Правила работы в микробиологической лаборатории

УДК 579: 616.31 (072)

ББК 52.64 р30

ОГЛАВЛЕНИЕ

		Стр.
Занятие №1	Знакомство с устройством и оборудованием микробиологической лаборатории. Правила работы. Систематика и номенклатура микроорганизмов. Морфология бактерий. Микроскопический метод исследования. Простые методы окраски.
Занятие №2	Морфология и структура прокариотов. Сложные методы окраски.
Занятие №3	Морфология и структура прокариотов и эукариотов. Бактериоскопический метод исследования. Сложные методы окраски. Бактериологический метод исследования: выделение чистой культуры (1-й день исследования).
Занятие №4	Физиология микроорганизмов. Питание бактерий. Механизмы транспорта у бактерий. Питательные среды, классификация, назначение. Рост и размножение бактерий. Пигменты. Бактериологический метод исследования: выделение чистой культуры (2-й день исследования).
Занятие №5	Физиология микроорганизмов. Ферменты бактерий. Изучение биохимических свойств бактерий. Виды энергетического метаболизма. Методы культивирования облигатных анаэробов. Бактериологический метод исследования: выделение чистой культуры микроорганизмов (3-й и 4-й день исследования).
Занятие №6	Генетика микроорганизмов. Методы генетической молекулярной диагностики.
Занятие №7	Действие физических, химических и биологических факторов на микроорганизмы. Асептика. Антисептика. Дезинфекция. Стерилизация. Экология микроорганизмов. Методы изучения нормальной микрофлоры организма человека. Микрофлора воздуха, воды, почвы. Санитарно-бактериологическое исследование воды, воздуха, смыва с рук.
Занятие №8	Химиотерапия. Антибиотики. Методы определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам.
Занятие №9	Итоговое занятие: «Морфология, физиология, генетика микроорганизмов. Химиотерапия. Антибиотики».
Занятие №10	Структура и функция системы иммунитета. Основные понятия иммунитета. Цитокины и интерлейкины. Развитие и дифференцировка Т- и В-лимфоцитов.
Занятие №11	Антигены. Антитела. Серологические реакции. Реакция преципитации.
Занятие №12	Факторы естественного иммунитета. Фагоциты и фагоцитоз. Система гранулоцитов. Система комплемента. Серологические реакции: реакция связывания комплемента.
Занятие №13	Динамика иммунного ответа. Генетический контроль иммунного ответа. Серологические реакции: агглютинации, РПГА, реакция Кумбса, нейтрализации.
Занятие №14	Оценка иммунного статуса. Серологические реакции: ИФА, РИА, РИФ, иммуноблотинг. Клеточные реакции. Основы иммунопрофилактики и иммунотерапии.
Занятие №15	Аллергия, аутоиммунные реакции. Иммунодефициты. Противоопухолевый иммунитет. Аллергены. Кожно-аллергические пробы.
Занятие №16	Итоговое занятие по иммунологии.
Занятие №17	Инфекция. Инфекционный процесс. Иммунология инфекционного процесса.
Занятие №18	Клиническая микробиология. Микробиологическая диагностика гнойно-воспалительных заболеваний. Этиология, патогенез и микробиологическая диагностика бактериемий, сепсиса, бактериального шока.

ЗАНЯТИЕ №1

Тема: Знакомство с устройством и оборудованием микробиологической лаборатории. Правила работы. Систематика и номенклатура микроорганизмов. Морфология бактерий. Микроскопический метод исследования.

Простые методы окраски .

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ:

1. Ознакомиться с правилами работы в микробиологической лаборатории.

2. Знать устройство светового биологического микроскопа.

3. Научиться работать с иммерсионной системой микроскопа.

4. Ознакомиться с правилами обращения с культурами микробов.

5. Научиться готовить мазки, окрашивать их простым методом, микроскопировать.

ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:

1. Международная классификация и таксономия микроорганизмов.

2. Основные морфологические формы бактерий.

3. Этапы приготовления мазков из агаровых и бульонных культур.

4. Простые методы окрашивания микроорганизмов.

5. Принципы световой микроскопии. Иммерсионный объектив, его преимущества.

6. Правила пользования микроскопом.

ЛИТЕРАТУРА:

1. Лекционный материал.

2. Учебник «Медицинская микробиология» под редакцией проф. Д.К. Новикова, проф. И.И. Генералова, 2003, стр. 20-26, 33-35.

3. «Практикум по медицинской микробиологии» С.А.Павлович, 1993, стр. 4-12, 19-20.

Правила работы с иммерсионной системой микроскопа

1. Поднять конденсор до уровня предметного столика и открыть ирис-диафрагму.

2. Глядя сбоку в верхнюю линзу конденсора и вращая зеркало, найти изображение источника света.

3. Установить иммерсионный объектив.

4. На предметный столик поместить препарат с каплей иммерсионного масла и закрепить препарат клеммами.

5. Под контролем глаза макровинтом опустить тубус до соприкосновения линзы объектива с каплей масла на препарате. Очень осторожно погрузить под контролем глаза линзу в масло, не доводя до соприкосновения со стеклом.

6. Глядя в окуляр, макровинтом медленно поднимать тубус до появления изображения в поле зрения.

7. Вращая микровинт не более, чем на ½ оборота, добиться четкого изображения.

8. После просмотра препарата макровинтом поднять тубус, снять препарат, протереть фильтровальной бумагой фронтальную линзу иммерсионного объектива, салфетку положить на предметный столик.

9. Перевести на малое увеличение и опустить тубус до упора.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:

1. Приготовление мазков из бульонной культуры стафилококка. Окраска метиленовой синью.

2. Приготовление мазка из агаровой культуры кишечной палочки. Окраска фуксином.

3. Микроскопия демонстрационных мазков стрептококка.

4. Микроскопия и зарисовка в альбом 3 препаратов.

ПРЕПАРАТ №1 ПРЕПАРАТ №2

Staphylococcus aureusEscherichia coli

окраска метиленовым синимокраска фуксином

ПРЕПАРАТ №3

Streptococcus lactis

окраска метиленовым синим

ЗАНЯТИЕ №2

Тема: Морфология и структура прокариотов. Сложные методы окраски.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ:

1. Освоить теоретический материал по теме занятия. Знать сущность и назначение сложных методов окраски: по Граму, по Бурри-Гинсу, Нейссеру, Ожешко, Циль-Нильсену. Иметь представление о различных видах микроскопии.

ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:

1. Структура бактериальной клетки (обязательные и необязательные структурные компоненты).

2. Методы для изучения величины и структуры бактериальной клетки.

3. Оболочка, строение. Цитоплазматическая мембрана, строение, функция.

4. Клеточная стенка бактерий. Различия в строении клеточной стенки Грам+ и Грам- бактерий. Функция клеточной стенки.

5. Капсула бактерий, ее роль, методы выявления.

6. Споры, их значение, стадии образования, условия для спорообразования, способы выявления.

7. Жгутики. Методы изучения подвижности. Инжектисома, строение, функция.

8. Нуклеоид, функция, методы выявления нуклеоида.

9. Сложные методы окраски (по Граму, Нейссеру, Бурри-Гинсу, Ожешко, Циль-Нильсену).

10. Принципы фазово-контрастной, темнопольной, люминисцентной микроскопии.

11. Понятие о конфокальной, электронной, атомно-силовой микроскопии.

ЛИТЕРАТУРА:

1. Лекционный материал.

2. Учебник «Медицинская микробиология» под редакцией проф. Д.К. Новикова, проф. И.И. Генералова, 2003, стр. 26-35.

3. «Практикум по медицинской микробиологии» С.А.Павлович, 1993, стр.6-7, 13-19.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:

1. Приготовление мазков из смеси сарцины и кишечной палочки, окраска по Граму в модификации Синева.

2. Микроскопия демонстрационного препарата дрожжей для выявления зерен волютина, окраска по Нейссеру.

3. Микроскопия демонстрационного препарата споровых бактерий, окраска по Ожешко.

4. Микроскопия демонстрационного мазка с капсульными бактериями, окраска по Бурри-Гинсу.

5. Зарисовка препаратов.

6. Микроскопия препарата, окрашенного акридиновым оранжевым, для выявления нуклеоида.

7. Изучение подвижности в фазово-контрастном микроскопе

ПРЕПАРАТ №1ПРЕПАРАТ №2

смесь E.coli и Sarcina flava Капсула у бактерий

окраска по Граму окраска по Бурри-Гинсу

ПРЕПАРАТ №3ПРЕПАРАТ №4

Зерна волютина в дрожжах Споры В.anthracoides

окраска по Нейссеру окраска по Ожешко

Способы окраски:

I. Окраска по Граму:

1. На фиксированный мазок наносят карболово-спиртовой раствор генцианового фиолетового через фильтровальную бумагу. 1-2 мин.

2. Наносят раствор Люголя на 1-2 мин.

3. Сливают раствор Люголя и обесцвечивают спиртом – 30 секунд.

4. Тщательно промывают водой.

5. Докрашивают водным раствором фуксина 1-2 мин., промывают, высушивают, микроскопируют.

II. Окраска по Бурри-Гинсу:

1. Каплю взвеси микробов смешивают с каплей туши на обезжиренном стекле и готовят мазок шлифованным краем стекла, как мазки крови, высушивают, фиксируют.

2. Наносят водный раствор фуксина на 1-2 мин.

3. Промывают, высушивают, микроскопируют.

III. Окраска по Ожешко:

1. На нефиксированный мазок наносят 0, 5% раствор хлористоводородной кислоты и подогревают на пламени горелки в течение 2-3 мин.

2. Кислоту сливают, промывают мазок, просушивают, фиксируют в пламени горелки.

3. Через фильтровальную бумагу наносят карболовый фуксин Циля, подогревают над пламенем горелки до 3-х кратного появления паров.

4. Снимают бумагу, промывают водой.

5. Обесцвечивают мазок 5% раствором серной кислоты 1-2 мин.

6. Промывают водой.

7. Докрашивают метиленовым синим 3-5 мин.

8. Промывают, микроскопируют.

IV. Окраска по Нейссеру:

1. На фиксированный мазок наносят ацетат синьки Нейссера на 2-3 мин.

2. Наносят раствор Люголя на 10-30 секунд.

3. Промывают водой.

4. Докрашивают раствором везувина или хризоидина 0, 5-1 мин.

5. Промывают, высушивают, микроскопируют.

ЗАНЯТИЕ №3

Тема: Морфология и структура прокариотов и эукариотов. Бактериоскопический метод исследования. Сложные методы окраски. Бактериологический метод исследования: выделение чистой культуры (1-й день исследования).

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ:

1. Освоить теоретический материал по теме занятия.

2. Продолжить знакомство с морфологией и структурой микроорганизмов (актиномицеты, хламидии, риккетсии, спирохеты, грибы).

3. Ознакомиться с фазово-контрастной, темнопольной, люминисцентной микроскопией.

4. Научиться производить посев на чашку Петри с МПА для выделения чистой культуры.

ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:

1. Извитые формы бактерий. Спирохеты, строение, классификация, методы изучения их морфологии.

2. Риккетсии: морфология, структура, особенности развития.

3. Хламидии: морфология, структура, циклы развития.

4. Микоплазмы: особенности строения.

5. Актиномицеты: особенности строения.

6. Грибы: особенности строения, классификация.

7. Особенности морфологии плесневых и дрожжевых грибов.

8. Общая характеристика простейших, классификация, особенности строения.

ЛИТЕРАТУРА:

1. Лекционный материал.

2. Учебник «Медицинская микробиология» под редакцией проф. Д.К. Новикова, проф. И.И. Генералова, 2003, стр. 35-40, 362-363.

3. «Практикум по медицинской микробиологии» С.А.Павлович, 1993, стр. 20-23, 26-29.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:

1. Микроскопия и зарисовка демонстрационных препаратов хламидий, спирохет, кандид, грибов.

ПРЕПАРАТ №1 ПРЕПАРАТ №2

Treponema pallidumChlamidia trachomatis

окраска по Романовскому-Гимзеокраска метиленовым синим

ПРЕПАРАТ №3 ПРЕПАРАТ №4

Candida albicans Зарисовать 1 из трех

окраска метиленовым синимдемонстрационных препаратов

грибов родов Mucor, Aspergillus или Penicillium

ПРЕПАРАТ №5

Toxoplasma gondii

окраска по Романовскому-Гимзе

2. Оформление протокола по выделению чистой культуры микроорганизмов (1-й день).

ЗАНЯТИЕ № 4

Тема: Физиология микроорганизмов. Питание бактерий. Механизмы транспорта у бактерий. Питательные среды, классификация, назначение. Рост и размножение бактерий. Пигменты. Бактериологический метод исследования:

ЗАНЯТИЕ № 5

ТЕМА: Физиология микроорганизмов. Ферменты бактерий. Изучение биохимических свойств бактерий. Виды энергетического метаболизма. Методы культивирования облигатных анаэробов. Бактериологический метод исследования:

ЗАНЯТИЕ №6

Тема: Генетика микроорганизмов. Методы генетической молекулярной диагностики.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ:

1. Освоить теоретический материал по теме занятия.

2. Научиться выявлять " S" и " R" формы колоний.

3. Научиться ставить и учитывать опыты трансформации и трансдукции.

4. Научиться ставить и оценивать опыт по выявлению действия карболовой кислоты на характер роста протея.

ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:

1. Строение генетического аппарата микроорганизмов.

2. Плазмиды, транспозоны, Is-последовательности. Их роль.

3. Генотип, фенотип бактерий, виды изменчивости.

4. Фенотипическая изменчивость.

5. Генетическая изменчивость, ее виды. Репарации у бактерий.

6. Мутации, диссоциации.

7. Трансформация.

8. Трансдукция.

9. Конъюгация.

10. Генная инженерия в медицине и биотехнологии.

11. Методы молекулярной генетической диагностики. Гибридизация нуклеиновых кислот, блотинг нуклеиновых кислот. Полимеразная цепная реакция (ПЦР).

ЛИТЕРАТУРА:

1. Лекционный материал.

2. Учебник «Медицинская микробиология» под редакцией проф. Д.К. Новикова, проф. И.И. Генералова, 2003, стр. 67-87.

3. «Практикум по медицинской микробиологии» С.А.Павлович, 1993, стр. 56-61.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:

ЗАНЯТИЕ №7

Тема: Действие физических, химических и биологических факторов на микроорганизмы. Асептика. Антисептика. Дезинфекция. Стерилизация. Экология микроорганизмов. Методы изучения нормальной микрофлоры организма человека. Микрофлора воздуха, воды, почвы.

ПРЕПАРАТ №1

Мазок зубного налета

Окраска по Граму

2. Протокол санитарно-бактериологического исследования смыва с рук (с использованием демонстрационного материала).

День исследования	Материал для исследования	Ход исследования	Результат исследования
	Смыв с рук	Взятие смыва с рук стерильной увлажненной салфеткой и посев в среду Кесслера (МПБ + желчь + лактоза + генцианфиолетовый + поплавок) для обнаружения E. coli. Термостат 44^оС 24 часа.
	-	Учет роста на среде Кесслера -(газообразование при 44⁰С 24 ч). Пересев на среду Эндо.
	-	Учет роста красных колоний на среде Эндо. Приготовление мазка, окраска по Граму, микроскопия, Оксидазный тест.
Заключение:

3. Разбор методов мембранной фильтрации и титрационного метода с использованием демонстрационного материала.

4. Протокол определения микробного числа воздуха седиментационным методом.

День исследования	Материал для исследования	Ход исследования	Результат исследования
	Воздух учебной комнаты	Посев воздуха на чашку с МПА методом седиментации 10 мин для определения микробного числа. Посев на кровяной агар и ЖСА для выявления санитарно-показательных микробов. Термостат 37^оС, 24 часа.
	-	Подсчет выросших колоний по готовым чашкам. Счет выросших колоний на чашке с МПА. Расчет микробного числа (количество колоний х60). Учет колоний санитарно-показательных микробов по демонстрационным чашкам.
Заключение:

ЗАНЯТИЕ №8

ТЕМА: Химиотерапия. Антибиотики. Методы определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ:

1. Знать теоретический материал по теме занятия.

2. Овладеть методикой определения чувствительности микробов к антибиотикам методом бумажных дисков.

3. Научиться оценивать чувствительность микробов к антибиотикам методом серийных разведений в бульоне и агаре по демонстрационному материалу.

ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:

1. Антимикробные средства, виды. Химиотерапия. Химиопрофилактика. Химиотерапевтический индекс.

2. Антибиотики. Определение, требования к антибиотикам.

3. Классификация антибиотиков: по происхождению, по спектру действия.

4. Классификация антибиотиков по химической структуре и механизму действия. Основные группы антибиотиков.

5. Классификация побочных реакций антимикробных препаратов. Ограничения антибиотикотерапии.

6. Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам: МИК, МБК.

7. Диффузионные методы определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам. Критерии устойчивости.

8. Методы серийных разведений определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам. Автоматизированные методы определения.

9. Механизмы развития лекарственной устойчивости.

10. Пути преодоления резистентности микроорганизмов к лекарственным препаратам.

ЛИТЕРАТУРА:

1. Лекционный материал.

2. Учебник «Медицинская микробиология» под редакцией проф. Д.К. Новикова, проф. И.И. Генералова, 2003, стр. 88-89, 122-136.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:

Демонстрация Е-теста.

ЗАНЯТИЕ № 9

Тема: Итоговое занятие: «Морфология, физиология, генетика микроорганизмов. Химиотерапия. Антибиотики».

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ:

Знать материал по темам занятий №1-8.

ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:

1. Международная классификация и таксономия микроорганизмов.

2. Основные морфологические формы бактерий.

3. Принципы световой микроскопии. Иммерсионный объектив, его преимущества. Принципы фазово-контрастной, темнопольной, люминисцентной микроскопии. Понятие о конфокальной, электронной, атомно-силовой микроскопии.

4. Структура бактериальной клетки (обязательные и необязательные структурные компоненты). Методы для изучения величины и структуры бактериальной клетки.

5. Оболочка, строение. Цитоплазматическая мембрана, строение, функция.

6. Клеточная стенка бактерий. Различия в строении клеточной стенки Грам+ и Грам- бактерий. Функция клеточной стенки.

7. Капсула бактерий, ее роль, методы выявления.

8. Споры, их значение, стадии образования, условия для спорообразования, способы выявления.

9. Жгутики. Методы изучения подвижности. Инжектисома, строение, функция.

10. Нуклеоид, функция, методы выявления нуклеоида.

11. Сложные методы окраски (по Граму, Нейссеру, Бурри-Гинсу, Ожешко, Циль-Нильсену).

12. Извитые формы бактерий. Спирохеты, строение, классификация, методы изучения их морфологии.

13. Риккетсии: морфология, структура, особенности развития. Хламидии: морфология, структура, циклы развития.

14. Микоплазмы: особенности строения. Актиномицеты: особенности строения.

15. Грибы: особенности строение, классификация.

16. Особенности морфологии плесневых и дрожжевых грибов.

17. Общая характеристика простейших, классификация, особенности строение.

18. Питание бактерий. Классификация бактерий по типам питания. Голофитный способ питания.

19. Механизмы транспорта питательных веществ у бактерий. Секреция молекулы бактерий, типы секреции.

20. Основные методы культивирования бактерий. Требования, предъявляемые к питательным средам. Классификация питательных сред.

21. Рост и размножение бактерий.

22. Пигменты. Классификация пигментов. Значение пигментообразования.

23. Биологическое окисление у бактерий (виды энергетического метаболизма). Брожение, типы брожения. Дыхание бактерий.

24. Классификация бактерий по типам дыхания. Методы выращивания анаэробов.

25. Ферменты бактерий, их свойства, классификация. Роль и значение ферментов.

26. Определение сахаролитических свойств, состав сред Гиса, Эндо. Определение протеолитических свойств. Определение каталазной и оксидазной активности. Современные автоматизированные методы определения биохимических свойств бактерий.

27. Строение генетического аппарата микроорганизмов. Генотип, фенотип бактерий, виды изменчивости.

28. Фенотипическая изменчивость.

29. Генетическая изменчивость, ее виды. Репарации у бактерий.

30. Мутации, диссоциации.

31. Трансформация.

32. Трансдукция.

33. Конъюгация.

34. Плазмиды, транспозоны, Is-последовательности. Их роль.

35. Генная инженерия в медицине и биотехнологии.

36. Методы молекулярной генетической диагностики. Гибридизация нуклеиновых кислот, блотинг нуклеиновых кислот. Полимеразная цепная реакция (ПЦР).

37. Понятие об экологии микроорганизмов. Микробные экосистемы и их компоненты (биоценоз, биотоп). Понятие об эковаре. Виды симбиоза. Антагонизм, формы антагонизма.

38. Действие физических факторов на микроорганизмы. Стерилизация: определение, методы стерилизации.

39. Влияние химических факторов на микроорганизмы. Антисептика, определение. Классификация антисептиков, требования к антисептикам, механизмы действия.

40. Асептика, виды асептических мероприятий. Дезинфекция. Определение, виды и способы дезинфекции.

41. Микрофлора тела человека, значение. Микрофлора отдельных биотопов тела человека.

42. Дисбактериоз: причины. Препараты для лечения дисбактериоза (пробиотики). Профилактика дисбактериоза.

43. Санитарно-показательные микробы: определение, свойства.

44. Санитарно-бактериологическое исследование смыва с рук: цель и методика исследования.

45. Микрофлора воздуха. Показатели санитарного состояния воздуха. Методы определения микробного числа.

46. Микрофлора воды, источники загрязнения воды. Показатели санитарного состояния воды. Определение микробного числа воды.

47. Методы определения общих и термотолерантных колиформных бактерий.

48. Микрофлора почвы, показатели санитарного состояния почвы.

49. Антимикробные средства, виды. Химиотерапия. Химиопрофилактика. Химиотерапевтический индекс.

50. Антибиотики. Определение, требования к антибиотикам. Классификация антибиотиков: по происхождению, по спектру действия.

51. Классификация антибиотиков по химической структуре и механизму действия. Основные группы антибиотиков.

52. Классификация побочных реакций антимикробных препаратов. Ограничения антибиотикотерапии.

53. Диффузионные методы определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам. Критерии устойчивости.

54. Методы серийных разведений определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам. Критерии устойчивости: МИК, МБК. Автоматизированные методы определения.

55. Механизмы развития лекарственной устойчивости. Пути преодоления резистентности микроорганизмов к лекарственным препаратам.

ЛИТЕРАТУРА:

1. Лекционный материал.

2. Учебник «Медицинская микробиология» под редакцией проф. Д.К. Новикова, проф. И.И. Генералова, 2003, стр. 12-49, 67-136.

3. «Практикум по медицинской микробиологии» С.А.Павлович, 1993.

ЗАНЯТИЕ №10

ТЕМА: Структура и функция системы иммунитета. Основные понятия иммунитета. Цитокины и интерлейкины. Развитие и дифференцировка

Т- и В-лимфоцитов.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ:

1. Знать теоретический материал по теме занятия.

2. Уметь в мазках определить феномен розеткообразования Т-лимфоцитов с эритроцитами барана.

3. Знать принцип проточной цитометрии для оценки субпопуляции лимфоцитов.

ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:

1. Определение понятия «иммунитет», феномены иммунитета, «иммунологическая память».

2. Система иммунитета: подсистемы, центральные и периферические органы.

3. Центральные понятия системы иммунитета: антигены, антитела, рецепторы, цитокины.

4. Виды иммунитета.

4. Цитокины: общие свойства, классификация.

5. Интерлейкины.

6. CD-антигены.

7. Т-лимфоциты, развитие и дифференцировка. Т-клеточный рецептор (ТКР), строение, функция. Субпопуляции Т-лимфоцитов.

8. В-лимфоциты, развитие и дифференцировка. Функция В-лимфоцитов, субпопуляции В-лимфоцитов.

9. Методы определения субпопуляций клеток иммунной системы. Проточная цитометрия для оценки субпопуляции лимфоцитов.

ЛИТЕРАТУРА:

1. Лекционный материал.

2. «Основы иммунологии» Д.К.Новиков, И.И. Генералов, Н.В. Железняк, 2007, стр. 8-20, 33-34, 40-41.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:

1. Демонстрация результатов проточной цитометрии для оценки субпопуляции лимфоцитов.

2. Микроскопия и зарисовка готовых препаратов.

ПРЕПАРАТ №1

Тест розеткообразования

Т-лимфоцитов с эритроцитами барана

окраска по Романовскому-Гимзе

ЗАНЯТИЕ №11

Тема: Антигены. Антитела. Серологические реакции. Реакция преципитации.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ:

1. Знать теоретический материал по теме занятия.

2. Знать назначение и уметь ставить и учитывать реакцию кольцепреципитации с целью определения видовой принадлежности белка.

3. Уметь учитывать результаты реакции преципитации в агаре.

4. Уметь учитывать результаты опыта определения токсигенности микроорганизмов по демонстрационным чашкам.

5. Знать способы получения антитоксических и преципитирующих сывороток.

ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:

1. Антигены: определение, свойства, виды.

2. Инфекционные антигены, виды, характеристика.

3. Неинфекционные антигены, виды.

4. Система HLA-антигенов, роль в иммунитете.

5. Иммуноглобулины: определение, структура.

6. Классы иммуноглобулинов, характеристика.

7. Антитела: виды, механизмы действия.

8. Моноклональные антитела, получение, применение

9. Серологические реакции: общая характеристика, назначение.

10. Реакция преципитации, ингредиенты реакции, цель постановки.

11. Виды реакции преципитации (кольцепреципитация, диффузия в агаре, иммуноэлектрофорез).

12. Способы получения преципитирующих сывороток.

ЛИТЕРАТУРА:

1. Лекционный материал.

2. «Основы иммунологии» Д.К.Новиков, И.И. Генералов, Н.В. Железняк, 2007, стр. 35-40, 42-46, 126-127, 132-133.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:

1. Постановка реакции кольцепреципитации с целью определения видовой принадлежности белка.

Ингредиенты: 1. Вытяжка из пятна крови;

2. Сыворотка, преципитирующая белок человека;

3. Сыворотка, преципитирующая белок курицы.

Ход работы: в пробирку №1 внести пипеткой 1 мл сыворотки преципитирующей белок человека, осторожно по стенке наслоить такое же количество вытяжки. В пробирку №2 внести сыворотку приципитирующую белок курицы и также наслоить исследуемую вытяжку. Полученный результат зарисовать в альбом и сделать заключение о виде белка.

2. Демонстрация реакции преципитации в агаре, реакции преципитации в геле для определения токсигенности бактерий.

ЗАНЯТИЕ №12

Тема: Факторы естественного иммунитета. Фагоциты и фагоцитоз. Система гранулоцитов. Система комплемента.

ЗАНЯТИЕ №13

Тема: Динамика иммунного ответа. Генетический контроль иммунного ответа. Серологические реакции: агглютинации, РПГА, реакция Кумбса, нейтрализации.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ:

1. Знать теоретический материал по теме занятия.

2. Уметь ставить ориентировочную и развернутую реакцию агглютинации с целью определения вида микроба и оценивать результат.

3. Уметь ставить и оценивать результат РПГА с целью определения титра антител в сыворотке больного.

4. Знать назначение и способы получения препаратов: диагностикум, агглютинирующая выворотка, антитоксическая сыворотка, эритроцитарный диагностикум, анатоксин.

ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:

1. Динамика иммунного ответа: неспецифические механизмы защиты.

2. Специфический иммунный ответ на Т-независимые АГ.

3. Специфический иммунный ответ на Т-зависимые АГ: презентация, процессинг, индукция, эффекторная фаза.

4. Иммунный ответ против внутриклеточных микроорганизмов, опухолевых клеток.

5. Механизмы ограничения иммунного ответа.

6. Первичный и вторичный иммунный ответ. Иммунологическая толерантность.

7. Генетический контроль иммунного ответа.

8. Реакция агглютинации: ингредиенты, ее виды, назначение.

9. РПГА: ингредиенты, назначение.

10. Реакция Кумбса: ингредиенты, назначение.

11. Реакция нейтрализации: виды, ингредиенты, назначение.

ЛИТЕРАТУРА:

1. Лекционный материал.

2. «Основы иммунологии» Д.К.Новиков, И.И. Генералов, Н.В. Железняк, 2007, стр. 47-57, 58-66, 127-129, 130-132, 135-136.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:

1. Постановка реакции агглютинации для определения вида микроба.

А) Ориентировочная реакция агглютинации на стекле.

Ингредиенты: 1. Неизвестная культура микроорганизмов.

2. Агглютинирующая сыворотка Е.coli 1: 5.

3. Физиологический раствор.

Зарисовать полученный результат и сделать заключение.

Б). Постановка и учет развернутой реакции агглютинации для определения вида микроба.

Ингредиенты Разведения диагностической сыворотки

1: 1000 1: 2000 1: 4000 1: 8000 1: 16000 К

Физ. раствор 1, 0 1, 0 1, 0 1, 0 1, 0 1, 0

Агглютинирующая сыворотка 1: 500 Е.coli 1, 0 1, 0 1, 0 1, 0 1, 0 -

Исследуемая культура по 3 капли во все пробирки

Термостат 18-20 часов

Результат:

Заключение:

Агглютинирующая сыворотка разводится до титра, указанного на этикетке. Титр сыворотки Е.coli – 1: 8000.

2. Постановка и учет РПГА для определения титра антител в сыворотке больного (серологический метод диагностики).

Ингредиенты Разведения сыворотки больного

1: 20 1: 40 1: 80 1: 160 К

Физ. раствор 0, 4 0, 4 0, 4 0, 4 0, 4

Сыворотка больного 1: 10 0, 4 0, 4 0, 4 0, 4 -

Диагностикум эритроцитарный 0, 4 0, 4 0, 4 0, 4 0, 4

Термостат 1 час

Результат:

Заключение:

ЗАНЯТИЕ №14

Тема: Оценка иммунного статуса. Серологические реакции: ИФА, РИА, РИФ, иммуноблотинг. Клеточные реакции.

ЗАНЯТИЕ №15

ТЕМА: Аллергия, аутоиммунные реакции. Иммунодефициты. Противоопухолевый иммунитет. Аллергены. Кожно-аллергические пробы.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ:

1. Знать теоретический материал по теме занятия.

2. Иметь представление об аллергических реакциях и способах выявления сенсибилизации организма.

3. Уметь оценить результаты РПГА на ревматоидный фактор.

ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:

1. Иммунопатология. Классификация. Основные виды.

2. Иммунодефициты, виды, причины.

3. Аллергия: определение. Общая характеристика. Типы аллергических реакций по Геллу-Кумбсу.

4. Реакции повышенной чувствительности немедленного типа, виды. Анафилактический тип аллергических реакций. Аллергические заболевания, развивающиеся по этому механизму.

5. Цитотоксические, иммунокомплексные, антирецепторные реакции. Аллергические и аутоиммунные заболевания, развивающиеся по этому механизму.

6. Реакции повышенной чувствительности замедленного типа. Аллергические, аутоиммунные и инфекционные заболевания, развивающиеся по этому механизму.

7. Аутоиммунные (аутоаллергические) заболевания, классификация. Механизмы развития отдельных аутоиммунных заболеваний.

8. Кожно-аллергические пробы, использование их в диагностике. Аллергены для кожно-аллергических проб, получение, применение.

9. Особенности противоопухолевого иммунитета. Особенности иммунитета в системе «мать-плод».

ЛИТЕРАТУРА:

1. Лекционный материал.

2. «Основы иммунологии» Д.К.Новиков, И.И. Генералов, Н.В. Железняк, 2007, стр. 79-106, 112-115, 117-118, 142.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:

Постановка и учет РПГА на ревматоидный фактор.

Ингредиенты Разведения сыворотки больного

1: 10 1: 20 1: 40 1: 80 К

Физ. раствор 0, 2 0, 2 0, 2 0, 2 0, 2

Сыворотка больного 1: 10 0, 2 0, 2 0, 2 0, 2 0, 2

Диагностикум эритроцитарный 0, 2 0, 2 0, 2 0, 2 0, 2

Термостат 1 час

Результат:

Заключение:

ЗАНЯТИЕ №16

Тема: Итоговое занятие по иммунологии.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ:

1. Знать теоретический материал занятий №.10-15.

2. Знать препараты для диагностики, иммунопрофилактики и иммунотерапии.

ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:

1. Определение понятия «иммунитет», феномены иммунитета, «иммунологическая память». Система иммунитета: подсистемы, центральные и периферические органы. Центральные понятия системы иммунитета: антигены, антитела, рецепторы, цитокины.

2. Виды иммунитета.

3. Цитокины: общие свойства, классификация. Интерлейкины.

4. CD-антигены.

5. Т-лимфоциты, развитие и дифференцировка. Т-клеточный рецептор (ТКР), строение, функция. Субпопуляции Т-лимфоцитов.

6. В-лимфоциты, развитие и дифференцировка. Функция В-лимфоцитов, субпопуляции В-лимфоцитов.

7. Методы определения субпопуляций клеток иммунной системы. Проточная цитометрия для оценки субпопуляции лимфоцитов.

8. Антигены: определение, свойства, виды.

9. Инфекционные антигены, виды, характеристика.

10. Неинфекционные антигены, виды.

11. Система HLA-антигенов, роль в иммунологии.

12 3 4 Следующая ⇒

Последнее изменение этой страницы: 2017-05-11; Просмотров: 608; Нарушение авторского права страницы