильсона — Блера и кровяным агаром по Цейслеру. Для уничтожения вегетативных форм по одной пробирке с жидкими средами прогревают при температуре 80° С в течение 20 минут. Посевы помещают в термостат при температуре 37° С. Чашки должны находиться в специальных аппаратах для анаэробных культур или в эксикаторе, куда заранее вносят тот или иной поглотитель кислорода.

Результаты посевов регистрируют в первый же день. Почернение среды Вильсона — Блера в течение 1—3 часов после посева, свертывание молока с обра­зованием ноздревато-губчатого сгустка и прозрачной сыворотки в течение 6 часов, а также быстрое начало роста на среде Китта — Тароцци (через 4—5 часов) при обильном газообразовании является характерным для клостридиум перфрингенс. Рост клостридиум ботулинум, наблюдаемый обычно на 2—3-й день, характеризуется помутнением среды Китта — Тароцци, образованием осадка и запахом прогорклого масла.

Биологическую пробу проводят на морских свинках или белых мышах путем внутрибрюшинного заражения бульонной культурой. При положительном результате подопытные животные гибнут через 12—48 часов.

Для идентификации отдельных возбудителей или типов одного вида ставят опыт нейтрализации токсина специфической сывороткой. Для этого минимальную смертельную дозу культуры в смеси с 0,2—0,5 мл соответствующей типоспецифической сыворотки выдерживают в термостате 45 минут и вводят мышам внутрибрюшинно. Для контроля испытуемую культуру или фильтрат вводят мышам без сыворотки. Вид и тип микроба определяют по выживаемости мышей, получившихсоответствующую сыворотку.

5 Исследование на ботулизм (наличие токсинов) в качестве подопытных животных используют белых мышей. При этом могут быть применены два способа:

а) нейтрализация токсина противоботулиновой сывороткой (антитоксином). Корм предварительно растирают в ступке со стерильным физиологическим раствором (1 : 4) и настаивают в течение 1—2 часов при комнатной температуре. Настои центрифугируют и фильтруют через ватно-марлевый фильтр. К 0,5 мл фильтрата добавляют 0,2 мл поливалентной противоботулиновой сыворотки. Смесь выдерживают 1 час при комнатной температуре, затем одному животному вводят подкожно 0,5 мл фильтрата, другому — смесь фильтрата с сывороткой в той же дозе.

б) разрушение токсина кипячением фильтрата. Одну половину фильтрата кипятят в течение 30 минут. Затем одному животному внутрибрюшинно вводят 0,5—1,0 мл некипяченого фильтрата, другому — в этой же дозе прокипяченного.

Положительным результатом биологической пробы по первому и второму способам считают гибель мышей, наступившую как от фильтрата, не обработанного противоботулиновой сывороткой, так и от фильтрата, не подвергнутого кипячению.

Оценка кормов. Корм используют сельскохозяйственным животным при отрицательных результатах исследования на сальмонеллы, энтеропатогенные типы кишечной палочки и токсинообразующие анаэробы при условии его соответствия другим показателям действующих стандартов.

При обнаружении сальмонелл, энтеропатогенных типов кишечной палочки, анаэробных микроорганизмов и их токсинов, протея корм запрещается использовать животным без дополнительной обработки.

Микологическое и микотоксикологическое исследование кормов.

Кроме бактериологических показателей в кормах определяют наличие плесневых грибов и дрожжей, а так же их токсинов. Посевы проводят на специальные питательные среды агар Чапека, Сабуро, сусло агар и другие.

Микроскопическим методом определяют род гриба. Наиболее часто корма поражаются патогенными и токсигенными грибами, относящимися к родам Mucor, Rhisopus, Aspergilus, Fusarium, Penicillium, Stachybotrys. Токсины определяют постановкой биопробы на лабораторных животных.

Теоретический материал по теме занятия студенты конспектируют в тетрадь и выполняют практические задания.

Практическое задание 1: Провести посев проб кормов с целью определения бактериологических показателей их качества.

Этапы выполнения задания:

1 Подготовить пробу корма (сено, мясо-костная мука, комбикорм) к посеву в питательные среды.

2 Провести посев подготовленной пробы продукта в МПА, среду Кесслер, дифференциально-диагностическую среду Эндо, Китта-Тароцци и поставить посевы в термостат для культивирования.

3 Отчитаться преподавателю о выполненной работе.

Практическое задание 2: Провести посев проб кормов с целью микологического и микотоксикологического исследования.

Этапы выполнения задания:

1 Подготовить пробу корма (сено, мясо-костная мука, комбикорм) к исследованию.

2 Провести посев подготовленной пробы корма в агар Сабуро и поставить посевы в термостат для культивирования.

3 Приготовить экстракт корма для изучения токсичности.

4 Отчитаться преподавателю о выполненной работе.

Вопросы и задания для контроля знаний. 1 Поясните порядок отбора, подготовки проб кормов (сухих, влажных, комбинированных) для санитарно-микробиологического исследования. 2 Какие показатели определяют при бактериологическом исследовании кормов? 3 С какой целью и как определяют микробную обсемененность корма (КМАФАнМ)? 4 Как исследуют корма на наличие энтеропатогенных штаммов кишечной палочки? 5 На чем основаны методы обнаружения сальмонелл в кормах? 6 В чем состоит микологическая и микотоксикологическая оценка кормов? 7 Как определить токсичность корма? 8 Возбудители каких инфекционных болезней могут передаваться с кормом? 9 Как определить наличие в корме возбудителя ботулизма и его токсинов?

⇐ Предыдущая11121314151617181920Следующая ⇒

Поделиться: