Архитектура Аудит Военная наука Иностранные языки Медицина Металлургия Метрология
Образование Политология Производство Психология Стандартизация Технологии


Specimens evaluated for this study



For this sub-study, all subjects who met study criteria were identified. No a priori power calculation was performed for the sub-study. These subjects were aged 4–11 years and had two smear positive specimens, one from an episode of symptomatic (with fever, defined as above) malaria and another from an episode of asymptomatic parasitaemia, with each episode without prior treatment for malaria within 60 days, and the two episodes within 3–12 months of each other. These episodes all occurred between November, 2011 and December, 2014. Samples from each episode were collected and studied.

Characterization of parasite polymorphisms

DNA was extracted from filter paper blood spots into 100 μ l of water using Chelex-100. Gene fragments spanning all loci of interest were amplified, and multiplex ligase detection reaction-fluorescent microsphere assays were performed as previously described.

Statistical methods

Data analysis was done using R version 3.3. The primary outcome was presentation with symptomatic vs. asymptomatic malaria infection. Comparisons of the odds of genotypes present in symptomatic vs. asymptomatic paired isolates was performed grouping mixed infections as mutant, mixed infections as WT, excluding mixed infections from the analysis, or considering mixed samples as consisting of 50% WT and 50% mutant parasites. Analyses were performed using a binomial generalized estimating equations model, to allow for correlation between paired samples from each individual. A p value < 0.05 was considered statistically significant.

Characteristics of study subjects and episodes of malaria

Characteristics of the 114 subjects who provided samples for analysis and of the studied malaria infections are shown in Table 1. Similar numbers of children presented first with asymptomatic (54) compared to symptomatic (60) infections, and the mean age of the children when they presented with asymptomatic vs. symptomatic infections was very similar. The mean parasite density was about fourfold higher in symptomatic compared to asymptomatic infections.

Table 1

Characteristics of study children and paired malaria infections

Characteristic   Total episodes Asymptomatic episodes Symptomatic episodes
Number of episodes
Number with first presentation for each category
Age at time of sample collection (mean) (years) 7.00 7.02 6.98
Duration between episodes (mean) (days)
Parasite density (geometric mean) 9080/μ l 3767/μ l 14, 390/μ l

Лекарственная устойчивость, опосредующий полиморфизм Plasmodium falciparum и клинические проявления паразитемических детей в Уганде

Резюме

Происхождение

Генетические полиморфизмы Plasmodium falciparum, которые опосредуют измененную чувствительность к препарату, могут влиять на вирулентность. В перекрестном исследовании угандийские дети с инфекционными мутантами у pfcrt K76T, pfmdr1 N86Y или pfmdr1 D1246Y имели примерно одну четверть шансов симптоматической малярии по сравнению с теми, у которых были инфекции с диким типом (WT). Однако результаты могли быть сбиты с большей вероятностью у пациентов с симптоматическим заболеванием смешанных инфекций с высокой плотностью или недавней предшествующей обработкой, которая была выбрана для аллелей WT.

Методы

Полиморфизмы в образцах из парных эпизодов бессимптомной и симптоматической паразитемии у 114 испытуемых в возрасте 4-11 лет наблюдались в Торожском районе, Уганда. Парные эпизоды произошли в течение 3-12 месяцев друг от друга и не имели лечения малярии в предшествующие 60 дней. Распространенность WT, смешанных и мутантных аллелей определяли с помощью тестов реакции детектирования мультиплексной лигазы - флуоресцентные микросферы.

Результаты

Учитывая парные эпизоды у одного и того же субъекта, вероятность симптоматической малярии была ниже при инфекции с мутацией по сравнению с WT или смешанной последовательностью при N86Y (OR 0, 26, 95% CI 0, 09-0, 79, p = 0, 018), но не K76T или D1246Y. Тем не менее, симптоматические эпизоды (с более высокой плотностью) были более вероятными, чем бессимптомные, которые могли быть смешаны (для N86Y OR 2.0, 95% CI 1, 04-4, 0, p = 0, 036). Исключая смешанные инфекции, шансы симптоматической малярии были ниже для инфекций с мутацией по сравнению с последовательностью WT при N86Y (OR 0, 33, 95% CI 0, 11-0, 98, p = 0, 046), но не других аллелей. Однако, если смешанные генотипы были сгруппированы с мутантами в этом анализе или предполагали, что смешанные инфекции состоят из 50% WT и 50% мутантных генотипов, шансы симптоматической инфекции не различались между инфекциями, которые были мутантами или WT в изученных аллелях.

Выводы.

Хотя инфекции только с мутантным генотипом pfmdr1 86Y ассоциировались с симптоматической инфекцией, эту ассоциацию можно объяснить в первую очередь большей плотностью паразита и, следовательно, большей распространенностью смешанных инфекций у детей с симптомами. Эти результаты указывают на ограниченную связь между тестируемыми полиморфизмами и риском симптоматической болезни и подчеркивают ценность продольных исследований для оценки ассоциаций между паразитическими факторами и клиническими исходами.

Предпосылка

Малярия, в частности инфекция, вызванная Plasmodium falciparum, остается подавляющей проблемой в большинстве стран Африки к югу от Сахары. Борьба с малярией сильно ограничена лекарственной устойчивостью. Сопротивление ряду лекарств частично опосредуется полиморфизмами в двух предполагаемых переносчиках наркотиков, закодированных генами pfcrt и pfmdr1. Мутация pfcrt 76T является основным медиатором устойчивости к хлорохину и амодиакину. Полиморфизмы в pfmdr1 влияют на чувствительность к ряду препаратов. Учитывая распространенные в Африке полиморфизмы, мутации pfcrt 76T и pfmdr1 86Y и 1246Y ассоциированы с пониженной чувствительностью к хлорохину и амодиакину, но эти же мутации обеспечивают повышенную чувствительность к люмефантрину и мефлохину.

Представляет интерес воздействие лекарственной устойчивости, опосредующей генетические полиморфизмы на пригодность и вирулентность малярийных паразитов. Учитывая пригодность, прекращение использования хлорохина для лечения малярии привело к резким изменениям в циркулирующих паразитах, с возвратом чувствительных к хлорохину паразитов P76 и дикого типа (WT), а также сильной противомалярийной эффективности для хлорохина. Ясно, что чувствительные к хлорохину паразиты с последовательностью WT у pfcrt имеют преимущество в отношении пригодности по сравнению с резистентными паразитами. Учитывая pfmdr1, паразиты WT переросли тех, у кого три мутации, только одна из которых (1246Y) распространена в Африке, в экспериментах по конкуренции in vitro. После смешанных клинических изолятов в культуре с течением времени появились скромные преимущества пригодности, связанные с аллелями 86Y и WT D1246 мутантов. В районе с сезонной малярией распространенность паразитов с последовательностями мутантных pfcrt 76T и pfmdr1 86Y снижалась в течение низкого сезона передачи, когда давление препарата было самым низким, что подразумевало преимущество пригодности для паразитов WT. В целом, в большинстве случаев паразиты с последовательностями WT у pfcrt и pfmdr1, по-видимому, имеют преимущество в отношении пригодности по сравнению с паразитами-мутантами.

Неясно, оказывают ли полиморфизмы, резистентные к лекарственному средству P. falciparum, также воздействие на вирулентность паразита, характеризующуюся как способность вызывать симптоматическое или тяжелое заболевание. Исследования, проведенные в Индии и Мали, но не Судане или Габоне, показали связь между наличием мутации pfcrt 76T и тяжелой малярией, но эти ассоциации, возможно, были обусловлены клинической прогрессией после лечения хлорохином, а не вариацией в вирулентности паразитов. Рание различия в генотипах между паразитами, вызывающими симптоматические и бессимптомные инфекции, изучались в образцах поперечного исследования детей из Тороро, Уганда. Примечательно, что у детей, укрывавших изоляты с мутациями у pfcrt K76T, pfmdr1 N86Y или pfmdr1 D1246Y, примерно одна четвертая вероятность симптоматической малярии по сравнению с детьми с паразитами WT. Аналогичным образом, у детей в Бенине распространенность мутации pfmdr1 86Y была значительно выше при асимптоматическом сравнении с симптоматическими инфекциями, что согласуется с уменьшением вирулентности паразитов с мутацией pfmdr1 86Y. Тем не менее, результаты этих исследований контроля случай-контроль, возможно, были скомпрометированы двумя факторами. Во-первых, инфекции, связанные с симптоматическим заболеванием, как правило, имеют большую плотность паразита, чем те, которые являются бессимптомными, увеличивая вероятность обнаружения генотипов WT, присутствующих в смешанных инфекциях. Во-вторых, дети с симптоматической инфекцией, возможно, имели большую вероятность по сравнению с детьми с бессимптомной инфекцией недавнего предшествующего инфицирования, обработанного артеметер / лумефантрином, который выбирает аллели WT. Для дальнейшего изучения взаимосвязи между генотипом паразитов и клинической картиной были использованы образцы из продолжающегося продольного исследования, а генотипы сравнивались у паразитов в парных образцах угандийских детей с симптоматическими и бессимптомными эпизодами малярии.

Методы

Длительное обучение

Образцы были взяты у детей, включенных в когортное исследование в субконфессиональном округе Нагонгера, округ Тороро, Уганда, в районе высокой интенсивности передачи малярии. Когортное исследование было описано ранее. Вкратце, все домохозяйства в суб-округе были перечислены и составлены на карту, и 100 случайным образом отобранных домашних хозяйств были зачислены, если они соответствовали критериям регистрации, по крайней мере, одного резидента в возрасте 0, 5-10 лет и по крайней мере одного взрослого, который предоставил информированное согласие. Субъектам было предложено посетить специализированную учебную клинику, открытую семь дней в неделю для лечения любых заболеваний. В клинике оценивались лихорадочные предметы (температура барабанной перепонки 38 ° C или история лихорадки за последние 48 часов), и если диагноз малярии был основан на любом уровне паразитемии на окрашенном Гимзе губном мазке, лечение (артеметер-люмефантрин для Неосложненной малярии, хинин для осложненной малярии). Субъекты также получали обычные мазки крови каждые 3 месяца. Во время сбора крови либо при симптоматическом заболевании, либо при регулярных визитах, кровь была также на фильтровальной бумаге и хранилась. Когортное исследование было одобрено исследовательским и этическим комитетом Университета Макерере, Национальным советом по науке и технике Уганды и Калифорнийским университетом в Сан-Франциско.


Поделиться:



Последнее изменение этой страницы: 2017-04-13; Просмотров: 255; Нарушение авторского права страницы


lektsia.com 2007 - 2024 год. Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав! (0.017 с.)
Главная | Случайная страница | Обратная связь