Ознакомьтесь с методическим материалом «Медицинские отходы»

Физические свойства

Для исследования физических свойств берут утреннюю порцию мочи, собранную в чистую посуду. При необходимости исследования суточного количества мочи ее в период сбора хранят в холодильнике при температуре 4°С, предварительно определив ее рН (если моча не кислая, ее подкисляют борной кислотой -1, 8 г на 100 мл мочи). При хранении мочи при комнатной

температуре в нее добавляют консерванты: тимол (несколько кристаллов).

Суточное количество мочи (диурез) является важным показателем выделительной функции почек и состояния водного обмена. Диурез взрослого

человека в норме – 1-2 л (50-80 % выпитой жидкости). У детей диурез зависит от возраста: в 1 месяц 60 - 100 мл, 1-3 месяца – 100 - 600 мл, 3-12 месяцев 600 - 800 мл, 1-5 лет – 800 - 900 мл, 5-10 лет – 900 – 1200 мл; 10 - 14 лет – 1000 -1500 мл. Недоношенные дети и дети, находящиеся на искусственном вскармливании, выделяют больше мочи.

Цвет мочи в норме светло-желтый, у детей она обычно светлее. У новорожденных моча бесцветная, на 2—3 день жизни ребенка она становится

янтарно-коричневой и мутной (из-за большого количество мочевой кислоты),

через неделю после рождения ребенка моча становится прозрачной и приобретает светло-желтый цвет. Концентрированная моча окрашена более

интенсивно.

Прозрачность. В норме моча прозрачная. Помутнение ее может быть обусловлено присутствием солей, слизи, липидов, форменных элементов, бактерий. Опалесцирующая моча может выделяться у здоровых людей после

приема пищи с большим содержанием липидов (алиментарная липурия).

Липурия отмечается также при тяжелом сахарном диабете, переломах трубчатых костей, отравлении фосфором, травмах почек, хилурии.

Реакция. В норме при смешанном питании реакция мочи слабокислая или нейтральная (рН 5, 0-7, 0). Сдвиг рН мочи в кислую сторону происходит при сахарном диабете, тяжелой недостаточности почек, почечно-каменной болезни, туберкулезе почек и мочевого пузыря, гипокалиемии и гипохлоремии, при употреблении мясной пищи, вливании большого количества изотонического раствора натрия хлорида, у детей при экссудативном диатезе. Легкий характерный запах мочи зависит от летучих кислот. При щелочной реакции моча имеет запах аммиака, наличие ацетона придает ей запах гнилых яблок. В результате гниения мочи, содержащей белок, кровь или гной, она приобретает запах тухлого мяса. Различные пищевые вещества и лекарственные средства (кофе, лук, чеснок, валериана) могут придавать моче свойственный им запах.

Концентрационную функцию почек можно изучить по изменению относительной плотности мочи в течение суток с помощью пробы Зимницкого.

Находясь на обычной диете, больной собирает мочу в течение суток через каждые 3 часа (всего 8 порций). В каждой порции определяют количество мочи и ее относительную плотность (можно определять также количество натрия хлорида, мочевины и другие показатели, так как чем больше данных, тем более полной является оценка функции почек). При оценке пробы Зимницкого необходимо учитывать количество выпитой за сутки жидкости, деятельность сердца и т.д. У здорового человека показатели пробы Зимницкого следующие: суточный диурез – 50-80 % выпитой жидкости, дневной диурез - 2/3 суточного, ночной - около 1/3 суточного; отмечаются значительные колебания количества мочи в отдельных порциях (от 50 до 400 мл) и относительной плотности мочи (от 1, 003 до 1, 028). Чем разнообразнее данные, тем выше функциональная способность почек.

МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОТНОСИТЕЛЬНОЙ ПЛОТНОСТИ МОЧИ

Определяют ОП мочи комбинированным урометром с делениями от 1, 000 до 1, 050 в цилиндре на 25-50 мл или делительной воронке объемом 25 мл. В делительную воронку помещают урометр и наливают мочу. После снятия показания открывают зажим на шланге, мочу сливают и наливают новую порцию. Систему промывают водой в конце рабочего дня. На определении ОПМ отражается наличие в моче белка и глюкозы, а также любое отклонение температуры, при которой производится измерение.

При значительных отклонениях вносят поправку.

При небольшом количестве мочи ее разводят дистиллированной водой в 2-3 раза, определяют ОПМ и последние две цифры умножают на степень разведения. При наличии нескольких капель мочи ОПМ определяют по 1-му

методу Тода Санфорда и Уэльса.

Ход определения. В цилиндр наливают смесь из разных частей хлороформа и бензола и опускают каплю исследуемой мочи. Погружение капли на дно свидетельствует, что ОПМ выше относительной плотности смеси реактивов. Если капля остается на поверхности - ниже.

Прибавлением хлороформа (если капля идет ко дну) или бензола (если капля остается на поверхности) регулируют относительную плотность смеси, так, чтобы капля остановилась в середине жидкости. В этом случае относительная плотность равна относительной плотности смеси, которую определяют с помощью урометра. ОП мочи можно определить с помощью диагностических полосок при малых количествах мочи (резкая степень олигурии) у детей раннего грудного возраста и при получении мочи из лоханки почки, а также с помощью торзионного урометра и рефрактометра.

ОП мочи дает представление о концентрации растворенных в моче веществ. Нормальное функционирование почек сопровождается колебанием ОПМ в течение суток, что объясняется приемом пищи, воды, потоотделением, дыханием.

Реактивы: а) хлороформ; б) бензол.

Оборудование. Цилиндр на 25 мл и урометр.

Плотности мочи

1. Проведите описание физических свойств мочи следуя алгоритму:

1.1 возьмите исследуемую порцию мочи;

1.2 определите количество мочи;

1.3 налейте исследуемую мочу в цилиндр осторожно по стенке и определите цвет и мутность;

1.4 затем медленно погрузите урометр в цилиндр с мочой и по шкале урометра определите плотность мочи;

1.5 возьмите индикаторную бумагу и погрузите ее быстро в мочу, по изменению цвета определите реакцию данной мочи, сравнивая со шкалой;

1.6 проведите описание 5-6 проб мочи и запишите все результаты в таблицу:

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Метод Бранденберг-Робертс-Стольникова.

Принцип: основан на появлении тонкого кольца после наслоения мочи на азотную кислоту между 2 и 3 минутами.

Реактивы: 50% раствор азотной кислоты или реактив Ларионовой (20-30 г поваренной соли растворить при нагревании в 100 мл дистиллированной воды, дают остыть, фильтруют. К 99 мл фильтрата прибавить 1 мл концентрированной азотной кислоты).

Ход определения: в пробирку наливают 1-2 мл реактива и осторожно по стенке пробирки наслаивают такое же количество мочи.

Появление тонкого кольца на границе двух жидкостей соответствует количеству белка 0, 033 г на литр.

При появлении белкового кольца раньше двух минут после наслаивания мочу следует развести водой, затем производят

повторное наслоение. Результат вычисляют путем умножения 0, 033 г/л на степень разведения. Разведение подбирают таким образом, чтобы при наслаивании кольцо образовалось между 2-3 минутами.

Метод количественного определения белка с сульфосалициловой кислотой

Принцип: белок с сульфосалициловой кислотой дает помутнение, интенсивность которого зависит от концентрации белка. Измерения производят на ФЭКе.

Реактив: 3 % раствор сульфосалициловой кислоты.

Ход определения: в центрифужную пробирку наливают 1 мл профильтрованной мочи, 3 мл 3 %-ного раствора сульфосалициловой кислоты.

Через 5 минут определяют оптическую плотность на ФЭКе против контроля.

Светофильтр оранжевый, длина волны 650-590 мм, кювета 5 мл. При высоком содержании белка мочу разводят обычным способом.

Контроль: 1, 36 мл мочи доливают до 5, 0 мл 0, 9 % физиологическим раствором, измеряют на ФЭКе. При расчете из опыта вычитать контроль.

ОПРЕДЕЛЕНИЯ БЕЛКА С СУЛЬФОСАЛИЦИЛОВОЙ КИСЛОТОЙ НА ФЭКе

Принцип: интенсивность помутнения при коагуляции белка сульфосалициловой кислотой пропорциональна его концентрации.

Реактивы:

а) 3% раствор сульфосалициловой кислоты;

б) 0, 9 % раствор хлорида натрия;

в) стандартный 1 % раствор альбумина (1 мл раствора содержит 10 мг альбумина). 1 г лиофилизированного альбумина (из человеческой или бычьей

сыворотки) растворяют в небольшом количестве раствора хлорида натрия в колбе емкостью 100 мл и доводят до метки. Реактив стабилизируют прибавлением 1 мл 5 % раствора азида натрия (NaN₃). При хранении в холодильнике (t 5-6°С) реактив годен в течение 2 месяцев.

Оборудование: фотоэлектроколориметр.

Ход определения: в пробирку вносят 5 мл 3 % сульфосалициловой кислоты и добавляют 1, 25 мл профильтрованной мочи, смешивают. Через 5 минут колориметрируют при длине волны 590- 650нм (оранжевый или красный светофильтр) против контроля в кювете с длиной оптической плотности 5 мм. Контролем служит пробирка, в которую вносят 5 мл раствора хлорида натрия и 1, 25 мл мочи.

Расчет проводят по калибровочному графику, для построения которого из стандартного раствора готовят разведения.

Приготовление стандартного разведения белка.

Определение глюкозы в моче

Проведите определение глюкозы реакцией Гайнеса и запишите результат (положительная, отрицательная).

В этих же пробах проведите определение глюкозы экспресс-методом с использованием тест-полосок, полученные результаты впишите в бланк исследования.

ПРОБА ГАЙНЕСА

Принцип: реакция основана на свойстве глюкозы восстанавливать в щелочной среде гидрат окиси меди в гидрат закиси меди (желтый цвет) или закись меди (красный цвет).

Реактив: реактив Гайнеса

Ход определения: к 3 - 4 мл реактива прибавляют 8-12 капель мочи, кипятят и ставят в кипящую водяную баню. В присутствии глюкозы появляется желтая или красная окраска жидкости и осадок.

Модификация: 1 капля мочи + 9 капель реактива доводят до кипения. При отсутствии глюкозы цвет реактива не меняется (синий). Или 6-8 мл мочи + несколько капель реактива до бледно-голубого Цвета, смешивают, нагревают верхнюю часть пробирки до кипения (не кипятить). Нижняя часть пробирки - контроль. В присутствии глюкозы появляется желтая окраска в верхней части пробирки.

Колориметрический метод

Принцип: основан на цветной реакции, получаемой при нагревании мочи, содержащей глюкозу с раствором щелочи.

Оборудование: ФЭК.

Посуда: пробирки, пипетки.

Ход определения: 4 мл мочи смешивают с 1 мл 10 %-ного раствора едкого натрия. Ставят в кипящую водяную баню на 3 минуты. Через 10 минут колориметрируют на ФЭКе. Светофильтр зеленый, кювета 5 мл, контроль - вода.

Расчет: Количество глюкозы находят по калибровочной кривой.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ КЕТОНОВЫХ ТЕЛ

Кетоновые тела - это ацетон, ацетоуксусная и β -оксимасляная кислоты. В норме с мочой выделяется минимальное количество кетоновых тел, которые не обнаруживаются обычными качественными пробами.

Кетонурия - выделение с мочой большого количества кетоновых тел.

УНИФИЦИРОВАННАЯ ПРОБА ЛАНГЕ

Принцип метода: нитропруссид натрия в щелочной среде реагирует с кетоновыми телами с образованием комплекса красно-фиолетового цвета.

Реактивы:

а) нитропруссид натрия (раствор готовят перед употреблением);

б) уксусная кислота концентрированная;

в) 25 %-ный аммиак водный (NH₄OH).

Ход определения: исследуют мочу в первые 3 часа после мочеиспускания. В пробирку к 3-5 мл мочи приливают 5-10 капель раствора нитропруссида натрия -10 %, свежеприготовленного, 0, 5 мл концентрированной уксусной кислоты, смешивают, а затем осторожно по стенке пробирки пипеткой наслаивают 2-3 мл водного раствора аммиака.

Пробу считают положительной, если в течении 3 минут на границе сред образуется красно-фиолетовое кольцо.

ЭКСПРЕСС АНАЛИЗ «ЛЕСТРАДЕ»

Ход определения: На полоску фильтровальной бумаги помещают таблетку, на которую наносят 2 капли исследуемой мочи. Через 2 минуты окраску таблетки сравнивают с цветной шкалой. Наличие ацетона вызывает фиолетовое окрашивание разной интенсивности, согласно шкале, реакцию оценивают, как слабоположительную, положительную и резко положительную.

Нормальные величины: в норме с мочой выделяется 20-50 мг кетоновых тел за сутки.

Клиническое значение: кетонурия наблюдается при диабете, что является критерием правильности подбора пищевого режима, если количество вводимых жиров не соответствует количеству усваиваемых углеводов, то увеличивается количество кетоновых тел. При уменьшении введения углеводов кетонурия не наблюдается. Таким образом, обнаружение кетоновых тел в моче больных сахарным диабетом необходимо для регулирования диеты.

Проба Фуше

Реактивы:

а) 15%-ный раствор хлорида бария;

б) 100 мл 25 %-ного раствора ТХУК;

в) 10 мл 10 %-ного раствора хлорного железа (раствор Фуше).

Ход определения: к 10-12 мл мочи прибавляют объема хлорида бария, смешивают, фильтруют. Хлорид бария осаждает билирубин. На вынутый из воронки фильтр наносят 2-3 капли раствора Фуше. При положительной реакции на фильтровальной бумаге появляются зелено-синие или голубоватые пятна.

УРОБИЛИНОВЫЕ ТЕЛА

Уробилиновые тела являются производными уробилина. Они представляют собой в основном уробилиноген и стеркобилиноген.

Согласно современным представлениям образование уробилиногена из прямого билирубина происходит в верхних отделах кишечника (тонкого и начале толстого) под давлением кишечных бактерий (в желчных путях и желчном пузыре под давлением клеточных дегидрогеназ).

Часть уробилина резорбируется через кишечную стенку и с кровью портальной системы переносится в печень, где расщепляется полностью, при

этом в общий кровоток, и, следовательно, в мочу уробилиноген не попадет.

Нерезервированный уробилиноген подвергается дальнейшему воздействию

кишечных бактерий, превращаясь в стеркобилиноген. Небольшая часть стеркобилиногена резервируется и через портальную вену попадает в печень,

где расщепляется подобно уробилиногену.

Часть стеркобилиногена через геморроидальные вены всасывается в общий кровоток и почками выделяется в мочу; Наибольшая часть в нижних отделах

тонкого кишечника превращается в стеркобилин и выводится с калом, являясь его нормальным пигментом

ПРОБА НЕЙБАУЕРА

Принцип. Проба основана на реакции между уробилиногеном и раствором Эрлиха, при которой образуются красного цвета конденсационные соединения.

Реактивы. Реактив Эрлиха: 2 г парадиметиламинобензальдегида и 100 мл 20%-ного раствора соляной кислоты.

Ход определения: к нескольким миллилитрам свежей мочи добавить несколько капель реактива Эрлиха. При окрашивании жидкости в красный цвет в первые 30 сек. проба положительная и означает увеличение количества уробилиногена. Отсутствие красной окраски после стояния пробы говорит о нормальном количестве или отсутствии уробилиногена.

Проба Флоранса

Реактивы:

а) концентрированная серная кислота;

б) эфир;

в) концентрированная соляная кислота.

Ход определени: 8-10 мл мочи подкисляют несколькими каплями серной кислоты, взбалтывают и приливают несколько мл эфира. Закрывают пробирку плотно пробкой и осторожно смешивают жидкости. В другую пробирку наливают 2-3 мл концентрированной соляной кислоты. Пипеткой отсасывают из первой пробирки эфирный слой и наслаивают его на соляную кислоту. На границе двух жидкостей в присутствии уробилина образуется розовое кольцо, окраска которого может быть различной интенсивности.

Проба Флоранса дает положительный результат и в норме. Поэтому ее применяют для выявления полного отсутствия уробилина в моче.

Проба Богомолова

Реактивы:

а) насыщенный раствор сульфата меди;

б) концентрированная соляная кислота;

в) хлороформ.

Ход определения: к 10-15 мл мочи прибавляют 2-3 мл насыщенного раствора сульфата меди. Если появляется помутнение от образовавшейся гидроокиси меди, то прибавляют несколько капель соляной кислоты до прояснения раствора. Через 5 минут прибавляют 3 мл хлороформа и взбалтывают. При наличии уробилиновых тел хлороформ окрашивается в розово-красный цвет.

Преподавателем.

Самостоятельная аудиторная практическая работа Дата занятия « » ____________ 20 г.

МЕТОД НЕЧИПОРЕНКО

Принцип: количество клеточных элементов в 1 мл мочи.

Ход исследования: берут одноразовую порцию мочи в середине мочеиспускания. Определяют рН мочи (в щелочной среде может быть распад

клеток). 10 мл мочи центрифугируют 5 минут при 3000 оборотов в минуту, над осад очную жидкость отсасывают, оставляя 0, 5 мл или 1 мл осадка.

Осадок смешивают и заполняют камеру Горяева или Фукс-Розенталя.

Считают. Расчет в камере Фукс-Розенталя: X = А*31

Считают эритроциты, лейкоциты на всей камере. А – количество клеток в 1 мкл, X — количество клеток в 1 мл.

Расчет в камере Горяева в 100 больших квадратах.

Формула: X = А*250,

где X — количество форменных элементов в 1 мл;

А — количество форменных элементов в 100 больших квадратах.

Преимущества. Прост, доступен, удобен, требуется небольшое количество мочи, по количественным показателям не уступает другим методам.

Норма:

Лейкоциты - 2 (до 4 тыс);

эритроциты - до 1 тыс;

цилиндры - до 0, 02 в 1 л.

МЕТОД АДДИС-КАКОВСКОГО

1. На протяжении 12 часов собирают мочу в одну посуду, в которую вносят кристаллик тимола.

2. В лабораторию доставляют всю собранную мочу, измеряют ее количество, определяют относительную плотность, протеинурию, рН.

Для получения осадка берут мочу по формуле: Х=V/(t·5), где Х - количество мочи, выделен ное за 12 мин (мл); V - количество мочи, собранной за 10-12 ч (мл); t - время, в течение которого собирали мочу для исследования (ч); 5 - число, на которое нужно разделить результат, чтобы получить объем мочи, выделенной за 1/5 ч, т.е. за 12 мин.

3. Рассчитанное количество мочи помещают в градуированную центрифужную пробирку и центрифугируют 3 мин при 3500 об/мин, или 5 минут при 2000 об/мин.

4. Отсасывают верхний слой, оставляя 0, 5 мл мочи вместе с осадком. Если осадок превышает 0, 5 мл, то оставляют 1 мл мочи. Осадок с надосадочной жидкостью тщательно перемешивают и заполняют камеру Горяева (или другую счетную камеру). В этой камере подсчитывают раздельно количество лейкоцитов, эритроцитов и цилиндров (эпителиальные клетки мочевыводящих путей не считают).

5. Осадок размешивают и заполняют камеры Горяева или Фукс-Розенталя.

Примечание. Для подсчета цилиндров необходимо просмотреть не менее 4 камер Горяева (или Бюркера) или 1 камеру Фукса-Розенталя. Количество цилиндров, сосчитанное в 4 камерах Горяева или Бюркера, затем следует разделить на 4, а уже потом полученное число можно вставлять в формулу для определения количества цилиндров в 1 мкл осадка мочи.

Рассчитывают количество форменных элементов в 1 мкл осадка мочи (x). При подсчете в камере Горяева и Бюркера x = H/0, 9, где H – количество подсчитанных в камере клеток, а 0, 9 – объем камеры. При подсчете в камере Фукс- Розенталя x = H/3, 2, так как объем камеры 3, 2 мм³.

Затем, исходя из того, что для исследования было взято 0, 5 мл, или 500 мм³, полученные количества форменных элементов в 1 мм³ умножают на 500 (а при осадке в 1 мл – на 1000), и получают количество форменных элементов, выделенных с мочой за 12 минут. В пересчете на 1 час это количество умножают на 5, а при расчете за сутки – еще на 24. Так как, 500, 5 и 24 являются постоянными числами, то соответственно полученное количество эритроцитов, лейкоцитов и цилиндров (x) умножают на 60 000, если в пробирке для исследования было оставлено 0, 5 мл мочи, или на 120 000, если осадок был обильный и был оставлен 1 мл.

Недостаточность метода - длительное хранение мочи.

МЕТОД АМБУРЖЕ

1. Мочу собирают за 3 часа (180 мин), размешивают

2. 10 мл мочи центрифугируют 5-6 минут при 2000 оборотов в минуту