Архитектура Аудит Военная наука Иностранные языки Медицина Металлургия Метрология
Образование Политология Производство Психология Стандартизация Технологии


Связывание гормона с рецептором



Возникновению биологической реакции в ответ на гормональное воздействие должно предшествовать связывание гормона с рецептором клетки-мишени. В этом сценарии рецептор лучше рассматривать в качестве посредника, который преобразует внеклеточное сообщение, переданное с гормоном, во внутриклеточный сигнал, итогом которого станет специфический клеточный ответ.

Все гормональные рецепторы, описанные к настоящему времени, содержат только один сайт связывания, так что в любой момент времени комплекс с рецептором может формировать только одна молекула гормона. В отличие от ферментативных реакций, где связывание субстрата с ферментом приводит к изменению его структуры, гормон при связывании с рецептором никаким изменениям не подвергается. Следует также отметить, что взаимодействие гормон — рецептор сводится к образованию нековалентной обратимой связи, т. е. является временным.

После связывания рецептора с гормоном его трехмерная структура претерпевает определенные изменения. Именно эти конформационные изменения приводят к активации эффекторного участка рецептора и запуску цепи событий, приводящих в результате к клеточному ответу, характерному для данного гормона. Важно понимать, что несмотря на обратимость связывания рецептора с гормоном, биологические процессы, которые инициируются вследствие образования комплекса гормон — рецептор, продолжаются еще в течение некоторого времени после диссоциации этого комплекса. С другой стороны, индуцированный клеточный ответ в отсутствие образования дополнительных комплексов гормон — рецептор будет ограниченным, следовательно, для подержания клетки-мишени в активированном состоянии на протяжении продолжительного периода времени с целью сохранения гомеостаза содержание гормона в крови должно оставаться на постоянном уровне, чтобы новые молекулы гормона могли взаимодействовать с освободившимися рецепторами.

Типы рецепторов и способы передачи гормонального сигнала

В случае любой ткани-мишени и любого гормона возникновению биологической реакции, индуцированной гормоном, должно предшествовать его связывание со специфическим рецептором, который экспрессируется гормончувствителыюй клеткой. Несмотря на широкий спектр гормонов, продуцируемых эндокринной системой, и разнообразие типов клеток, чувствительных к этим гормонам, все рецепторы на основании их локализации можно разделить на две обширные группы: 1) мембранные или поверхностные и 2) внутриклеточные рецепторы. Мембранные рецепторы располагаются в плазматической мембране клетки-мишени и взаимодействуют с белково-пептидными гормонами и катехоламинами. Как видно из их названия, внутриклеточные рецепторы находятся внутри клетки и взаимодействуют со стероидными и тиреоидными гормонами, которые представляют собой небольшие липофильные молекулы, с легкостью проникающие в клетку через плазматическую мембрану.

Внутриклеточные рецепторы

Вследствие того что внутриклеточные рецепторы находятся в свободном состоянии, существует некоторая несогласованность в данных об их точной локализации. Первоначально считалось, что свободные внутриклеточные рецепторы находятся в клеточном цитозоле и после взаимодействия с гормоном комплекс гормон — рецептор перемещается в ядро. Однако в настоящее время стало очевидным, что даже в несвязанном состоянии внутриклеточные рецепторы для большинства стероидных гормонов располагаются преимущественно в ядре. Исключение составляет глюкокортикоидный рецептор, который в несвязанном состоянии расположен на внешней части ядерной мембраны (Lazar, 2003). Все рецепторы липофильных гормонов имеют одну общую особенность — до момента связывания с гормоном они остаются неактивными. Отличительной чертой такого неактивного состояния является то, что рецептор обычно находится в комплексе с белками теплового шока (БТШ), в частности БТШ90 (Joab et al., 1984; Catelli et al., 1985). После связывания гормона с рецептором происходит диссоциация его комплекса с белком-шапероном и освободившиеся рецепторы образуют димеры. В таком “активированном” состоянии цитоплазматические и ядерные рецепторы перемещаются к ядерной ДНК, где они взаимодействуют с гормончувствительными элементами (hormone response elements, HREs). Благодаря взаимодействию с гормончувствительными элементами ДНК гормонрецепторный комплекс получает возможность регулировать транскрипцию специфических генов. Внутриклеточные рецепторы, соответственно, принадлежат к большому семейству факторов, осуществляющих регуляцию транскрипции, или транскрипционных факторов.

Определение аминокислотной последовательности внутриклеточных рецепторов позволило понять механизмы их взаимодействия с гормонами и ДНК. На С-концевом участке белка расположена последовательность длиной около 250 аминокислотных остатков, обладающих липофильпыми свойствами и образующих пространственный “карман", способный связывать стероидные и тиреоидные гормоны. Уникальная последовательность аминокислот, формирующих этот карман, определяет специфичность рецептора но отношению к определенному гормону.

Связывание комплекса гормон —рецептор со специфическими гормон-чувствительными элементами, ассоциированными с гормонзависимыми генами, осуществляется ДНК-связывающим компонентом, состоящим примерно из 70 аминокислот, которые также располагаются на С-конце белка-рецептора. Общей чертой всех ДНК-связывающих доменов является наличие двух высококонсервативных участков, которые называются “цинковыми пальцами” (“zinc fingers" ) и непосредственно отвечают за взаимодействие с ДНК (Scheidereit et al., 1986). Последующая транскрипция осуществляется транскрипционным комплексом, в состав которого входят также “общие факторы транскрипции” и “позитивно действующие кофакторы” (McKenna et al., 1999). Эти коактиваторы усиливают скорость транскрипции, по крайней мере отчасти, за счет раскручивания двойной спирали ДНК и стимуляции РНК-полимеразы (Kuo, Allis, 1998).

Таким образом, цепь последовательных событий, обусловленных воздействием стероидных или тиреоидных гормонов на клетку-мишень, выглядит следующим образом:

· проникновение гормона в клетку путем простой диффузии;

· формирование комплекса гормон—рецептор;

· диссоциация от БТШ и димеризация рецепторов;

· перемещение к ДНК;

· связывание с гормончувствительными элементами;

· образование транскрипционных комплексов;

· синтез специфических мРНК;

· трансляция в цитозоле белков, кодируемых мРНК.

В качестве иллюстрации эффективности и комплексности гормонального воздействия можно привести действие одного липофильного гормона, который при взаимодействии со своими внутриклеточными рецепторами обладает способностью регулировать транскрипционную активность нескольких генов, изменяя таким образом синтез нескольких белков. Тем не менее все эти события являются хорошо скоординированными, поскольку все синтезированные белки необходимы для реализации единого, общего биологического клеточного ответа. Например, функция альдостерона заключается в поддержании нормального содержания натрия в организме. Для этого альдостерон - стимулирует реабсорбцию натрия в почечных канальцах, когда концентрация натрия в крови уменьшается и становится ниже нормы. Это происходит путем увеличения синтеза не только белков натриевых каналов и натриевых насосов, расположенных в мембранах почечных канальцев, но и ферментов, синтезирующих аденозинтрифосфат (АТФ), необходимый для работы этих насосов. Такая синхронизированная продукция нескольких белков обеспечивает увеличение реабсорбции натрия в почечных канальцах с целью поддержания нормального осмотического давления и водного баланса организма.

Поскольку механизмы действия внутриклеточных эндокринных рецепторов включают регуляцию синтеза белка, биологические эффекты стероидных и тиреоидных гормонов обычно проявляются довольно медленно и сохраняются на протяжении длительного времени. Однако, по последним данным, липофильные гормоны в некоторых случаях вызывают быструю, краткосрочную реакцию, не связанную с изменениями белкового синтеза (Oichinik et al., 1991). Несмотря на то что точный механизм такого быстрого ответа остается неизвестным, создается впечатление, что его инициация происходит при взаимодействии стероидного гормона с плазматическими рецепторами клетки-мишени, а не с внутриклеточными сайтами связывания.

Мембранные рецепторы

В отличие от рецепторов, взаимодействующих с липофильными гормонами, которые легко проникают через мембрану клетки-мишени, рецепторы для липофобных гормонов (белково-пептидных) располагаются на поверхности клеточной мембраны, поскольку эти гормоны не могут попасть в клетку. И, поскольку формирование комплекса гормон — рецептор происходит на внешней поверхности клетки, ответные внутриклеточные события реализуются посредством использования механизма передачи сигнала, обеспечивающего быструю реакцию. Быстрота ответа обеспечивается тем, что мембранный рецептор находится в связанном со вторичным мессенджером состоянии (в роли первичного мессенджера выступает гормон), т. е. система передачи сигнала находится в постоянной готовности, ее необходимо только активировать образованием комплекса гормон — рецептор. Такое взаимодействие обеспечивает быструю активацию клеточного ответа и столь же быстрое его выключение.

Передача внешнего сигнала, который поступает вместе с молекулой гормона, к внутриклеточной цепи передачи сигнала обеспечивается благодаря особому химическому строению мембранных рецепторов. Все они состоят из трех различных частей, несмотря на то, что сам по себе рецептор обычно представлен одной полипептидной цепью (Spiegel et al., 2003). Внеклеточный компонент располагается па N-терминальном конце аминокислотной последовательности и содержит гликозилированные участки. Углеводные остатки, расположенные в этих участках, могут принимать участие в связывании с гормоном, которое специфически происходит в цистеинбогатых карманах. Каждый из трансмсмбранных компонентов рецептора, а мембранные рецепторы обычно имеют несколько трансмембранных участков, состоит примерно из 25 липофильных аминокислот и формирует спиральную структуру. Внутриклеточный компонент располагается на С-концевом участке полипептидной цепи и отвечает за эффекторную функцию рецептора. Как правило, внутриклеточный регион, состоящий из липофобных аминокислот, содержит регуляторные участки, в частности участки фосфорилирования.

Хотя действие мембранных рецепторов опосредовано передачей сигнала по многочисленным путям вторичных мессенджеров, на основании особенностей пострецепторных взаимодействий их можно разделить на следующие классы:

· лиганд-чувствительные каналы;

· рецепторассоциированные киназы;

· рецепторассоциированная гуанилатциклаза;

· цитокиновые рецепторы;

· G-белок сопряженные рецепторы.

В первых трех классах при связывании гормона рецептор сам непосредственно стимулирует клеточную реакцию, но в случае цитокиновых и G-белок сопряженных рецепторов рецептор для стимуляции специфического клеточного ответа, вызванного гормоном, использует активацию еще одной молекулы — промежуточного мессенджера.

В случае гормончувствительных каналов белок-рецептор формирует не только внеклеточный гормоносвязывающий компонент, но и капал через клеточную мембрану, который при открывании делает возможным транспорт определенных ионов. Открывание канала происходит при связывании лиганда, которое приводит к конформационному сдвигу трансмембранных спиралей и формированию прохода через мембрану для определенных ионов. Такой тип рецепторов встречается на возбудимых клетках, в частности на нейронах и миоцитах, где перенос ионов через мембрану приводит к изменению мембранного потенциала и последующей стимуляции ответа клетки-мишени.

Наиболее изученным и распространенным рецептором, обладающим киназной активностью, является тирозинкиназа. В геноме человека было идентифицировано примерно 100 тирозинкиназных рецепторов (Spiegel et al., 2003). Хотя все они имеют общие особенности организации трансмембранного компонента, внеклеточный компонент характеризуется высокой степенью вариабельности, обеспечивающей возможность специфического взаимодействия с различными лигандами. В отличие от большинства мембранных рецепторов члены семейства тирозинкиназных рецепторов взаимодействуют только один раз. В то же время подобно многим другим рецепторам при связывании с гормоном они димеризуются и это событие является ключевым моментом в активации рецептора. После такой активации специфический участок внутриклеточного компонента рецептора фосфорилирует тирозиновые остатки фермента внутри клетки и таким образом стимулирует необходимые клеточные процессы. Более того, активированный рецептор способен фосфорилировать свои собственные тирозиновые остатки, расположенные в цитоплазме. Такое “аутофосфорилирование" позволяет рецептору сохранить активное состояние и усилить сигнал, переданный гормоном. Прекращение гормониндуцированного клеточного ответа происходит после диссоциации комплекса гормон—рецептор и дефосфорилирования рецептора клеточными фосфатазами.

Другие рецепторассоциированные киназы, представленные меньшим количеством но сравнению с тирозинкиназными рецепторами, имеют сходный механизм передачи сигнала и стимуляции клеточного ответа путем фосфорилирования определенных ферментов в цитоплазме клетки-мишени. Рецепторы, обладающие протеинкиназной активностью, могут осуществлять фосфорилирование остатков треонина и серина ферментов внутри клетки. И точно так же стимуляция клеточного ответа прекращается после диссоциации комплекса гормон — рецептор и дефосфорилирования активного фермента клеточными фосфатазами. Такое сходство поведения демонстрирует общие принципы реализации механизма функционирования мембранных рецепторов: гормон — индуцированная реакция клетки “выключается” как на внеклеточном, так и на внутриклеточном уровне.

Рецепторы, использующие для передачи сигнала гуанилатциклазу, представляют собой еще одно семейство мембранных рецепторов, которые имеют в своем составе каталитический компонент и способны самостоятельно стимулировать клеточную реакцию. По сравнению с другими типами мембранных рецепторов это семейство менее многочисленно, похоже, что только найтрийуретический фактор, продуцируемый клетками сердечной мышцы, использует рецепторы этого типа для осуществления регуляции активности своих клеток-мишеней. В этом случае передача сигнала первичного мессенджера (гормона) внутрь клетки осуществляется с помощью одного мембранного рецептора. После связывания лиганда с внеклеточным компонентом в молекуле рецептора происходят конформационные изменения, которые приводят к активации гуанилатциклазы — фермента, который является частью внутриклеточного компонента рецептора. Активированный фермент превращает гуанозинтрифосфат (ГТФ) в циклический гуанозинмонофосфат (цГМФ), который в свою очередь активирует нуклсотидзависимыс протеинкиназы клетки, которые осуществляют фосфорилирование других цитоплазматических белков.

Цитокиновые рецепторы но механизму действия очень похожи на тирозин киназные: они также используют тирозинкиназы для индукции клеточного ответа. Основным отличием является то, что у цитокиновых рецепторов внутриклеточный компонент не обладает тирозинкиназной активностью. Тирозин-киназа в данном случае представляет собой независимый белок. Представители семейства цитокиновых рецепторов, которое включает рецепторы гормона роста и пролактина, состоят из нескольких субъединиц. После связывания с лигандом эти рецепторы формируют олигомеры и активируют янус тирозинкиназы (janus trosine kinase, JAK), которые располагаются поблизости от рецепторов на внутренней стороне плазматической мембраны клетки (Heim, 1999). Сами по себе цитокиновые рецепторы не проявляют никакой ферментативной активности (Argetsingcr et al., 1993). Создается впечатление, что активация JAK происходит в результате их “стягивания” в одно место с рецепторами после формирования олигомеров комплексов гормон — рецептор и последующего взаимного трансфосфорилирования тирозиновых остатков. После этого активированные киназы осуществляют фосфорилирование ферментов в цитозоле, что в результате приводит к передаче сигнала, поступившего к клетке с гормоном. Как в описанной выше ситуации, прекращение гормониидуцированной клеточной реакции происходит после диссоциации комплекса гормон — рецептор, а также инактивации тирозинкиназ путем их дефосфорилирования клеточными фосфатазами.

Наиболее многочисленной группой мембранных рецепторов является семейство G-белок сопряженных рецепторов. Более тысячи различных лигандов используют эти рецепторы для передачи сигнала (Spiegel et al., 2003). Однако во всех случаях G-белок и ассоциированный с ним рецептор представляют собой два различных белка, которые связаны между собой только функционально, но не структурно. Несмотря на то что рецепторы этого семейства имеют 7 трансмембранных участков, они неспособны самостоятельно регулировать внутриклеточные процессы после связывания с гормоном. Для этого они используют расположенные по соседству на внутренней поверхности мембраны G-белки, которые после образования комплекса гормон — рецептор индуцируют клеточный ответ. G-белки, которые получили свое название из-за потребности в ГТФ для осуществления своих функций, могут оказывать стимулирующее (Gs) или ингибирующее (Gi) действие, при этом более распространенной является первая ситуация.

Все G-белки представляют собой гетеротримеры, т. е. состоят из трех субъединиц, которые называются а, р, у. В неактивном состоянии а-субъединица связана с гуанозиндифосфатом, однако после связывания гормона с рецептором происходит замена ГДФ на ГТФ и активация G-белка. Активный G-белок может стимулировать разнообразные внутриклеточные системы вторичных мессенджеров и, таким образом, регулировать — причем даже одновременно — несколько внутриклеточных процессов. Рассмотрим в отдельности основные системы передачи сигнала, используемые активным G-белком.


Поделиться:



Последнее изменение этой страницы: 2017-05-05; Просмотров: 627; Нарушение авторского права страницы


lektsia.com 2007 - 2024 год. Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав! (0.027 с.)
Главная | Случайная страница | Обратная связь