Количество гемоглобина и скорости свертывания крови

Цель: определить резистентность эритроцитов, количество гемоглобина и скорость свертывания крови.

Умения и навыки: научиться готовить растворы, определять максимальную и минимальную резистентность, пользоваться гемоглобинометром, определять время свертывания крови.

Материалы и оборудование: штатив с пробирками, пипетки градуированные (для воды и 1%-го раствора соляной кислоты), центрифуга ручная, цитратная кровь, 1%-ны раствор хлористого натрия, дистиллированная вода, гемоглобинометр ГС-3, глазная пипетка 0, 1н раствор НСL, дистиллированная вода, спирт, эфир, 5%-ный спиртовой раствор йода, вата, дефибринированная кровь. Объект исследования – корова, собака, кролик.

 

Актуализация опорных знаний

1. Виды гемолиза в крови
2. Что влияет на скорость свертывания крови?
3. Форменные элементы крови?
4. Что такое гомеостаз?
5. Состав крови
6. Для каких целей изучают группы крови у животных?

 

Задание 1: Определение резистентности эритроцитов.

1. Готовят растворы хлористого натрия различной концентрации - от 0, 9 до 0, 1%. В каждую пробирку вносят по 5 капель цитратной крови. Жидкость в пробирках хорошо перемешивают стеклянной палочкой и центрифугируют 15 минут.

2. Расставляют пробирки в штативе в порядке уменьшения в растворе концентрации хлористого натрия.

3. Отмечают, в каких пробирках произошел частичный гемолиз (минимальная резистентность), а в каких – полный (максимальная).

 

№ пробирки	Раствор NaCl разной концентрации	Цитратная кровь (капли)	Результат
1	0, 1	5
2	0, 3	5
3	0, 6	5
4	0, 9	5

 

Выводы

 

Задание 2: Определение количества гемоглобина.

1. Количество гемоглобина определяют колориметрическим способом, основанным на том, что исследуемую кровь путем разбавления доводят до окраски, одинаковой со стандартным раствором. Прибор для определения количества гемоглобина в крови называется гемоглобинометром. Две крайние пробирки в штативе запаяны, они содержат стандартный раствор солянокислого гематина: соединение гемоглобина с соляной кислотой. Средняя градуированная пробирка предназначена для исследуемой крови. Она имеет деления, которые показывают количество гемоглобина в граммах на 100 мл крови, то есть концентрацию гемоглобина в граммах-процентах (г/%). К прибору приложены пипетка на 0, 02 мл и тонкая стеклянная палочка. 

2. Количество гемоглобина определяют следующим образом. В среднюю пробирку наливают раствор деценормальной соляной кислоты до нижней метки с цифрой 2 г/%.

3. У животного дезинфицируют спиртом или эфиром кожу уха и прокалывают ушную вену, расположенную под кожей наружной поверхности ушной раковины. В капиллярную пипетку набирают 0, 02 мл крови путем осторожного всасывания через трубку с мундштуком. Обтирают ватой кровь с наружной поверхности кончика пипетки, опускают пипетку в пробирку с раствором соляной кислоты так, чтобы её кончик погрузился в нижней слой соляной кислоты, и осторожно выдувают кровь. 

4. После этого, не вынимая из пробирки, пипетку промывают путем 2-3 всасывания соляной кислоты их верхнего прозрачного слоя. Затем пипетку вынимают из жидкости, прикасаются ею к стенке пробирки и выдувают из пипетки содержимое; пипетку удаляют.

5. Смесь крови с соляной кислотой тщательно перемешивают, слегка ударяя пальцем по дну пробирки. После перемешивания кровь гемолизируется, жидкость в пробирке становится прозрачной.

6. Пробирку помещают в штатив прибора и оставляют стоять на 5 мин. За это время красный цвет жидкости переходит в коричневый. Гемоглобин крови под воздействием 0, 1 н раствора соляной кислоты превращается в солянокислый гематин.

7. Спустя 5 мин в пробирку прибавляют по каплям дистиллированную воду до тех пор, пока цвет раствора будет одинаковым со стандартом. Добавляя воду, раствор перемешивают стеклянной палочкой.

8. Уровень раствора ( по мениску) после разведения показывает количество гемоглобина в исследуемой крови в г/%. В последнее время количество гемоглобина выражают на в г/%, а в единицах СИ – в г/л. Для перевода г/% в г/л найденное число гемоглобина умножают на 10 и получают величину в г/л. Для опыта можно использовать свежую дефибринированную кровь.

Вывод:

 

 

Задание 3: Скорость свертывания крови.

Ход работы

Определение времени свертывания крови.

1. Из яремной вены лошади или коровы берут по 2 мл крови а 3 пробирки. В 1-ую добавляют 4 капли 10%-ого раствор хлористого кальция, во 2-ую – 4 капли 5%-ого раствора лимоннокислого натрия, 3-я пробирка служит контролем.

2. Пробирки ставят в штатив и замечают время. Через каждую минуту пробирки наклоняют в одну сторону под углом 45˚, следя за движением крови.

3. Отмечают время, когда кровь перестанет стекать по стенке пробирки и в пробирке образуется сгусток свернувшейся крови.

 

Наименование	1 пробирка с кровью	2 пробирка с кровью	3 пробирка с кровью	Результат
10 % CaCl	4 капли
5 % лимонно кислый натрий		4 капли
Контроль			Контроль

 

4. На обезжиренное и покрытое слоем парафина предметное стекло наносят каплю крови, полученной из вены уха кролика.

5. Замечают время нанесения капли. Спустя полминуты с одного края вводят тоненькую проволочку или щетинку, проводят её до центра и вынимают обратно. Тоненькую проволочку или щетинку сразу же сушат, моют и повторяют процедуру через каждые полминуты.

6. Отмечают время, через которое за щетинкой начинают тянуться нити фибрина. Время появления первых нитей фибрина – это начало свертывания крови. Превращение же капли в плотный кровяной сгусток, который при наклоне стекла на 45˚ -60˚ остается неподвижным, считают окончанием свертывания крови.

 

Вывод:

 

 

Контрольные вопросы:

1. В чем разница между полным и частичным гемолизом?

2. Где применяют хлористый натрий различной концентрации?

3. Каково количество гемоглобина в норме?

4. Что значит – дефибринированная кровь?

5. Что является началом свертывания крови?

 

 

Литература

1 Зеленевский Н.В., Щипакин М.В., Зеленевский К.Н. Анатомия и физиология животных. - СПб-М-Краснодар.: Лань, 2015

2 Георгиевский В.И. Физиология сельскохозяйственных животных. - М.: Агропромиздат, 1990

 

 

_______20___ г.   Оценка________________  Преподаватель________

 

ЛАБОРАТОРНОЕ ЗАНЯТИЕ № 20

⇐ Предыдущая12345678Следующая ⇒

Поделиться: