Разбавление свежевзятой спермы.

 Для разбавления спермы используют спец. среды, создающие следую­щее преимущества:

- получается большой объем спермы,-важное практическое знач для интенсивного использования ценных производителей;

- в сперме, смешанной с некоторыми разбавителями, спермии переходят из акт. в анабиотическое состояние;

- удлиняется срок переживаемости спермиев вне организма вследствие за­мены секретов придаточных половых желез искусственной средой и ослабления концентрации в сперме токсическихх в-в, бактериостатического дей­ствия добавляемых в разбавитель анти­септиков и других веществ.

Перед разбавлением эякулята опре­деляют подвижность и концентрацию спермиев. Эти показатели должны удовлетворять требованиям инструкции, по­скольку они являются основой для определения степени разбавления, которая выражается отношением, показывающим объем среды, добавляемой на каждый миллилитр эякулята, и имеет зпределенные пределы у каждого вида производителей.

Эякулят разбавляют, добавляя по частям необходимое количество раз­бавителя и тщательно перемешивая жидкость. Обычно сперму быка раз­бавляют в 10-15р. В некоторых странах разбавляют сперму; 1 : 20 : 25 : 50. Отдельные специалисты рекомендуют разбавлять сперму быка 1: 100 и даже 1 :200. Такое различие в степени разбавления объясняется разным подходом к определению количества спермиев, необходимого для опло­дотворения. Одни авторы считают, что в дозе для осеменения одной коровы дол­жно быть минимум 10—15 млн живых спермиев, другие — 25—50 млн.

Состав сред меняется в зависимости от вида животных и способа хранения спермы. Разбавляют эякулят не позднее чем через 30 мин после его получения.

Все компоненты для приготовления разбавителей должны быть химически чистыми, проверенными на токсичность и соответствовать ГОСТу, указанному в инструкции по искусствен осеменению. Компоненты хранят в сухом темном месте в плотно закр банках. Биологический контроль oбязателен для новой серии каждого препарата, особенно антибиотиков, так как некоторые из могут оказаться губительными для спермиев. Разбавители необходимо готовить только на дистиллированной воде, в кот нет хлористых соединений, разр. оболочку спермиев.

Глюкоза, фруктоза, лактоза, сахароза и гликокол (аминоуксусная к-та) снижают электропроводность раств, предупреждая агглютинацию спермиев, связанную с потерей ими электрич зарядов. Глюкозу и фруктозу спермии могут использовать как источник энергии.

Для ослабл холодового шока – желток кур яйца.

Вв а-биотики для задерж роста микроорг.

Среду нужно готовить с учетом того, что ее компоненты делятся на термоус­тойчивые, которые можно стерилизо­вать физическими методами (кипяче­ние, автоклавирование), и термочувствительные (желток куриного яйца, глицерин, спермосан), не подвергаемые стерилизации. Сначала растворяют в воде термоустойчивые компоненты и 10 мин стерилизуют в кипящей водяной бане. Остужают до 30—35 "С и добавля­ют термочувствительные компоненты. Затем среда находится при указанной температуре не более 4 ч в водяной бане или термостате. Остатки неиспользо­ванных сред выбрасывают.

Перед разбавлением среда и сперма должны быть одинаковой температуры. (это все из уч)

(Из тетради)-физиолог.растворы для разбавления спермы:

1)0,9%р-р хлористого натрия готовят:на 100 мл воды берут 0,9 г NaCl доводят до кипения, затем охлажд. До комнатной температуры. (это можно закрыть бумажной крышкой)

2)1% р-р двууглекислого Na (NAHCO3) готовят: Воду нагрев.до кипения, затем охлажд до 40 градусов,навескуДВУУГЛЕКИСЛОГО НАТРИЯ РАСТВОРЯЮТ В ВОДЕ 0,9-1 Г.(при достижении температ. 60 градус. И больше Двууглекислый натрий разлагается)

3)2,9% р-р лимонно кислого Na (цитрата)

-х замещенного 5-и водного. Делают навеску 97,1 мл дист.воды 2,9 г лимонно кислого натрия, затем поместить в водяную баню на 10 мин. Готовят ежедневно. Его готовят в запаянных ампулах. (живут от 2,5 до 3,5 концентрации)

Все эти растворы можно исп. Для разбевления спермы,но сперматозоиды живут не долго.

33.Хранение разбавленной спермы при нулевой и комнатной температурах.

Кратковременное хранение спермы при комнатной температуре (16—20 °С). Для хранения спермы хряков широко используют хелатные среды (см. табл. 8). Хелатон (трилон Б) — сокращенное название двунатриевой соли этилендиа- минтетрауксусной кислоты. Это соединение при комнатной температуре инактивирует ферменты, подавляя таким образом обмен веществ у спермиев. Действие хелатона снимается, если сперма оказывается подогретой до температуры тела животного и спермии начинают двигаться. Это происходит после введения спермы, разбавленной хелатной средой, в половые органы самки.

Известны также среды с угольной кислотой для хранения спермы быков, баранов и хряков при комнатной температуре, но они не получили широкого распространения.

Кратковременное хранение спермы при температуре тающего льда (2—5 °С). Такая температура пригодна для хранения спермы быка, барана и жеребца. Температура, близкая к 0 °С, значительно удлиняет переживаемость спермиев и замедляет обменные процессы; дыхание и фруктолиз спермиев быка и барана тормозятся в 20—25 раз по сравнению с интенсивностью этих процессов при температуре тела животных (Н. П. Шергин).

Для охлаждения спермы используют холодильник или термосы различной конструкции, в которых температура до 2—5 °С. Применение желточных разбавителей значительно повышает устойчивость спермиев к температурному шоку, но полностью не устраняет его. Поэтому сперму необходимо охлаждать медленно и постепенно. После разбавления сперму быка выдерживают при комнатной температуре (18—20 °С) 20— 30 мин. Затем ампулы, флаконы или пробирки со спермой обертывают небольшим слоем ваты, помещают в полиэтиленовые мешочки и кладут в холодильник или термос со льдом. Мешочки со спермой укладывают так, чтобы они сверху были закрыты кусочками льда, что обеспечивает необходимую температуру (2—5 °С). При такой методике хранения сперму быка используют для осеменения коров максимум 3 сут с активностью не ниже 7 баллов, хотя ее жизнеспособность сохраняется более длительное время.

Через 24 ч хранения разбавленной спермы быка при температуре 2 °С перфораторий спермия несколько увеличивается, становится более контрастным, а через 72 ч он набухает и начинает распадаться (Г. В. Зверева и Л. А. Черномаз). Следовательно, качество спермы и ее оплодотворяющая способность с каждым днем хранения снижаются. Разбавленную сперму барана используют для осеменения овец в течение 24 ч с активностью не ниже 8 баллов. Исследования А. И. Лопырина и

В. К. Рабочева показали, что свежеполу- ченная сперма барана сохраняет оплодотворяющую способность в половых органах овцы в течение 27—30 ч. Этот показатель при хранении спермы при нулевой температуре в течение суток снижается на 20 %, а через 2 сут — почти на 30 %.

Сперму ж е р е б ц а используют для осеменения кобыл после хранения ее не более 2 сут с активностью не ниже 5 баллов.

При хранении спермы любым способом всегда следует учитывать неодинаковую способность спермиев реагировать на охлаждение. Такое свойство спермиев отмечается не только у разных производителей, но и у разных эякуля- тов одного и того же производителя. У некоторых быков и хряков сперма при 0

°С сохраняется плохо, а при температуре 4—5 °С получаются удовлетворительные результаты. В производственных условиях для хранения спермы при температуре 2—5 °С пользуются термосами, сконструированными специально для искусственного осеменения.

В обычном пищевом термосе вместимостью 1 л при наличии в нем не менее 200 г льда температура поддерживается в пределах 0—1 °С. При хранении на морозе ниже минус 5 “С на термос следует надеть войлочный или ватный чехол. Если температура ниже минус 20 °С, термос заполняют не льдом, а холодной водой (5—8 °С). Крышку и горловину термоса смазывают вазелином или маслом, чтобы они не смерзались. В термосах, заполненных водой, при сильных морозах сперма сможет храниться в течение 2—3 сут (до замерзания 2/3 воды).

Долговременное хранение спермы. В процессе хранения спермы при 2—5 °С в ней протекают обменные процессы, отрицательно влияющие на оплодотворяющую способность спермиев. Длительное хранение половых клеток возможно только в условиях полного анабиоза, когда все биохимические процессы сильно замедляются.

Научно обоснованную теорию анабиоза при замораживании животных сформулировал известный русский ученый П. И. Бахметьев (1902). Изучение анабиоза у животных и растительных организмов показало, что одной из причин анабиотического состояния является потеря воды цитоплазмой клеток в результате охлаждения. Сложное явление анабиоза явилось основой к проведению исследований по хранению спермы при низких температурах. Первые опыты по замораживанию спермы жеребца при температуре минус 15 °С были проведены И. И. Ивановым (1907). Затем исследованиями его сотрудников К. Н. Кржишковского и Г. Н. Павлова была показана способность спермиев млекопитающих и человека переносить охлаждение в течение длительного времени при температуре минус 23 °С. Позднее Янель (1938) нашел, что спермии человека обладают исключительно высокой устойчивостью к охлаждению в жидком азоте (минус 196 °С) и даже в жидком гелии (минус 269 °С).

В 1948 г. И. В. Смирнов впервые осуществил замораживание спермы жеребцов, кроликов, быков и баранов в пакетах из алюминиевой фольги на поверхности твердого диоксида углерода (минус 79 °С) и в парах жидкого кислорода (минус 183 °С). Однако большая часть спермиев погибала, и после оттаивания лишь 5—30 % спермиев сохраняли активное поступательное движение. Применяя многократное осеменение такой спермой на протяжении стадии возбуждения полового цикла, И. В. Смирнов в 1950—1951 гг. получил ягнят и телят.

В дальнейшем английские ученые Полдж и Раусон (1952), используя защитное действие глицерина при охлаждении спермиев, разработали пригодный для производства метод длительного хранения спермы быка в жидком азоте (минус 196 °С).

⇐ Предыдущая567891011121314Следующая ⇒

Поделиться: