Проба с сульфосалициловой кислотой.

Реактивы: 20% раствор сульфосалициловой кислоты. Если ее нет, можно ее приготовить: к 20 г салициловой кислоты прибавить 18-20мл концентрированной серной кислоты и постепенно нагревать до 95-100°. Смесь превращается в кристаллическую массу сульфосалициловой кислоты. Остудив, разводят водой до 150 мл, получается 20 % раствор сульфосалициловой кислоты.

Ход определения: к 3-4 мл профильтрованной мочи прибавить 4-6 капель реактива. При положительной пробе получается помутнение.

 

 

Проба считается одной из самых чувствительных. Сульфосалициловая кислота осаждает белки сыворотки и альбумозы (продукты распада белка). С целью уточнения характера белка пробирку нагревают. Мутность в результате

свертывания сывороточных белков усиливается, а если за счет альбумоз -

исчезает.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ БЕЛКА В МОЧЕ С ПОМОЩЬЮ ЭКСПРЕСС-ТЕСТОВ

Экспресс-тесты широко используются в КДЛ, что связано с простотой их применения, а также достаточной для практической медицины точностью и

устойчивостью при хранении.

Экспресс-тесты выпускаются в виде бумажных (пластиковых) полосок или таблеток. Принцип их действия основан на тех же реакциях, что и обычные методы анализа, а ход определения сводится к смачиванию полосок или таблеток исследуемой жидкостью. Результат оценивают по интенсивности окраски индикаторных зон (мест нанесения реактивов). При этом обычно можно судить не только о наличии определяемого вещества, но и о его приблизительном количестве.

Экспресс-тесты выпускаются для определения как одного компонента (монотесты), так и для нескольких компонентов (политесты).

При работе с экспресс-тестами необходимо соблюдать следующие правила:

- не касаться руками зон индикации;

- работу вести строго по прилагаемой инструкции;

- материал для исследования должен быть свежим, без консервантов;

- работать только в пределах сроков годности;

- соблюдать правила хранения, указанные на этикетке;

Ход исследования.

· для определения белка погружают полоску в мочу, смачивая

индикаторную зону;

· сразу же помещают полоску на белую пластинку, входящую в состав комплекта;

· результат исследования оценивают через 1 минуту, сравнивая цвет индикаторной зоны с приложенной шкалой.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Метод Бранденберг-Робертс-Стольникова.

Принцип: основан на появлении тонкого кольца после наслоения мочи на азотную кислоту между 2 и 3 минутами.

Реактивы: 50% раствор азотной кислоты или реактив Ларионовой (20-30 г поваренной соли растворить при нагревании в 100 мл дистиллированной воды, дают остыть, фильтруют. К 99 мл фильтрата прибавить 1 мл концентрированной азотной кислоты).

Ход определения: в пробирку наливают 1-2 мл реактива и осторожно по стенке пробирки наслаивают такое же количество мочи.

Появление тонкого кольца на границе двух жидкостей соответствует количеству белка 0, 033 г на литр.

При появлении белкового кольца раньше двух минут после наслаивания мочу следует развести водой, затем производят

повторное наслоение. Результат вычисляют путем умножения 0, 033 г/л на степень разведения. Разведение подбирают таким образом, чтобы при наслаивании кольцо образовалось между 2-3 минутами.

Метод количественного определения белка с сульфосалициловой кислотой

Принцип: белок с сульфосалициловой кислотой дает помутнение, интенсивность которого зависит от концентрации белка. Измерения производят на ФЭКе.

Реактив: 3 % раствор сульфосалициловой кислоты.

Ход определения: в центрифужную пробирку наливают 1 мл профильтрованной мочи, 3 мл 3 %-ного раствора сульфосалициловой кислоты.

Через 5 минут определяют оптическую плотность на ФЭКе против контроля.

Светофильтр оранжевый, длина волны 650-590 мм, кювета 5 мл. При высоком содержании белка мочу разводят обычным способом.

Контроль: 1, 36 мл мочи доливают до 5, 0 мл 0, 9 % физиологическим раствором, измеряют на ФЭКе. При расчете из опыта вычитать контроль.

ОПРЕДЕЛЕНИЯ БЕЛКА С СУЛЬФОСАЛИЦИЛОВОЙ КИСЛОТОЙ НА ФЭКе

Принцип: интенсивность помутнения при коагуляции белка сульфосалициловой кислотой пропорциональна его концентрации.

Реактивы:

а) 3% раствор сульфосалициловой кислоты;

б) 0, 9 % раствор хлорида натрия;

в) стандартный 1 % раствор альбумина (1 мл раствора содержит 10 мг альбумина). 1 г лиофилизированного альбумина (из человеческой или бычьей

сыворотки) растворяют в небольшом количестве раствора хлорида натрия в колбе емкостью 100 мл и доводят до метки. Реактив стабилизируют прибавлением 1 мл 5 % раствора азида натрия (NaN₃). При хранении в холодильнике (t 5-6°С) реактив годен в течение 2 месяцев.

Оборудование: фотоэлектроколориметр.

Ход определения: в пробирку вносят 5 мл 3 % сульфосалициловой кислоты и добавляют 1, 25 мл профильтрованной мочи, смешивают. Через 5 минут колориметрируют при длине волны 590- 650нм (оранжевый или красный светофильтр) против контроля в кювете с длиной оптической плотности 5 мм. Контролем служит пробирка, в которую вносят 5 мл раствора хлорида натрия и 1, 25 мл мочи.

Расчет проводят по калибровочному графику, для построения которого из стандартного раствора готовят разведения.

Приготовление стандартного разведения белка.

⇐ Предыдущая12345678910Следующая ⇒

Поделиться: