Лабораторная диагностика сальмонеллеза

Основой диагностики является бактериологический метод. Для исследования берут различные материалы: испражнения, рвотные массы, промывные воды желудка, мочу, остатки пищи, а также исходные продукты, использованные для ее приготовления; смывы с различного оборудования и предметов.

Для диагностики септицемии исследуют кровь.

В качестве сред обогащения используют селенитовый бульон, селенитовый агар, 20% желчный бульон. Среди дифференциально-диагностических сред для первичных посевов и высевов со сред обогащения выделяют селективные среды (висмут-сульфитный агар или агар с бриллиантовым зеленым) и дифференциально-диагностические (Эндо и Левина). Подозрительные колонии пересевают в пробирки с одной из комбинированных сред (Олькеницкого, Клиглера, Ресселя).

Изучают морфологические, тинкториальные, биохимические свойства возбудителей.

С выросшими культурами проводят серологическое типирование по схеме Кауфмана-Уайта. Ставят реакцию агглютинации на стекле с О- и Н-агглютинирующими антисыворотками. По результатам реакции устанавливают окончательный бактериологический диагноз.

Серологическая диагностика используется редко (РА, РПГА).

Разработаны методы ИФА для обнаружения антигенов сальмонелл в крови и моче. В последнее время для индикации и типирования сальмонелл активно используются молекулярно-генетические методы, включая ПЦР со специфическими праймерами.

Лечение

Патогенетическая терапия сальмонеллезов направлена на дезинтоксикацию, восстановление водно-электролитного баланса и гемодинамики. Антибактериальная терапия при нетяжелых формах гастроэнтерита не показана. При генерализованной инфекции назначаются фторхинолоны, при устойчивости к ним – цефалоспорины III поколения (цефтриаксон).

В комплексном лечении сальмонеллезов возможно применить поливалентный сальмонеллезный бактериофаг.

Профилактика

Включает санитарно-гигиенические и противоэпидемические мероприятия; ветеринарно-санитарные мероприятия. В случае возникновения внутрибольничной вспышки сальмонеллеза устанавливается особый режим работы лечебно-профилактического учреждения.

Вакцинопрофилактика не разработана.

 

Иерсинии

Классификация

В род Yersinia входит более 10 видов бактерий, при этом 3 из них содержат патогенных представителей.

Yersinia pseudotuberculosis и Yersinia enterocolitica вызывают алиментарные инфекции – иерсиниозы (псевдотуберкулез и кишечный иерсиниоз).

Yersinia pestis является возбудителем особо опасного инфекционного заболевания – чумы. Y. pestis – это единственный бактериальный представитель, относящийся к I группе патогенности. Данная группа включает в себя наиболее вирулентных возбудителей (вирусов, бактерий), известных в настоящее время.

Генетический анализ иерсиний показал, что Y. pseudotuberculosis и Y. pestis имеют до 80% гомологии ДНК бактериального генома. Однако совершенно очевидные различия в патогенности этих бактерий не позволяют отнести их к одному виду.

Y. enterocolitica имеет 20-50% гомологию с другими иерсиниями в зависимости от вариантов возбудителей.

5.1.6.1. Иерсинии псевдотуберкулеза

Y. pseudotuberculosis впервые выявлены французскими учеными Л. Малассе и В. Виньялем в 1883 г. в материале от умершего ребенка с диагнозом туберкулезного менингита. Позже К. Эберт выделил возбудителя в чистой культуре, изучил свойства и отметил общие с туберкулезом патоморфологические изменения в пораженных органах.

Морфология

Короткие полиморфные овоидные палочки с закругленными концами, хорошо воспринимают анилиновые красители, грамотрицательны. Лучше прокрашиваются по полюсам – биполярно. Спор не имеют, капсулы не образуют.

В мазках из бульонных культур располагаются парами или короткими цепочками. В мазках из агаровой культуры могут быть ветвистые, нитевидные формы. Подвижны при температуре 18-20⁰С, при 37⁰С движение прекращается.

Культуральные свойства

Растет на простых и даже голодных средах.. Разработаны и применяются специальные жидкие и плотные питательные среды. Используют жидкую среду Серова (1% пептонная вода, глюкоза, феноловый красный) или плотную среду Серова (МПА, глюкоза, мочевина, молибденовокислый аммоний, желчь, генцианвиолет, индикатор конго красный – среда темно-вишневого цвета). В качестве селективных сред применяют среды с антибиотиками, которые угнетают рост сопутствующих бактерий.

Оптимальная температура роста 22-28⁰С, могут расти при 4⁰С. Колонии на плотных средах мелкие, полупрозрачные с нежным фестончатым краем, полиморфны по цвету и величине, могут образовывать золотисто-коричневый пигмент. В S-форме колонии напоминают росинки. На плотных средах кроме S-колоний могут появляться R-формы и SR – переходные. При росте на плотной среде дают неприятный запах.

Биохимические свойства

Факультативные анаэробы. Биохимически активны, расщепляют до кислоты многие углеводы: глюкозу, мальтозу, маннит, рамнозу, глицерин и др.; не расщепляют лактозу и сахарозу. Обладают уреазной активностью, восстанавливают нитраты в нитриты.

Антигенная структура

Выделяют Н-АГ (жгутиковый) и соматические О-АГ. По О-АГ различают 6 сероваров. Наиболее вирулентным для человека является серовар О1.

Факторы вирулентности

Не все варианты иерсиний способны вызывать патологические процессы. Это определяется наличием у них факторов вирулентности, которые кодируются хромосомными или плазмидными генами.

Все патогенные иерсинии, независимо от вида, обладают плазмидой pYV (плазмидой вирулентности иерсиний) размером 72 kb. В ее состав входит группа генов, получившая название Yop-вирулон (или вирулон наружных белков иерсиний)

Гены вирулона определяют способность бактерий к адгезии и активной секреции белков вирулентности внутрь пораженных клеток. Это обеспечивает выживание и размножение возбудителей в клетках системы иммунитета с нарушением их защитных функций.

Yop-вирулон кодирует адгезины иерсиний, систему III типа бактериальной секреции (инжектисому), а также эффекторные Yop-белки, которые проникают в клетки-мишени (эпителий кишечника, макрофаги).

Известно до 10 белков данной группы с различными функциями. Некоторые их них обеспечивают поступление остальных факторов вирулентности, образуя поры в мембранах клеток (белки-транслокаторы).

Другая часть белков отвечает за проникновение иерсиний в клетки и подавление фагоцитоза.

Дополнительные адгезины (например, рецепторный белок инвазин)кодируются генами нуклеоида.

Вирулентные штаммы иерсиний могут продуцировать термостабильный энтеротоксин и белки-сидерофоры.

При разрушении бактерий высвобождается эндотоксин с гемолитическими свойствами, который вызывает гемолиз эритроцитов кролика, барана, лошади, но не лизирует эритроциты человека.

Резистентность

Возбудители чувствительны к нагреванию, высушиванию, дезсредствам; устойчивы к холоду, переносят температуры до -25⁰С. Вне организма в молоке сохраняются до 16 дней, могут размножаться; в хлебе – более 20 дней; в масле – до 150 дней; в воде – более 200 дней. Долго сохраняются на свежих овощах, фруктах, в квашениях и могут там размножаться.

Патогенез и характеристика заболевания

Источники инфекции – грызуны, зайцы, лисы, крупный рогатый скот, свиньи и другие животные. Грызуны выделяют иерсинии во внешнюю среду с калом, мочой, загрязняя ее. Это способствует заражению домашних животных, создается дополнительный резервуар инфекции.

Люди инфицируются от грызунов и других животных алиментарным путем через продукты, чаще овощные, не подлежащие термической обработке – квашения, салаты. Случаев заражения людей непосредственно от грызунов чрезвычайно редки. Роль человека как источника инфекции не доказана.

Чаще болеют дети в возрасте от 3-х лет и старше в любой сезон года, но заболеваемость выше в осенне-зимнее время.

Инкубационный период длится в среднем 8-10 дней.

Вместе с пищей бактерии поступают в слизистую оболочку илеоцекального угла, область слепой кишки, аппендикулярный отросток, где происходит их первичная адгезия.

Возбудитель при помощи белка инвазина взаимодействует с β -интегриновыми рецепторами М-клеток лимфоидных фолликулов. Иерсинии проникают в клетки эпителия кишечника и макрофаги, где размножаются.

Подавление фагоцитоза может создать условия для дальнейшего распространения бактерий.

По лимфатическим путям иерсинии попадают в регионарные лимфатические узлы и затем в кровь. Начало заболевания острое, развивается интоксикация, вызванная эндотоксином. Патологические процессы могут возникать в печени, селезенке, легких и других органах.

Клинические формы псевдотуберкулеза самые разнообразные. Развивается воспалительное поражение кишечника с диареей. Часто возникают реактивные артриты. Всем формам сопутствует аллергия в виде крапивницы.

Псевдотуберкулез – это токсикоинфекция с циклическим течением, лимфаденитом, поражением внутренних органов. Летальность составляет до 0, 3%.

Генерализация инфекции возможна у лиц с иммунодефицитами.

Иммунитет после перенесенной инфекции нестойкий, возможны повторные случаи заболевания.

Лабораторная диагностика

Материал для исследования берется различный, но при всех клинических формах обязательно исследуются фекалии.

Возможно использовать экспресс-методы для обнаружения возбудителя в материале – РИФ, а также ИФА для выявления антигенов бактерий.

Основным в диагностике является бактериологический метод. Первичный посев исследуемого материала производят в консервант – фосфатный буфер или жидкую среду накопления Серова. Посевы выдерживают в холодильнике до 30 суток (методика «холодового обогащения»). Это связано с тем, что иерсинии способны размножаться при 4-6^оС, тогда как рост сопутствующей микрофлоры прекращается.

Из первичного посева каждые 3-4 дня делают высевы на плотные среды, например Эндо, МакКонки или в плотную среду Серова. Выращивание производят при комнатной температуре. Подозрительные колонии пересевают на скошенный агар или на сектора среды Эндо.

Выделенную культуру идентифицируют по комплексу морфологических, культуральных, биохимических, серологических свойств, фаголизабельности. Обязательно дифференцируют от возбудителя чумы (Y. pestis) и от возбудителя кишечного иерсиниоза (см. таблицы 15 и 16).

Бактериологический метод позволяет выделить возбудителя только при его достаточном содержании в материале (не менее 10³-10⁶ клеток).

В случае невысокого содержания возбудителей применяют биобактериологический метод. Для накопления иерсиний материалом заражают белых мышей или морских свинок с последующим выделением и идентификацией культуры.

Серологический метод. Применяется на 7-14 дни болезни. Ставится реакция агглютинации (титр 1: 200) или в более ранние сроки – РПГА (титр 1: 100) с набором эритроцитарных диагностикумов, несущих антигены разных типов иерсиний. Реакция ставится в динамике заболевания, регистрируется нарастание титра антител.

Для экспресс-определения ДНК вирулентных штаммов иерсиний непосредственно в материале в настоящее время разработаны методы ПЦР-анализа.

Лечение

В качестве этиотропной терапии применяют фторхинолоны, ко-тримоксазол, цефалоспорины III поколения.

Профилактика заболевания неспецифическая, включает меры по борьбе с грызунами для предотвращения контаминации возбудителями овощей и других продуктов.

 

Возбудители ботулизма

Ботулизм – инфекционная болезнь, характеризующаяся тяжелейшей интоксикацией организма с преимущественным поражением ЦНС, возникающей при употреблении пищевых продуктов, содержащих экзотоксины возбудителя.

Классификация

Возбудитель принадлежит к виду Clostridium botulinum.

Открыт Э. Ван Эрменгемом в 1896 г., выделившим микроб из организма погибшего человека и остатков колбасы, которую тот принимал в пищу (отсюда название: лат. botulus – колбаса).

Морфология

Представляют собой палочки с закругленными концами, размерами 5-9х1, 0 мкм. Образуют субтерминальные споры, поэтому возбудители приобретают вид теннисной ракетки. Подвижны (перитрихи), грамположительны.

Культуральные свойства

C. botulinum – строгий анаэроб. Растет на среде Китта-Тароцци, температурный оптимум 25-35°С. При культивировании в анаэростате на анаэробном кровяном агаре образует мелкие сероватые колонии с зоной гемолиза. В высоком столбике сахарного агара имеет вид пушинок или зерен чечевицы.

Биохимические свойства

Возбудители ботулизма разлагают многие углеводы (глюкозу, мальтозу, глицерин и др.) с образованием кислоты и газа. Обладают отчетливой протеолитической активностью, при распаде белков выделяют сероводород и аммиак, разжижают желатин, коагулируют молоко. Восстанавливают нитраты в нитриты.

Антигенные свойства

Имеют О и Н антигены, сходные у всех представителей вида. В зависимости от антигенной структуры экзотоксина различают 8 сероваров C. botulinum: А, В, С_1(a), С_2(b), D, Е, F, G. Наиболее патогенны для людей серовары А, В, Е и F. Для идентификации возбудителя используется антигенная специфичность токсинов.

Факторы вирулентности

Экзотоксин возбудителя известен как самый сильный из всех биологических ядов. Смертельная доза для человека составляет менее 0, 1 нг/кг веса человека. Ботулинический экзотоксин оказывает сильнейшее нейротропное действие, блокируя нейромышечную передачу.

По биохимическому механизму действия он представляет собой протеолитический фермент Zn-металлопротеазу. Этот фермент с высокой специфичностью гидролизует белки пресинаптических мембран нейромышечных синапсов (везикуло-ассоциированный протеин, синаптобревин, целлюбревин и др.). При этом блокируется накопление и выделение нейромедиатора ацетилхолина, что приводит к нисходящему мышечному параличу.

Молекулярная масса токсина составляет 150 kD. Исходно он представляет собой протоксин, который переходит в свою активную форму под действием протеаз возбудителя или ферментов пищеварительного тракта (трипсина и др.) Образуется молекула, состоящая из двух цепей (легкой и тяжелой), которые соединяются дисульфидной связью. Тяжелая цепь (100 kD) обеспечивает специфическое связывание и проникновение токсина в синапс, легкая (50 kD) вызывает протеолитическую деградацию нейробелков.

Наличие генов, кодирующих экзотоксин ботулизма типов C, D, E связано с наличием бактериофагов в геноме бактерий. Отсюда в единичных случаях ботулизм может вызываться и другими родственными видами клостридий – C. baratii и C. butyricum, которые приобретают данные гены.

Резистентность

Споры C. botulinum высокорезистентны к различным воздействиям, выдерживают кипячение в течение 6 часов, автоклавирование при 120^оС более 1 часа, длительное высушивание, замораживание при -196°С. Сохраняют жизнеспособность в 5% растворе фенола до 1 суток.

Для токсина также характерна высокая устойчивость к нагреванию – при 100°С может сохраняться до 10 минут; устойчив к кислой среде, замораживанию, действию пищеварительных ферментов.

С учетом высочайшей активности токсина, работа с ним ведется в условиях, соответствующих биобезопасности при работе с особо опасными инфекциями (II группа патогенности). Токсин может становиться потенциальным средством биотерроризма и биологического оружия.

 

35 Факторы патогенности … ботулизма

C. botulinum обитают в кишечнике животных, рыб, молллюсков, раков, оттуда попадают в почву с фекалиями. Споры клостридий длительное время находятся в окружающей среде без потери жизнеспособности.

Для размножения возбудителям необходимы анаэробные условия. Такие условия создаются при консервировании грибов, приготовлении мясных и рыбных и консервов, особенно в домашних условиях. После прорастания спор вегетативные формы продуцируют токсин. Он накапливается при аутолизе возбудителей. Образование токсина угнетается в кислой среде и при повышенной (6-8%) концентрации NaCl в продуктах.

Алиментарный путь передачи приводит к развитию пищевого ботулизма – наиболее частой формы болезни. Редко возможен раневой ботулизм. Эта форма возникает при загрязнении некротизированных тканей раны почвой.

Представляет опасность ботулизм новорожденных. Он связан с длительным выживанием возбудителя в кишечнике детей до 6 месяцев жизни, где отсутствует полноценная нормальная микрофлора. В этом случае возбудитель продуцирует токсин непосредственно в кишечнике.

Ботулинический токсин обладает нейротропностью. Он попадает с пищей в кишечник и адсорбируется на клетках эпителия. После активации под действием протеаз быстро всасывается через стенку желудка и тонкого кишечника в кровь и обусловливает длительную токсинемию. Токсин накапливается в периферических нервных окончаниях мотонейронов передних рогов спинного мозга и бульбарных отделов ЦНС. При этом он попадает в нервно-мышечные синапсы и ингибирует кальций-зависимое освобождение ацетилхолина. В результате наступает симметричный вялый нисходящий паралич мышц.

Инкубационный период зависит от количества поступившеего токсина. Он продолжается от 6-24 часов до 2-10 дней или даже более длительно. Чем короче инкубационный период, тем тяжелее протекает болезнь.

Ботулизм начинается остро, при этом температура остается нормальной. Возможны различные варианты болезни с преобладанием симптомов поражения ЖКТ или расстройством зрения и дыхательной функции. В первом случае заболевание начинается с появления сухости во рту, тошноты, рвоты, диареи. Во втором случае первые проявления болезни связаны с нарушением зрения (больной жалуется на туман перед глазами и двоение). В результате паралича мышц гортани появляется осиплость голоса, а затем голос может пропадать. Отмечается расстройство аккомодации, опущение верхнего века (птоз), расширение зрачка – мидриаз, головная боль, головокружение.

Кроме поражения ЦНС, ботулотоксин вызывает периферические нарушения нервно-мышечной передачи, которые проявляются вялостью движений, развитием параличей мышц (глазных, глоточных, гортанных, шеи, конечностей, диафрагмы).

Больной может погибнуть от паралича дыхательных мышц и сердечной недостаточности. Летальность при заболевании составляет 20-40%. При воздоровлении от ботулизма происходит постепенная медленная регенерация синапсов пораженных нейронов.

Иммунитет

После перенесенного заболевания протективный иммунитет не формируется. Антитела, которые вырабатываются в течение заболевания, направлены против определенного серовара токсина.

 

⇐ Предыдущая567891011121314Следующая ⇒

Поделиться: