ПЕРЕЧЕНЬ ОСНОВНЫХ ДОСТИЖЕНИЙ ГЕННОЙ ИНЖЕНЕРИИ В МИКРОБИОЛОГИИ

Бактериальный объект	Донорный ген-материал	Достигнутый эффект 1
Е. coli	Ген        инсулиносинтеза человека	Синтез человеческого инсулина эшерихиями
Е. соli	Ген синтеза интерферонов человеческими лейкоцитами	Синтез человеческого интерферона эшерихиями (реаферон)
Е. coli	Ген    синтеза        прочих гормонов человека	Синтез человеческих гормонов эшерихиями

                                                                                                                                              

                                                                                                                                           Приложение  2

МОДИФИКАЦИОННАЯ ИЗМЕНЧИВОСТЬ БАКТЕРИЙ (ВРЕМЕННАЯ)

 

Объект - бактерии	Изменяющий фактор и контроль	Получаемый эффект изменчивости
Vibrio cholerae	10% р-р NaCl	Полиморфизм: шарообразные клетки в контроле извитые, в виде «запятой»
Proteus vulgaris	МПБ с 0,2% карболовой кислоты, посев в конденсат	Потеря подвижности, ползучего роста нет (в отличие oт контроля)
Serratia marcescens	Рост при разных температурах: 22, 37 С0	Пигментообразование только при низкой температуре +22 С0

При переводе в оптимальные условия наступает реверсия - полное восстановление исходных характеристик.

                                                                                                            Приложение  2а

МОДИФИКАЦИОННАЯ ИЗМЕНЧИВОСТЬ (ДЛИТЕЛЬНАЯ)

Вид изменчивости	Действующий фактор	Возможность реверсии
Лекарственная резистентность. Фильтрующаяся форма Диссоциация на S-и R- формы L- формы бактерий	Лекарственный препарат (антибиотик). Массивная антибиотикотерапия. Экстремальные условия. Антибиотики и прочие препараты	После многократных пересевов на оптимальную среду.     - « -   После прекращения действия индуцирующего  фактора (не всегда)

Приложение 3

ЭКСПЕРИМЕНТ ПО ВОССТАНОВЛЕНИЮ (РЕВЕРСИИ) ФИЛЬТРУЮЩИХСЯ ФОРМ БАКТЕРИЙ

- Приготовить фильтрат патологического материала (например, мочи), использовав бактериологический фильтр Зейтца,

- засеять чашки с МПА культурой Sarcina lutea,

- нанести фильтрат пипеткой или петлей на посев сарцины. Поставить в термостaт на 1-3 суток при +39 С⁰,

- учесть готовые результаты посева. Зарисовать колонии ревертанты на сарциновом газоне.

Приложение  4

ВИДЫ ГЕНОТИПИЧЕСКОЙ ИЗМЕНЧИВОСТИ

Вид изменчивости	Микробная модель компонента	Результат
Трансформация	Пневмококки в голодной среде: серотип I - живой, III- убитый ДНК пневмококка серотип III и живой пневмококк I серотипа	Выделены из среды живые серотипы I и III     - « -
Трансдукция с лизогенной конверсией	Бактерии нетоксичные, бактериофаг из токсичных	Выделены токсичные бактерии
Генетическая половая рекомбинация (межвидовая)	Донор F+ E.coli селективные признаки Lac+, Str 5. Реципиент F-  S. flexneri признаки Lac-, Str7	Генетические рекомбинанты Lac+, Str2

Приложение №5

 СХЕМА ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛОВЫХ ГЕНЕТИЧЕСКИХ РЕКОМБИНАНТ

- дизентерийные бактерии F^-  - реципиент с главными селективными признаками: Lac^-, Str(r);

- кишечные палочки F⁺ -донор с главными селективными признаками Lac⁺, Str(s);

- минимальная среда (голодная, солевая);

- стрептомицин в порошке;

- 1% раствор лактозы;

- эозин - метиленовый индикатор.

Этапы проведения эксперимента:

- стандартизация скрещиваемых культур по Пехову А. и Абидову А.
Реципиент F^- - I млрд. мт/1 мл.

Донор - 250 млн. мт/мл,                                                                           

- скрещивание культур путем приготовления бактериального кросса F⁺ : F^- в соотношении 4:1,

- инкубация в термостате для конъюгации, 1 час при +37С⁰,

- готовят минимальную среду с селективными добавками и индикатором: расплавить, остудить до +45С⁰, добавить 150 ЕД/мл стрептомицина, 1% лактозы и индикатор эозин 0,4 мг/мл +метиленовая синь 0,065 мг/мл,

- высевают на среду бактериальную смесь кросса и отдельно - исходные культуры на селективные среды,                                                     

- инкубировать в термостате при +37С⁰ 1-5 суток,

- учет-обнаружение и изучение половых гибридов. На селективной среде они вырастают только в виде цветных колоний, поскольку рекомбинанты унаследовали от донора признак Lact +, а от реципиента – Str(r).

⇐ Предыдущая1234

Поделиться: