Контроль качества сохраняемой спермы

 Контроль качества сохраняемой спермы в процессе хранения спермы на пунктах искус­ственного осеменения необходим контроль ее каче­ства. Основным методом контроля является оценка по подвижности.

Сперму, сохраняемую при плюсовых температу­рах, проверяют на подвижность ежедневно (перед осеменением), сохраняемую при 196°С — не реже одно­го раза в 5 суток.

В ряде случаев возникает необходимость прове­дения углубленного контроля качества сохраняемой спермы. При этом сперму тестируют по числу спермиев с ПД в спермодозе, выживаемости спермиев при температуре 38°С, количеству апатогенных микробов в дозе, наличию возбудителей инфекционных болезней.

 

 

Рис. 33. Нормальная сперма под микроскопом

 

В замороженно-оттаянной сперме быка и барана, помимо этого, определяют состояние акросом спермиев.

Количество спермиев с поступа­тельным движением (ПД) в спермодозе находят рас­четным путем; для этого надо располагать следующи­ми данными: процент подвижных спермиев, концент­рация спермиев (млн/мл), объем спермодозы.

 Выживаемость спермиев при температуре 38°С тесно коррелирует с ее оплодотворяющей способнос­тью. Для проведения работы необходимо иметь биоло­гический термостат, микроскоп, обогревательный столик. Берут 3 чистых стерильных флакона из-под ан­тибиотиков, в каждый вносят 1 мл 2, 9%-ного раствора цитрата натрия. Флаконы ставят на 4-5 мин в во­дяную баню, имеющую температуру 39-40°С. В нагре­тую среду опускают по 1 грануле спермы, извлеченной из сосуда Дьюара. Флаконы закрывают резиновыми пробками, на каждой пишут шариковой ручкой ушной номер производителя и номер повторности.

После оттаивания спермы определяют подвиж­ность спермиев в баллах. Флаконы со спермой перено­сят в термостат с постоянной температурой 38°С. Под­вижность спермиев определяют через каждый час до тех пор, пока останутся лишь единичные подвижные спермии.

Результаты последовательной оценки спермы за­носят в специальный бланк. На основании записей оп­ределяют относительную (в часах) и абсолютную вы­живаемость спермиев. Согласно действующему ГОСТу, абсолютный показатель выживаемости спермиев в за­мороженно-оттаянной сперме быка должен быть не менее 12, относительной — не менее 5 ч. Если за каж­дый час в течение всего срока исследования подвиж­ность снизилась менее чем на 0, 6 балла — выживае­мость высокая, на 0, 6-0, 9 балла — средняя, более чем на 0, 9 балла — низкая.

В процессе технологической обработки и хранения спермы возможна потеря спермиями акросомы, что ве­дет к утрате ими оплодотворяющей способности. Поэто­му для объективной оценки оплодотворяющей способ­ности спермиев нужно знать состояние их акросомы.

Для определения состояния акросомы спермиев быка (барана) на чистое предметное стекло наносят каплю свежеполученной спермы, к ней добавляют каплю 2%-ного водного раствора пиронина и переме­шивают до получения однородной розовой окраски, затем добавляют 2 капли черной туши и снова хорошо перемешивают палочкой. Из приготовленной смеси делают тонкий мазок, высушивают на воздухе и ис­следуют при 300-600-кратном увеличении микроскопа. Подсчитывают 200 спермиев, дифференцируя их на биологически полноценные (с сохраненной акросомой) и неполноценные (с разрушенной акросомой). В свежеполученной сперме быка и барана должно быть не менее 70% спермиев с сохраненной акросомой, в оттаянной — не менее 40%.

Для бактериологического исследования берут замороженную сперму объемом 2-5 мл и отправляют в ветеринарную лабораторию в малогабаритном сосуде Дьюара с жидким азотом. В лаборатории готовят серийные разведения стерильным физиологическим ра­створом. Из пробирок с разведениями 1: 100 000, 1: 10 000, 1: 1000 набирают стерильной пипеткой 0, 5 мл содержимого и равномерно распределяют на повер­хности мясопептонного агара, заранее разлитого в бактериологические чашки. Чашки выдерживают 15-20 мин (до полной абсорбции жидкости в агар), затем переворачивают вверх дном, маркируют стеклографом и переносят в термостат на    48 ч. Выросшие микробные колонии подсчитывают по всей площади чашки с последующим пересчетом на 1 см³.

Для определения колититра в три пробирки со средой Булира вносят по 1 мл спермы в разведениях 10, 100, 1000 раз. Пробирки с посевами инкубируют в термостате при температуре 43-44°С в течение 24 ч. На наличие кишечной палочки указывают изменение цвета среды от вишнево-красного до желтого, помутнение и газообразование.

Сохраняемая сперма считается пригодной к использованию при соответствии следующим требовани­ям (табл. 9).

 

Таблица 9

⇐ Предыдущая15161718192021222324Следующая ⇒

Поделиться: