Микробиология холеры и галофилезов »

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ДЛЯ ПРЕПОДАВАТЕЛЕЙ

к практическому занятию № 14

на тему: « Микробиология пищевых токсикоинфекций и интоксикаций. Санитарная микробиология пищевых продуктов, санитарный контроль бактерионосительства у персонала пищеблоков.

Микробиология холеры и галофилезов »

по программе дисциплины «Микробиология, вирусология»

по специальности - 31.05.01. «Лечебное дело» (уровень специалитета)

курс 3, семестр 5

Составитель: Зайцева Е.А., д.м.н., профессор кафедры Рецензент: Шаркова В.А., д.м.н., профессор, заведующая кафедрой

Владивосток - 2016

Тема занятия « Микробиология пищевых токсикоинфекций и интоксикаций. Санитарная микробиология пищевых продуктов, санитарный контроль бактерионосительства у персонала пищеблоков. Микробиология холеры и галофилезов »

2. Мотивация изучения темы. Быстрое развитие, острое течение, склонность к эпидемическому распространению пищевых токсикоинфекций, тяжелая, опасная для жизни нейроинфекция на фоне ботулизма, стафилококковой интоксикации – все это обязывает врача действовать точно, быстро, оперативно. Эффективность работы во многом определяют те знания, умения, которые врач должен обрести в студенческие годы, в частности на настоящем занятии. Это относительно далекая перспектива. Ближняя цель – полноценные знания указанной темы необходимы для усвоения учебного материала на кафедрах терапии, инфекционных болезней, гигиены питания и т.д.

С 1967г. особо опасная инфекция холера после долгих лет отсутствия, вновь охватила почти все страны мира. На территории России её длительное время не было. Это ослабило внимание инфекционистов, эпидемиологов и других специалистов к этому опасному заболеванию. Поэтому спорадические, чаще всего завезенные случаи холеры не миновали и нашу страну, заставив быть постоянно готовыми к борьбе с этой грозной, часто смертельной инфекцией.

Учитывая опыт борьбы с холерой в мире в период VII пандемии, значительное изменение их этиологии, участие в ней главным образом вибриона Эль-Тор, а также других вибрионов с высокой адаптивной способностью, возбудителей галофильных вибрионозов, не следует забывать о реальности возникновения вспышек этих инфекций в эндемических районах, портовых городах, о возможности спорадических случаев названных заболеваний. Поэтому знания о холере необходимы врачам всех профилей.

Цели занятия.

3.1 Общая цель: изучение темы направлено на формирование компетенций по ФГОС-03 по специальности 31.05.01 – Лечебное дело: формировать способность и готовность использовать на практике методы гуманитарных, естественнонаучных, медико-биологических и клинических наук в различных видах профессиональной и социальной деятельности (ОПК-9), формировать умение работать с научной литературой, анализировать информацию, вести поиск, выделять основные положения, делать выводы, развивать личностные качества (ОПК-9). Активно использовать современные достижения науки, особенно подчеркивая роль отечественных ученых в разработке данной темы (ОПК-9).

Конкретные цели и задачи.

В результате изучения темы студенты должны:

I уровень - «иметь представление» - об удельном весе токсикоинфекций в патологии человека и эпидемиологические особенности инфекционного процесса, о методах отбора материала и проведении микробиологического исследования, назначить этиологическое и патогенетическое лечение.

II уровень - «знать» - биологическую характеристику возбудителей, вызывающих пищевые токсикоинфекции и интоксикации, факторы болезнетворности, патогенез, особенности иммунитета, восприимчивость макроорганизма, принципы диагностики, терапии и основы профилактики.

Современное представление об этиологии холеры, биологических свойствах возбудителей, таксономической характеристике, патогенезе заболевания, методы индикации возбудителей холеры, принципах лечения, общей и специфической профилактике ООИ. Знать состав и назначение диагностических препаратов.

________________________________________________________________________

III уровень - «уметь» - сопоставлять биологические свойства возбудителей инфекции с патогенетическими механизмами, анализировать их с учетом динамики развития, выбирая методы лабораторной диагностики, материал исследования, забирать разнообразный материал для исследования, направить его в лабораторию, ставить некоторые методы диагностики (РПГА, РИФ, ИФА), читать результаты лабораторных анализов (экспресс-методов, серологических, бактериологических исследований). Уметь оценивать их.

IV уровень - «владеть» - навыками клинической интерпретации результатов микробиологического исследования, уметь выбрать препараты для специфической диагностики, терапии и профилактики возбудителей токсикоинфекций, галофиллезов, холеры.

4. Этапы проведения практического занятия:

№ п/п	Название этапа	Цель этапа	Время
1	2	3	4
I. Вводная часть занятия			5-10 %
1.	Организация занятия	Мобилизовать внимание студентов на данное занятие
2.	Определение темы, мотивации, цели, задач занятия	Раскрыть практическую значимость занятия в системе подготовки к профессиональной деятельности, сформировать мотив и, как следствие, активизировать познавательную деятельность студентов
II. Основная часть занятия			80-90%
1	2	3	4
3.	Контроль исходных знаний, умений и навыков	Проверка готовности студентов к занятию, выявление исходного уровня знаний, умений и навыков
4.	Общие и индивидуальные задания на СРС в учебное время	Дифференцированное ориентирование студентов к предстоящей самостоятельной их работе
5.	Демонстрация методики	Показать ориентировочную основу действия (ООД)
6.	Управляемая СРС в учебное время	Овладение необходимыми общекультурными, профессиональными компетенциями, исходя из конкретных целей занятия
7.	Реализация планируемой формы занятия (семинар, практическая работа)	Контроль результатов обучения и оценка с помощью дескрипторов
8.	Итоговый контроль	Оценивание индивидуальных достижений студента, выявление индивидуальных и типичных ошибок и их корректировка
III. Заключительная часть занятия			5-10 %
9.	Подведение итогов занятия	Оценка деятельности студентов, определение достижения цели занятия. Преподаватель анализирует работу каждого студента. Подводит итоги занятия, делает выводы, определяет выполнение учебно-воспитательных целей, а также общий уровень подготовки студентов к занятию. Объявляет оценки студентам, отмечает хорошо и слабо подготовленных студентов, отвечает на вопросы.
10.	Общие и индивидуальные задания на СРС во внеучебное время	Указание на самоподготовку студентов, ее содержание и характер

Ориентировочная основа действия (ООД) по проведению практического занятия ( лабораторного, семинарского и т.д.).

1. Подготовить к проверке материалы по СРС (письменные ответы на вопросы домашнего задания, лекции по теме занятия).

2. Охарактеризовать и определить мотивацию, цель и задачи занятия.

3. Входной контроль уровня знаний.

4. Продемонстрировать решения ситуационной задачи по учебной теме согласно ниже представленного алгоритма.

5. Обсуждение алгоритма микробиологической диагностики изучаемых инфекций

6. Микроскопирование препаратов.

7. Итоговый контроль уровня знаний.

Задания для контроля уровня сформированности компетенций в учебное время.

Раздел I.

1. Полиэтиологичность пищевых токсикоинфекций и интоксикаций

2. Таксономия вероятных возбудителей токсикоинфекций (рода сальмонелл, протея) и интоксикаций (стафилококков, анаэробных клостридий)

3. Эпидемиологические и патогенетические механизмы:

а) роль микроорганизма:

- патогенность,

- резистентность,

- изменчивость

б) роль макроорганизма:

- естественная резистентность в разные возрастные периоды,

- входные ворота,

- особенности формирования и течения инфекционного процесса (с учетом возраста заболевшего)

4. Принципы лабораторной диагностики:

- материал для исследования (правила забора, транспортировки, оформления направления)

- методы исследования (бактериологические, серологические, биологические). Основные и вспомогательные

5. Принципы терапии

6. Принципы общей и специфической профилактики

Раздел II.

1. История открытия возбудителей и холеры (Кох Р., Готшлих Ф., Гамалея Н.Ф., Ер-мольева З.В., Хавкин В.А. и др.).

2. Таксономия возбудителей (сем., род, вид, биовар); вибрионы группы 01 и не 01: холерный вибрион. Эль-Тор, серовары RО, 0139, НАГ-вибрионы, галофильные вибрионы.

3. Морфология, её вариабельность, структура, тинкториальные свойства.

4. Культуральные свойства (аэробность, РН среды, температурный оптимум, энергия и характер роста на разных средах). Их варианты.

5. Биохимические свойства (триада Хейберга, биовары).

6. Антигенная структура (А, В-группы по «Н», серовары 139 по «О», НАГ).

7. Бактериофаги вибрионов (холерный и его типы, Эль-Тор, 7 фагов ТЭПВ для НАГ-вибрионов).

8. Эпидемиология (2 типа эпидемий холеры: эпид. вспышки и вялотекущие), сапрофитизм.

9. Природный резервуар, индивидуальная восприимчивость, воздействие внешней среды, роль экологии.

10. Патогенез поражений, роль жгутиков, муциназы, нейраминидазы, токсинообразование (экзо, эндо), компоненты экзотоксина (холерогена).

11. Изменчивость вибрионов.

12. Клинические проявления холеры и прочих вибрионов.

13. Лабораторная диагностика:

а) материал для исследования

б) среды, время и условия инкубации, рН среды,

в) ускоренные методы – РИФ, РНГА, р. иммобилизации, ПЦР, ИФА,

г) 4 этапа исследования больных и анализа трупного материала, бактерионосителей.

14. Принципы лечения, реабилитации больных.

15. Прочие патогенные виды вибрионов: V. harahaemоlyticus, V. alginolyticus, V. vulnificus, V. minicus и др.

16. Клинические формы, особенности диагностики.

17. Профилактика общая, специфическая.

Задания для СРС во внеучебное время

При подготовке к практическому занятию студенту необходимо в рабочей тетради заполнить протокол практического занятия по теме (зарисовать препараты, составить комплексные таблицы, развернутые схемы, заключения и т.д.):

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ВЫПОЛНЕНИЮ ПРАКТИЧЕСКОЙ РАБОТЫ С ПОЛНЫМ РЕГЛАМЕНТОМ ПРОТОКОЛА ЗАНЯТИЯ И ЕГО ОФОРМЛЕНИЕМ

№	Наименование учебного элемента (задания)	Методическое решение	Регламент протокола
1.	Вводный контроль исходных знаний	Домашнее задание с коррекцией на занятии	Записать в протокол сложные вопросы
2.	Классификация пищевых отравлений		Записать с перечнем возбудителей (самоподготовка дома)
3.	Микроскопия возбудителей токсикоинфекций и интоксикаций		Зарисовать (самоподготовка дома)
4.	Установление бактериологического диагноза	Приложение 1 Приложение 4 Приложение 5 Приложение 6 Приложение 7	Зарисовать схему, указать инструменты и приспособления для отбора материала
5.	Проведение биологической пробы при диагностики ботулизма	Приложение 5	Зарисовать схему, написать развернутое заключение
6.	Источники и пути передачи токсикоинфекций и интоксикаций		Составить перечень
7.	Профилактика и принципы лечения токсикоинфекций и интоксикаций		Составить перечень
8.	Классификация группы холерных вибрионов и галофильных вибрионов	Приложение 8	Записать в регламент (самоподготовка дома).
9.	Холерный вибрион 01, НАГ, и галовибрионы в мазках и их ультраструктуру		Зарисовать (при просмотре препарата).
10.	Биологической характеристики видов: V. cholerae, V. cholera el - tor, V. parachemolyticus, НАГ-вибрионов с учетом основных и дифференциально-диагностических признаков	Приложение 8	Составить таблицу (самоподготовка дома).
11.	Название и назначение всех питательных сред с характером роста на них.	Приложение 11	Записать (самоподготовка дома).
12.	Выделение чистой культуры холерных вибрионов и идентификации микробных видов	Приложение 9	Составить схему (самоподготовка дома, коррекция ее на занятии).
13.	Ускоренный метод диагностики холеры при массовой вспышке по З.В. Ермольевой		Составить схему (самоподготовка дома, коррекция ее на занятии).
14.	Ускоренные методы индивидуальной диагностики холеры	Приложение 10	Зарисовать (самоподготовка дома)
15.	Главных и дополнительных факторов вирулентности холерных вибрионов.	Приложение 13	Составить таблицу
16.	Бактериофаги, применяемых при диагностике холеры, и их назначение: фаги С, Эль-Тор, Дрожевкиной-Арутюнова, ХДФ, ТЭПВ и др.	Приложение 12	Составить таблицу
17	Особенностей галофильных вибрионов, их выделения и идентификации	Приложение14	Составить схему

7.3. Задания для самоконтроля подготовки к практическому занятию (тесты и эталоны). Работа с контрольно-обучающими тестами.

Основная:

1. Лекция по теме.

2. Методическая разработка по теме.

3. Микробиология и иммунология / Под ред. академика РАМН, проф. А.А. Воробьева //М.: Медицина, 2008.464с.

4. Поздеев О.К. Медицинская микробиология /М.: ГЭОТАР-МЕД, 2008. 768 с.

5. Борисов Л. Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология /М., 2008. 736 с.

6. Борисов Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. М., 2005. С. С. 30 – 40; С. 41-45.

7. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. Под ред. Воробьева А.А. М., 2006. С. 17 –50; С. 30-50.

8. Шаркова В.А., Забелина Н.Р., Воропаева Н.М., Диго Р.Н., Коршукова О.А., Карпенко Н.В. Учебно-методическое пособие к практическим занятиям по общей микробиологии, вирусологии и иммунологии для студентов медицинских вузов /Учебно-методическое пособие. 2011. Владивосток: Медицина ДВ. 179 с.

Дополнительная:

1. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. С-Пб, 2002. С. 7 - 32.

2. Медицинская микробиология. Под ред. Королюка А.М., Сбойчакова В.Б. С-Пб, 2002. С.21-29.

3. Биргер М.О. (под ред.) Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. М., 1982. С. 20 -28.

4. Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии. Под ред. Воробьева А.А., Быкова А.С. М., 2003. С. С.21 -29. С.78-82, 85-92, 141-181.

5. Бардых И.Д. Экспериментальная оценка эффективности лактобацилл для профилактики и лечения холеры // Журн. Микробиологии, 2001. - №2. - С.68 - 71.

6. Зиатдинов В.Б.Особенности эпидемиологии современной холеры// Журн. Микробиологии, 2000. - №5. - С.87 - 91.

7. Кирьякова Л.С., Хайтович А.Б.Холера как внутрибольничная инфекция //Эпидемиология и инфекционные болезни, 2003. - №5. - С.48-51.

8. Поль де Крюи. Охотники за микробами. М: Наука, 1987.

9.Смирнова Н.И., Кириллина О.А., Кутырев В.В. Генетические маркеры эпидемических штаммов Vibrio choerae (обзор) //Журн. Микробиологии, 2000. - №5. - С. 87 - 91.

10. Смирнова Н.Н., Кокушкин А.М. Эпидемически значимые штаммы холерного вибриона: генетические особенности и возникновение // Эпидемиология инфекционных болезней, 2000. - №3. - С.25 - 29.

11. Аленкина Т.В., Грачева И.В., Девдариани З.Л. Обнаружение холерного энтеротоксина на поверхности клеток холерного вибриона методом непрямой иммунофлуоресценции. В кн.: Акт. вопр. профилакт. чумы и др. инф. забол. Ставрополь; 1994. С. 117.

12. Адамов А. К., Ломов Ю. М., Малеев В. В., Марамович А. С., Мединский Г. М., Наркевич М. И., Подосинникова Л. С., Покровский В. И., Уралёва В. С. Холера в СССР в период VII пандемии / Под ред. В. И. Покровского М.: Медицина, 2000. — 472 с.

13. Девдариани З.Л., Аленкина Т.В., Федорова В.А. Экспресс-диагностика токсигенных штаммов Vibrio cholerae в дот-иммунологическом анализе с помощью моноклональных антител. Клин. лаб. диагн. 1999; 8: 24-33.

14. Либинзон А. Е., Шестиалтинова И. С., Левкович А. А. Методические рекомендации по выявлению нехолерогенных вибрионов электорэкспресс-методом in vitro. Ростов н/Д., 1986.

15. Лабораторная диагностика холеры. МУК 4.2.2218-07: Метод. указания. - М., 2007.

16. Ломов Ю.М., Москвитина Э.А., Безсмертный В.Е. и др. Холера в мире, странах СНГ и России: эпидемиологическая обстановка (1998 - 2007). Холера и патогенные для человека вибрионы. 2008 - № 21. – с. 13-15.

17. Мединский Г. М., Наркевич М. И., Ломов Ю. М., Пинигин А. Ф., Голубев Б П., Алексеенко В. В., Левчишина Г. И., Кюрегян А. А. Справочник-кадастр распространения вибрионов Эль-Тор в поверхностных водоёмах и сточных водах на территории СССР во время 7-ой пандемии холеры / Под общ. ред. Г. М. Мединского, Ю. М. Ломова. Ростов-на-Дону: МЗ СССР РПЧИ, 1991. — 172 с.

18. Москвитина Э.А., Беспалов И.А., Ломов Ю.М., Горобец А.В.//Холера и патогенные для человека вибрионы. -Ростов н/Д, 2001.-Вып.14. - С. 10-12.

19. Онищенко Г. Г., Беляев Е. Н., Москвитина Э. А., Резайкин В. И., Ломов Ю. М., Мединский Г. М. Холера в Дагестане: прошлое и настоящее / Под общ. ред. Г. М. Мединского. — Ростов-на-Дону: Полиграф, 1995.

20. Онищенко Г. Г., Ганин В. С., Голубинский Е. П. Вибрионы не О1 серологической группы и их значение в патологии человека. -М., 2001.

21. Онищенко Г.Г., Кутырев В.В., редакторы. Лабораторная диагностика опасных инфекционных болезней. Практическое руководство. М.: Медицина, ЗАО «Шико»; 2009. С. 61-99.

22. Покровский В.И., Онищенко Г.Г., Черкасский Б.Л. Эволюция инфекционных болезней в России в ХХ веке. - М.: Медицина, 2003. -С. 103-136.

23. Профилактика холеры. Общие требования к эпидемиологическому надзору за холерой на территории Российской Федерации: СП 3.1.1.2521-09. М.; 2010.

24. Холера в СССР в период VII пандемии./Под ред. В. И. Покровского. -М., 2000.

25. Холера в Приморье: эколого-эпидемиологические аспекты // Мурначев Г.П. и соав. – Владивосток: 2009.

26. Щуковская Т.Н., Саяпина Л.В., Кутырев В.В. Вакцинопрофилактика холеры: современное состояние вопроса. Эпидемиол. и вакцинопрофилак. 2009; 2(45): 62-7.

Приложение 1

Методы исследования пищевых токсикоинфекций:

- бактериоскопический (ориентировочный),

- бактериологический (основной),

- серологический (у взрослых - метод ретроспективный, у детей раннего возраста,

иногда - один из основных методов диагностики),

- биологический (вспомогательный).

Материал исследования:

а) остатки пищи, употребляемой больным или продукты, из которых она была приготовлена,

б) смывы с оборудования, инвентаря, тары, посуды,

в) рвотные массы, промывные воды желудка, испражнения,

г) кровь больного для гемокультуры или для постановки р. Видаля,

д) при смертельных исходах - содержимое желудка, тонкого кишечника, кровь из сердца, кусочек паренхиматозных органов.

Взятие материала для исследования

Пищевые продукты. Остатки пищи из тарелок, другой посуды взять полностью стерильным шпателем или обожжённой и остуженной ложкой. Смывы со столов, на которых готовили пищу, делают стерильной марлевой салфеткой или ватным тампоном, помещают в жидкие среды обогащения.

Пробы жидких или полужидких продуктов (молоко, супы, сметана, соусы и т.д.)

после тщательного перемешивания взять стерильными или обожжёнными на огне ложками в количестве 200 мл.

Вторые блюда, колбасные изделия брать по 1-2 порции.

Для исследования консервов взять остатки из открытой банки (преимущественно из вздутых - бомбажных банок)

Для исследования мяса и с мясных изделий берут несколько проб общим весом до 500 граммов из разных мест туши, предпочтительно ткани с лимфатическими узлами, с трубчатых костей.

Выделения больного: Берут рвотные массы в количестве около 50-100 мл, промывные воды - 100-200 мл, фекалии - 50-100 мл.

Кровь для гемокультуры нужно брать из вены в количестве 5-10 мл, для реакции Видаля - 1-2 мл.

После взятия материала все исследования проводят незамедлительно. Во избежание влияния биохимических процессов разложения пробы помещают на лед, в морозильник, а рвотные массы, промывные воды желудка, испражнения - в консервант.

В сопроводительном направлении в лабораторию нужно указать:

а) цель исследования,

б) где, откуда взяты пробы,

в) краткий перечень симптомов, количество пораженных,

г) предварительный диагноз,

д) адрес, по которому следует сообщить о результатах исследования.

Приложение № 2

Приложение № 3

Приложение № 4

Дополнения к схеме.

ЖСА - желточно-солевой агар Г.Н. Чистовича элективен для стафилококков в связи с высоким содержанием хлористого натрия (10 %), а добавленный яичный желток (1 на 100 мл МПА) позволяет выявлять лецитовителлазную активность, которая является одним из показателей патогенности стафилококков. Поэтому ЖСА более четко дифференцирует патогенных представителей, чем кровяной агар.

Реакция плазмоагглютинации:

Микробную массу размешать петлей на стекле в каплях цитратной кроличьей или человеческой плазмы, разведенной 1: 4. Образование хлопьев учитывают в течение 30 сек-1 мин. При наличии плазмоагглютинации штаммы считают патогенными.

Метод Илека и Леви (1950)

Берут чашки с МПА + 5 % отмытых физиологическим раствором эритроцитов барана (кролика, человека). На поверхность питательной среды по диаметру помещают стерильную полоску фильтровальной бумаги, смоченную альфа-антитоксической сывороткой. Отступив 1-2 мл от края полоски перпендикулярно к ней засевают штрихами исследуемые культуры. Посевы инкубируют при +37оС в течение суток, после чего учитывают результаты;

альфа-гемолизин проявляется в виде полного просветления среды вокруг штриха культуры и нейтрализуется альфа-антитоксической сывороткой мазка полоски. Он выявляется на средах с кроличьими и бараньими эритроцитами;

бета-гемолизин на агаре с бараньей кровью дает частичное просветление, зона которого имеет буровато-пурпурный оттенок. Это «тепло-холодовой» токсин и лучше выявляется после дополнительного суточного выдерживания чашек в холодильнике при +4оС по характерному послойному гемолизу бараньих эритроцитов и не нейтрализуется альфа- антитоксической сывороткой. На кроличьих эритроцитах он не активен;

дельта-гемолизин определяется по узкой полоске гемолиза бараньих и кроличьих эритроцитов, не нейтрализуется альфа-антитоксической сывороткой.

Приложение № 5

Микробиологическая индикация ботулизма у больных и пищевых объектах:

В материалах:

- от больного (кровь, рвотные массы, кал. промывные воды желудка),

- из органов труппа (печень, желудок и кишечник с содержимым),

- в пищевых продуктах.

Цели лабораторной диагностики, обнаружение:

- ботулинического токсина и определение его типа;

-возбудителя ботулизма.

Методы исследования:

1. Микроскопический, ориентировочный (окраска по Граму, Ожешко).

2. Бактериологический, основной (в классическом и ускоренном вариантах) с учетом анаэробности.

3.Серологический, серо-биологический, косвенные.

Бактериологический метод исследования:

Правила отбора материала. Необходимо брать:

Кровь - до введения антитоксической сыворотки. Из вены 6-8 мл в стерильную пробирку, выдержать 20 мин при +37оС. Сгусток отделить от стенок пробирки. Исследовать сыворотку (можно брать кровь в пробирку с 4% раствором лимоннокислого натрия в соотношении 3: 1).
Промывные воды желудка - 50-100 мл.
Кал-50-60 мл.
Из трупов (стерильно! ). Поверхность органа прижечь раскаленным шпателем, стерильными ножницами вырезать ткань из глубины органа: кусочки печени - 50-60, отрезки тонкого кишечника (с содержимым), кусочки легочной ткани (50-60), кровь-10 мл.
Продукты (не менее 100 мл): сырье для консервирования,

готовая продукция (рыбные, овощные, мясные консервы), остатки пищепродуктов, послуживших причиной отравления.

Примечание:

Каждый материала брать в отдельные, стерильные банки. Последние тщательно закрывать стерильными пробками, крышками.

Материал тщательно закрывать стерильными пробками и до исследования хранить на холоде, т.к. ботулинический токсин разрушается при комнатной температуре.

Этапы бактериологического исследования:

1. Обнаружение и идентификация ботулинических токсинов:

- цитратную кровь, сыворотку без обработки используют для постановки реакции нейтрализации;

- кал (20-25) растереть в ступке с 50 мл физиологического раствора; выдержать при комнатной температуре 1-1, 5 часа (для экстрагирования токсина эмульсию профильтровать через ватно-марлевый фильтр и использовать фильтрат в реакции нейтрализации;

- пищевые продукты растереть, экстрагировать в физиологическом растворе 1 час., фильтровать через ватно-марлевый фильтр (или центрифугировать при 3000 об/мин. 15-20 мин.).

- органы трупа - экстракты из тканей готовят аналогично (§ 1-3) и используют в реакции нейтрализации.

Реакция нейтрализации.

Для выполнения реакции необходимы:

- 4 мыши (вес 16-18 г),

- смесь противоботулиновых сывороток (типы А, В, С /С1, С2/, Е, Д. J. g, в основном А, В, Е).

Опыт Контроль

0, 5-0, 8 мл фильтрата 0, 5-0, 8 мл фильтрата + 0, 2 мл

(или центрифугата) смеси сывороток (по 0, 01 мл

в/брюшинно каждого типа, содержащих от 50

до 400 ME антитоксических антител).

Примечание: перед введением смесь испытуемого материала и антисывороток выдерживают при +18°С 30 минут.

Наблюдение - 4 дня. При наличии токсина дыхание учащенное, мышцы расслабленные, причем, брюшная стенка «западает», перед гибелью у мышей появляются судороги, развивается паралич.

В случае гибели всех 4 мышей повторить реакцию нейтрализации с разведенным (в 5, 10, 20, 100 раз) экстрактом (или центрифугатом). После гибели животных повторяют

реакцию нейтрализации с моновалентными сыворотками.

Для определения типа токсина берут 6 рядов пробирок.

Ингредиенты			Проб	и р к и
	1	2	3	4	5	6
1.Фильтрат 2.Антитоксическая сы-	2, 4	2, 4	2, 4	2, 4	2, 4	2, 4
' воротка типа А	0, 6	-	-	-	-	-
- ”- типа В	-	0, 6	-	-	-	-
- ” - типа С	-	-	0, 6	-	-	-
- ” - типа Е	-	-	-	0, 6	-	-
- ” - типа F	-	-	-	-	0, 6	-
3.Физиологический раствор						0, 6

Выдержать 30 мин. при +18оС, ввести в/б 2 мышам по 1 из на каждой пробирки (для каждой сыворотки - отдельный шприц). Учет реакции через 4, 6 часов, 24 и 96 часов.

При наличии токсина выживут мыши, получившие смесь токсина и гомологичной сыворотки. Например, если погибнут все мыши, кроме тех, которым введен экстракт с сывороткой типа А, то в материале содержится токсин типа А.

Для определения токсинемии

Ингредиенты	Пробирки
	1	2	3
1. Сыворотка больного	1, 8	1, 8	1, 8
2. Антитоксическая сы
воротка типа А
3. -”- типа Б	0, 4	-	-
4. - ” - типа Е		0, 4	-
	-	-	0, 4

30 минут при комнатной температуре, содержимое пробирок - по 1.0 мл ввести двум мышам в/б.

Учет по вышеописанным правилам.

Приложение № 6

Приложение № 7

Приложение № 8

Мероприятия по диагностике и профилактике госпитальных (внутрибольничных)

Сальмонеллезов

Рост заболеваемости сальмонеллезами происходит за счет штаммов, обладающих некоторыми биологическими особенностями: множественной антибиотикорезистентно- стью и пониженной вирулентностью для белых мышей. Такие штаммы получили название «госпитальных», причем считалось, что указанными свойствами могут обладать лишь S.typhimurium. Они с одинаковой частотой обнаруживаются у больных в семейных, больничных и других очагах, у животных, из объектов внешней среды и из пищевых продуктов.

С увеличением устойчивости к антибиотикам, как правило, снижается патогенность популяции, что придает ей селективные преимущества перед другими популяциями, и в конечном итоге, приводит к широкому её применению. Этим изменениям в первую очередь, подвергся наиболее распространенный серовар - сальмонелла тифимуриум, который может быть признан “убиквитарньдм’ сероваром, поскольку обнаруживается у всехпредставителей мира животных. Это свидетельствует о большой роли с/х животных как источников инфекции при сельмонеллезах. Болезнь чаще проявляется у детей. При этом взрослые играют роль промежуточных источников инфекции, перенося инфекцию главным образом бессимптомно.

Случаи госпитальных сальмонеллезов наиболее часто регистрируются в детских отделениях центральных районных больниц, реже в соматических детских больницах, родильных домах и других лечебных учреждениях и совсем редко в инфекционных больницах и отделениях.