Урогенитальные воспалительные заболевания женщин

СОДЕРЖАНИЕ

1. ВВЕДЕНИЕ

2. ГЛАВА I: 1. ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ

2.Урогенитальные воспалительные заболевания женщин

2.1. Трихомоноз

2.2. Хламидиоз

2.3. Кандидоз

2.4. Микоплазмоз

2.5. Уреаплазмоз

3. ГЛАВА II: 1. Лабораторная диагностика заболеваний женских половых органов

1.1 Микроскопия

1.2 Методы окрашивания

1.3 Серологические методы

2. Лабораторные исследования отдельных заболеваний

ВВЕДЕНИЕ

Урогенитальные инфекции являются одной из наиболее распространенных инфекций в мире, обусловленных высокой распространенностью среди различных возрастных и социальных групп населения.

Инфекциями мочевыводящих путей принято обозначать группу бактериальных, грибковых и вирусных заболеваний, приводящих к воспалению органов мочевыводящих путей и вызывающих широкий спектр воспалительных состояний. Инфекции мочевыводящих путей широко распространены во всем мире. С этой проблемой каждый год к врачам обращаются десятки миллионов пациентов.

В последнее десятилетие в России и за рубежом регистрируются высокие показатели заболеваемости инфекциями, передаваемыми половым путем (ИППП). Воспалительные гинекологические заболевания, при которых урогенитальные инфекции играют этиологическую роль, относятся к наиболее распространенной патологии в практике врача-гинеколога. По данным ВОЗ ежегодно в мире регистрируется более 333 млн. новых случаев инфекций мочеполовых органов. При этом истинная частота урогенитальных инфекций в мире неизвестна.

По численности заболевания, урогенитальные инфекции вышли на первое место. Актуальность состоит в том, что в настоящее время, большинство молодых девушек начинают вести половую жизнь в раннем возрасте, вследствие чего приобретают множество заболеваний, приводящих к проблемам с женским здоровьем в репродуктивном возрасте и осложнениями в период беременности.

Объект исследования - человек.

Предмет исследования - отделяемое влагалища, мазки с поверхности шейки матки, мазки из цервикального канала.

Цель исследования – выявить проблемы, способствующие раннему развитию нарушений репродуктивной функции.

Задачи:

1. Изучить пути и способы заражений урогенитальными инфекциями.

2. Проанализировать результат лабораторных исследований на идентификацию урогенитальных инфекций, при выявлении патологии.

3. Выявить возрастную группу женщин, чаще подвергающихся бактериальным инфекциям урогенитального тракта.

Гипотеза исследования заключается в том, что человек может заболеть урогенитальным кандидозом не только через половой путь, но и при употреблении антибиотиков.

ГЛАВА I

ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ

К женским половым органам относят яичники, маточные трубы, матку влагалище и наружные половые органы. Яичники – парный орган, в котором различают корковое и мозговое вещество. В корковом веществе образуются половые клетки и вырабатывают овариальные гормоны. Мозговая часть яичника образована соединительной тканью, в которой проходят кровеносные сосуды и нервы. Содержимое влагалища образуется за счет транссудации из капилляров и продуктов разрушения слущенного эпителия влагалищной стенки, к которым примешивается секрет маточных желез, клеточные элементы влагалищного эпителия, а также бактериальная флора.

В женском организме сформированы механизмы, обеспечивающие устойчивость половых органов к возможным воздействиям патогенных факторов. Одним из механизмов защиты является многослойный плоский эпителий стенки влагалища. В клетках поверхностных слоев эпителия у женщин детородного возраста накапливается гликоген. Поверхностные клетки постоянно слущиваются по подвергаются разрушению, про этом гликоген освобождается. Под влияние влагалищных палочек молочнокислого брожение (лактобацилл) гликоген расщепляется до молочной кислоты, которая поддерживает, кислую реакцию влагалищного содержимого и, следовательно, его бактерицидные свойства. В норме рН влагалищного содержимого равно 4, 0 – 5, 0. Микробная флора влагалища обладает антагонистическими свойствам к патогенным и условно – патогенным бактериям. Кроме кислой среды, размножению патогенных микроорганизмов препятствует перекись водорода, продуцируемая лактобациллами. Этот механизм биологической защиты (способность влагалища к самоочищению) характерен главным образом для женщин детородного возраста, при активном функционировании яичников. Естественная устойчивость к инфекциям нарушается в конце беременности, после родов, абортов, при старении. В менопаузе в связи с атрофией эпителия слизистой влагалища изменяется рН, что способствует снижению сопротивляемости к экзо – и эндогенной инфекции.

В зависимости от характера микробной флоры различают 4 степени:

• I степень чистоты - под микроскопом видны только клетки плоского эпителия и лактобактерии (палочки Додерлейна), лейкоциты отсутствуют, рН - кислая (4, 0-4, 5);

• II степень чистоты - лактобактерий меньше, эпителиальных клеток много, встречаются единичные лейкоциты (до 10), рН - кислая (5, 0-5, 5). I и II степени чистоты считаются нормальными;

• III степень чистоты - лактобактерий мало, доминируют кокковая флора и comma variabile, много лейкоцитов (10-30), рН - слабощелочная (6, 0-6, 5);

• IV степень чистоты - влагалищные палочки отсутствуют, преобладает пестрая бактериальная флора, встречаются единичные трихомонады, масса лейкоцитов, эпителиальных клеток мало; рН - слабощелочная.

Урогенитальные воспалительные заболевания женщин

ТРИХОМОНОЗ

В организме человека обитает три вида трихомонад. Trichomonas hominis – кишечная – в толстом кишечнике; Trichomonas tenax – ротовая в полости рта; Trichomonas vaginalis – мочеполовая (влагалищная) – в мочеполовых путях. Мы рассмотрим последний вид трихомонады.

Этиология и патогенез. Trichomonas vaginalis – простейшее из класса жгутиковых (Fragellata), является возбудителем заболеваний урогенитального тракта, как у мужчин, так и у женщин. Имеется лишь одна форма или стадия развития влагалищных трихомонад - трофозит, цист Т. Vaginalis не образует. Паразит представляет собой клетку, ограниченной клеточной мембраной. Форма клетки овоидная или грушевидная с ядром, расположенным ближе к тому концу клетки, на котором расположено 4 жгутика. Вдоль клетки тянется ундулирующая мембрана, по всему телу проходит аксостиль. Величина клетки в длину - 10 мкм, в ширину – 5 мкм. Трихомонады этого вида передаются половым путем. Распространению заболевания способствуют беспорядочные половые связи. Внеполовое заражение встречается редко, например через руки медперсонала, предметы личного туалета (губки, мочалки, полотенца, ночные горшки, постельное белье и т.д.), которыми незадолго до этого пользовался больной. Чаще бытовой путь передачи возбудителя наблюдается у девочек, которые могут также заражаться во время родов от больных матерей. Заражение происходит чаще через предметы общего пользования. Новорожденные девочки могут инфицироваться во время родов при прохождении через родовые пути матери, больной трихомонозом.

Клиника . Выделения из влагалища (обычно желтые, иногда с неприятным запахом); зуд, жжение и гиперемия наружных половых органов; боль при мочеиспускании; боль при половых контактах. Слизистая оболочка влагалища резко гиперемирована, легко кровоточит, покрыта гнойными выделениями.

Трихомоноз занимает первое место по распространенности среди заболеваний мочеполовой системы. Кроме того, трихомоноз держит первенство и среди заболеваний, передаваемых половым путём. По данным Всемирной организации здравоохранения (1999 г.), 10 % населения земного шара болеют трихомониазом. Трихомоноз ежегодно регистрируют у около 170 млн человек.

ХЛАМИДИОЗ

Хламидии — бактерии, являющиеся облигатными внутриклеточными паразитами, которые вызывают различные заболевания человека, животных и птиц.

Этиология и патогенез . Хламидий относятся к порядку Chlamydiales, семейству Chlamydaceae, роду Chlamydia. Различают три вида хламидий — С. trachomatis, С. psittaci, С. pneumoniae, — вызывающих заболевания у человека, животных. Вид C.trachomatis - микроорганизмы, вызывающие заболевания, главным образом, у человека (антропонозные хламидиозы). Они обусловливают разнообразную патологию урогенитального тракта, глаз (трахома) и связанную с ней хламидийную инфекцию иной локализации (венерическую лимфогранулема).

Хламидии — это мелкие грамотрицательные бактерии шаровидной или овоидной формы. Не образуют спор, не имеют жгутиков и капсулы. Строение клеточной стенки хламидий отличается от других бактерий: она представляет собой двухслойную мембрану, ограничивающую периплазматическое пространство, не содержит (или содержит в небольшом количестве) N-ацетил-мурамовую кислоту — основной компонент пептидогликана.

Уникальный цикл развития хламидий характеризуется чередованием двух различных форм существования — элементарных и ретикулярных (или инициальных) телец. Элементарные тельца представляют собой мелкие (размер 0, 2—0, 3 мкм) метаболически неактивные инфекционные частицы, которые располагаются вне клетки. Они имеют толстую оболочку, состоящую из внутренней и наружной мембран, что определяет их относительно высокую устойчивость к неблагоприятным условиям окружающей среды.

Ретикулярные тельца являются вегетативной формой хламидий, обычно имеют овоидную форму и крупнее элементарных телец в несколько раз (их размер 0, 4/0, 6х0, 8/1, 2 мкм). Они располагаются внутриклеточно около ядра.

Урогенитальный хламидиоз — одно из самых распространенных (после трихомонадной инфекции) заболеваний, передающихся половым путем. Это — острое или хроническое инфекционное заболевание, которое характеризуется преимущественным поражением мочеполового тракта, обычно малосимптомным течением, но тяжелыми последствиями — развитием бесплодия.

Заражение человека происходит через слизистые оболочки половых путей. Основной механизм заражения — контактный, путь передачи — половой. Однако возможно инфицирование и через различные предметы (белье, мочалка и др.). Описаны случаи семейного хламидиоза, возникшего в результате контактно-бытового инфицирования. Новорожденные могут заражаться от больной матери при прохождении через родовые пути (хламидиоз глаз, отиты, атипичные пневмонии хламидийной этиологии). Возможна также трансплацентарная передача возбудителя от матери плоду в процессе его внутриутробного развития (неонатальная патология — врожденный хламидиоз). Входные ворота инфекции — как правило, слизистые оболочки половых органов. Патологический процесс начинается через 5—30 дней после заражения. У женщин первоначально поражается шейка матки.

Клиника . Хламидиоз у женщин проявляет себя такими симптомами, как выделения из влагалища слизистые или слизисто-гнойные. От нормальных выделений они могут отличаться неприятным запахом или желтоватым оттенком. Могут появиться несильные боли в области наружных и внутренних половых органов, зуд и жжение (в том числе при мочеиспускании), боли внизу живота — в области малого таза, усиление болей перед менструацией, межменструальные кровотечения. Также у женщины может наблюдаться общая слабость и легкая температура — симптомы интоксикации.

КАНДИДОЗ

Кандидозное поражение слизистой влагалища – кандидозный вагинит является распространенным заболеваниям женщин репродуктивного возраста. Возможно поражение органов мочевыделительной системы (главным образом, пиелонефрит)

Дрожжеподобные грибы рода Candida широко распространены в природе. Заболевания у людей возникают при гормональном дисбалансе, дефектах общего и местного иммунитета, нарушениях нормального микробиоценоза полостей, вследствие передозировки антибиотиков широкого спектра действия, при этом в качестве возбудителя заболевания выступают грибы, находящие в организме. Дрожжеподобные грибы рода Candida относятся к несовершенным грибам — дейтеромицетам (анаскоспоровым). Наиболее распространённые виды среди больных — Candida albicans и Candida tropicalis.

Этиология и патогенез. Дрожжеподобные грибы вида Candida albicans — одноклеточные микроорганизмы овальной или круглой формы. Образуют псевдомицелий (нити из удлинённых клеток), бластоспоры (клетки почки, сидящие на перетяжках псевдомицелия) и некоторые хламидоспоры — споры с двойной оболочкой. Главными признаками, отличающими грибы рода Candida от истинных дрожжей являются следующие: наличие псевдомицелия, отсутствие аскоспор (спор в сумках внутри клеток) характерные культуральные особенности.

В составе сапрофитной флоры влагалища грибы рода кандида выделяются у 10-17% здоровых небеременных и у 25-33% беременных женщин. Принимая во внимание значительную распространенность урогенитального кандидоза, можно предполагать и возможность внутриутробного инфицирования. Заражение новорожденного ребенка происходит от матери (через кожу сосков, при кормлении, через поцелуи), а также от медицинского персонала роддомов и больниц и через предметы ухода (соски, пеленки, клеенки, пеленальники). Урогенитальный кандидоз является широко распространенным заболеванием, может возникать у лиц обоего пола и наиболее часто наблюдается у женщин репродуктивного возраста. Частота регистрации кандидозного вульвовагинита за последние 10 лет почти удвоилась и составляет 30–45% в структуре инфекционных поражений вульвы и влагалища. По данным исследователей, 70–75% женщин имеют в течение жизни хотя бы один эпизод кандидозного вульвовагинита, при этом в 5–10% случаев заболевание становится рецидивирующим. Возникновению урогенитального кандидоза способствуют эндогенные и экзогенные факторы: эндокринопатии, авитаминозы С, В, применение антибиотиков, гормонов, цитостатиков, лучевой терапии, контрацептивных препар лечение антибиотиками широкого спектра действия, которые провоцируют нарушение процесса естественного самоочищения влагалища;

Клиника . Характерное проявление урогенитального кандидоза у женщин - на слизистых образование резко ограниченных серо-белых налетов небольших размеров, как бы вкрапленных в слизистую оболочку вульвы и влагалища. Выделения могут быть серозными, хлопьевидными, творожистыми или густыми сливкообразными.

МИКОПЛАЗМОЗ

Микоплазмы – возбудители урогенитального микоплазмоза. Микоплазмы широко распространены в природе. В настоящее время известно около 100 видов, они имеются у растений, моллюсков, насекомых, рыб, птиц, млекопитающих, некоторые входят в состав микробных ассоциаций организма человека. От человека выделяют 15 видов микоплазм; 6 видов: М. pneunoniae, M. hominis, M. genitalium, М. fermentans (incognitis), M. penetrans и U. urealyticum обладают потенциальной патогенностью. М. pneumoniae колонизирует слизистую оболочку респираторного тракта; М. hominis, M. genitalium и U. urealyticum — «урогенитальные микоплазмы» — обитают в урогенитальном тракте.

Этиология и патогенез. Микоплазмы - самые мелкие прокариотические микроорганизмы, не имеющие клеточной стенки (это придает им сходство с L - формами бактерий) и способные к паразитированию на мембранах эукариотических клеток. Микоплазмы имеют трехслойную цитоплазматическую мембрану, обеспечивающую целостность микробных клеток и частично замещающую в функциональном отношении отсутствующую клеточную стенку. Клетки размером 0, 1—1, 2 мкм, грамотрицательные, но лучше окрашиваются по Романовскому—Гимзе; различают подвижные и неподвижные виды. Минимальной репродуцирующийся единицей является элементарное тельце (0, 7—0, 2 мкм) сферическое или овальное, позднее удлиняющееся вплоть до разветвленных нитей. Клеточная мембрана находится в жидкокристаллическом состоянии; включает белки, мозаично погруженные в два липидных слоя, основной компонент которых — холестерин. Размер генома наименьший среди прокариот (составляет 1/16 генома риккетсий); обладают минимальным набором органелл (нуклеотид, цитоплазматическая мембрана, рибосомы). Простота организации, ограниченность генома о Источник инфекции — больной человек; микоплазмы и уреаплазмы инфицируют 25—80 % лиц, ведущих активную половую жизнь и имеющих трех и более партнеров. Механизм передачи — контактный; основной путь передачи — половой, на основании чего заболевание включают в группу ЗППП; восприимчивость высокая. Урогенитальный микоплазмоз у женщин проявляется в виде бактериального вагиноза, микоплазменного уретрита, воспаления матки, маточных труб и яичников, пиелонефрита. Возбудитель — Mycoplasma hominis. Часто микоплазмоз сочетается с хламидиозом и уреаплазмозом.

Клиника. Для урогенитального хламидиоза характерно отсутствие специфических клинических проявлений и патогномоничных симптомов. Проявления урогенитального хламидиоза достаточно разнообразны: островоспалительные явления, вялотекущий процесс и бессимптомные формы заболевания. Воспалительный процесс в области гениталий развивается после попадания хламидий на те отделы слизистой оболочки, которые выстланы многослойным цилиндрическим эпителием: слизистая уретры, прямой кишки, цервикального канала, где формируется первичный очаг воспаления. В дальнейшем, при отсутствии терапевтического действия на патологический процесс, хламидийная инфекция может перейти на окружающие органы.

УРЕАПЛАЗМОЗ

Уреаплазмоз очень широко распространен, являясь одной из наиболее часто встречающихся инфекций, передающихся половым путем (ИППП)

Этиология и патогенез. Уреаплазмоз — инфекция, вызываемая бактериями Ureaplasma urealyticum. U. urealyticum обнаружена в вагинальной микрофлоре 40-80% сексуально-активных женщин. U. urealyticum относится к классу молликут - грам-положительных бактерий без клеточной стенки, паразитирующих в различных организмах и тканях. Уреаплазмы по размерам приближаются к крупным вирусам и не имеют ни ДНК, ни клеточной оболочки. Это небольшая дефективная бактерия, ее неполноценность заключается в том, что в ходе эволюции она утратила свою клеточную стенку. Их иногда рассматривают как своеобразную переходную ступень от вирусов к бактериям. Свое название уреаплазма получила из-за характерной особенности – способности расщеплять мочевину, которая называется уреолизом. Уреаплазмоз, как правило, - мочевая инфекция, потому что уреаплазмы не могут жить без мочевины.

Передача инфекции происходит в основном половым путем, но возможно и внутриутробное заражение от больной матери во время родов. Также часто дети заражаются от родителей в раннем детстве бытовым путем.

Клиника. Гиперемия и отечность слизистой оболочки наружнего отверстия уретры, влагалища и шейки матки. Слизисто – гнойные выделения из половых путей, болезненность во время половых контактов, зуд, жжение, болезненность при мочеиспускании

ГЛАВА II

ЖЕНСКИХ ПОЛОВЫХ ОРГАНОВ

Материалом для исследования чаще всего служат отделяемое влагалища, мазки с поверхности шейки матки, мазки из цервикального канала. Материал для исследования у женщин следует брать перед менструацией или через 1-2 дня после ее окончания. Рекомендуется воздержаться от мочеиспускания в течение 3-4 часов и половых сношений перед взятием материала. Женщины в день явки на обследование не должны спринцеваться и проводить туалет наружных половых органов. За 5-7 дней до забора материала необходимо прекратить прием химиопрепаратов и лечебные процедуры. Исследуемый материал должен быть без примесей крови. Забор материала проводится во время осмотра влагалищными зеркалами специальными инструментами в зависимости от вида исследования. Обычно материал забирается из заднего свода влагалища, цервикального канала, уретры и прямой кишки.

Приготовление мазка – это нанесение отделяемого, полученного с поверхностей слизистых оболочек, на предметное стекло. Материал для приготовления нативного мазка из влагалища берется раньше всех других вагинальных проб. Участок влагалища, с которой нужно взять пробу, зависит от клинической ситуации. Если имеются обильные выделения и подозревается трихомонадная или кандидозная инфекция, образец берется из заднего свода, где концентрация предполагаемого инфекционного агента наибольшая. Если количество выделений обычное, образец следует брать с боковой стенки влагалища. Образец из шейки матки для микроскопического исследования берется раньше всех других цервикальных образцов или сразу же после взятия мазка для культурального исследования на гонококки.

Клинический материал можно получать с помощью пластиковой бактериологической петли или ватного тампона. Предметные стекла должны быть сухими, чистыми, не поцарапанными. Мазок наносится тонким слоем только на одну сторону предметного стекла. Для приготовления влажного нативного препарата используется отделяемое влагалища. Вагинальный образец берется в зеркалах бактериологической петлей объемом 10 мкл с определенного анатомического участка (задний или боковой свод). На предметное стекло помещается капля физиологического раствора (оптимально 37 ⁰С ). Вагинальные выделения перемешиваются с каплей физиологического раствора, накрывают покровным стеклом и немедленно просматриваются с использованием светового микроскопа. Все пробы наносятся непосредственно на одну сторону препаратного стекла и довольно тонким слоем. В случаях, когда на одно препаратное стекло наносится несколько проб одного и того же пациента или пробного образца не много, рекомендуется наносить пробу на заранее отмеченное место, которое расположено ближе к центру стекла.

Для того, что бы было легче распознавать подвижные возбудители инфекций, например, трихомонад, раствор для смешивания пробы должен иметь температуру около тридцати семи градусов.

МИКРОСКОПИЯ

Порядок работы:

1. Установить препарат на предметный столик и зафиксировать его положение.

2. Поворотом револьверной головки установить объектив (х4 или х10).

3. С помощью макро - и микровинтов получить четкое изображения объекта.

4. Раскрыть апертурную диафрагму конденсора.

5. Поднять конденсор до положения наибольшей яркости освещения в плоскости объекта.

6. Яркость освещения объекта регулировать только диафрагмой конденсора.

При проведение микроскопического исследования необходимо обратить внимания на морфологию объектов, попадающих в поле зрения микроскопа.

Это могут быть:

· Эпителий - норма до 15 клеток в поле зрения. В мазке из влагалища обнаруживается плоский эпителий на разных стадиях развития, в мазке из цервикального канала - цилиндрический эпителий. Увеличение количества эпителиальных клеток свидетельствует об остром или хроническом воспалении органа.

· Лейкоциты - норма:

- для уретры - до 5 клеток в поле зрения,

- для влагалища - до 10 клеток в поле зрения,

- для цервикального канала - до 30 клеток в поле зрения.

Рост числа лейкоцитов всегда указывает на развитие воспалительного процесса – кольпита, уретрита, цервицита. При остром воспалении количество лейкоцитов достигает 100 и более клеток в поле зрения, иногда лаборант пишет, что лейкоциты " покрывают все поле зрения".

· Слизь в норме отсутствует в уретре, в небольшом (умеренном) количестве присутствует во влагалище. Это аморфная масса в виде тяжей, которая образует фон в цервикальном мазке. Количество слизи в канале шейки матки меняется в течение менструального цикла от умеренного до обильного.

· Грибы рода Кандида очень часто обнаруживаются во влагалище и могут иметь форму спор и мицелия. Споры грибов указывают на носительство кандид, тогда как появление мицелия - это признак активного инфекционного процесса, вызванного грибами (кандидоз или молочница).

· Бактерии - в норме во влагалище у девочек, не достигших половой зрелости, и женщин в менопаузе присутствует кокковая флора, у женщин репродуктивного возраста влагалище в норме заселено грам-положительными палочками – лактобактериями.

МЕТОДЫ ОКРАШИВАНИЯ

Окраска по методу Грама

Процедура окрашивания:

1. Препарат высушивают и фиксируют над пламенем горелки несколько секунд. На фиксированный мазок наливают 1 % раствор кристаллического (или генцианового) фиолетового на 1 мин.

2. Препарат промывают струей водопроводной воды

3. Наносят раствор Люголя примерно на 30 секунд.

4. Промывают струей водопроводной воды.

5. Мазок обесцвечивают 95 % спиртом до тех пор, пока наиболее тонкие участки препарата не станут бледно – серого цвета или стекающая жидкость не станет безцветной.

6. Препарат вновь промыавют водопроводной водой.

7. Препарат окрашивают 1 % водным раствором нейтрального красного в течении 3 минут.

8. Краситель сливают, препарат промывают проточной водой.

Препарат микроскопируют, начиная с малого увеличения (объектив х10) затем переводят на большое увелечение (объектив х40), затеим используют иммерсию (объектив х100 иммерсионный), окуляр х7 или х10.

Грамположительные микробы окрашиваются в сине – фиолетовый цвет, грамотрицательные – в розовый или красный.

Серологические методы

ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ (ИФА)

Иммуноферментный анализ является иммунологической реакцией. Она основана на добавлении специфических антител или антигенов в исследуемую среду (чаще всего исследуемая кровь) с последующим ферментативным определением концентрации среагировавших комплексов антиген-антитело. По концентрации образовавшегося комплекса можно судить об уровне определяемого соединения в исследуемой среде.

1. На 1 этапе реакции адсорбируют антигены или антитела на твердой фазе. При этом не связавшиеся с твердой фазой реагенты легко удаляются отмыванием.

2. В сенсибилизированных лунках инкубируют исследуемый образец. В лунках с положительным контролем – стандартные реагенты. При этом на поверхности твердой фазы формируются иммунные комплексы. Несвязавшиеся компоненты удаляют отмыванием.

3. При добавлении конъюгата антитело-фермент или антиген-фермент и связывании его с иммобилизованным иммунным комплексом активный центр фермента остается доступным для последующего взаимодействия с субстратом. Инкубация субстрата в лунках с иммобилизованным конъюгатом приводит к развитию цветной реакции. Эту реакцию можно остановить на нужной стадии, выраженность окрашивания можно оценить визуально или по оптической плотности.

Важный этап любого варианта твердофазного анализа – процедура отмывки от несвязавшихся реагентов. Важно не просто сполоснуть фиксированные на твердой фазе компоненты, а удалить реагенты из всей глубины слоя. Это наиболее длительные и трудоемкие этапы анализа. Промывание проб может производиться в автоматическом режиме с помощью специального прибора – вошера или вручную, многоканальной пипеткой.