Дополнение к диагностике полиомиелита в культуре ткани.

I. Для культивирования вирусов полиомиелита чаще используют:

­ Первично трипсинизированные почки обезьяны,

­ Первично трипсинизированные клетки почек эмбриона человека.

­ Перевиваемые культуры клеток Нер-2, Детройт (первые-злокачественные клетки рака гортани человека).

О размножении вируса в культуре клеток свидетельствуют:

­ ЦПД энтеровирусного типа (округление клеток).

­ Отсутствие феномена гемадсорбции (вирусы полиомиелита не имеют антигена-гемагглютиногена),

­ Отсутствие феномена гемагглютинации с культуральной жидкостью и взвесью эритроцитов,

­ При прямой люминесцентной микроскопии клеточного пласта, обработанного только флюорохромом, включений вируса ни в протоплазме, ни в ядре обнаружить не удается.

- При иммунофлюоресцентном методе исследования –РИФ – то есть его комплексной обработке иммунной сывороткой с меченными антителами , вирусные включения хорошо видны.

 

II.  цветная проба:

­ В культуре ткани, не зараженной вирусом, под влиянием продуктов ее метаболизма рН среды меняется в кислую сторону. Поэтому и цвет индикатора (фенолрот) в питательной среде меняется с красного на желтый.

­ В культуре клеток, зараженных вирусом, клетки гибнут, рН среды практически не меняется, цвет среды остается обычным - красным.

­ Тип вируса устанавливают по реакции нейтрализации цветной пробы с помощью специфических антител иммунной сыворотки.

III.  метод бляшек.

 - Выращивают однослойную культуру клеток.

- Удаляют питательную среду (культуральный субстрат).

- Вносят вируссодержащий материал, встряхивают осторожно.

- Заливают инфицированный монослой клеток расплавленным агаром с индикатором (нейтральным красным), помещают в термостат на 24 – 72 часа.

- Там, где клетки растут, рН над ними изменяется в кислую сторону и среда, т. е. слой агара в этой зоне, становится розовым.

- Тип вируса устанавливают по реакции нейтрализации феномена бляшкообразования путём обработки вирусосодержащего материала специфической иммунной сывороткой.

 

Приложение 8

Иммунологические методы диагностики:

­ Раннее применение иммунологической диагностики используют для идентификации выделенных от больного вирусов с помощью известных специфических противовирусных иммунных сывороток. По сути все эти реакции демонстрируют разные варианты биологической нейтрализации действия вирусов:

­ Соединив вирусосодержащий материал с иммунной сывороткой, помещают взвесь в термостат при температуре +4,+18,+37⁰С (в зависимости от вида вируса) на 1 час. Предполагаем, что антитела при этом взаимодействуют с вирионами и лишают их инфекционности;

­ Далее эту смесь можно ввести чувствительным животным и не наблюдать симптомов, присущих активности данного возбудителя, в связи с его нейтрализацией антителами;

­ Её можно ввести в культуру ткани и наблюдать феномен подавления ЦПД, цветной пробы, бляшкообразования. На том же основании эту смесь можно ввести в развивающиеся куриные эмбрионы (если изучаемый вирус способен развиваться в них) не причиняя им при этом вреда. На этом же основании поиск вирусного антигена в организме больного или вирусоносителя.

II. Методы поздней и ретроспективной диагностики – основан на поиске антител в сыворотках крови больных и переболевших. Они выполняются с помощью эталонных вирусных диагностикумов. При этом можно использовать разные реакции.

-РСК с парными сыворотками по общим правилам, с учётом нарастания их титра и интенсивности.

­ Реакцию иммунодиффузии (РИД) – взаимодействие (с предполагаемыми антителами) сыворотки крови больного и антигена (известного, приготовленного на биофабрике) наблюдают в полужидкой агарозной среде и оценивают по появлению линий преципитации.

­ Различные варианты реакций иммунобиологической нейтрализации (см. выше).

­ Иммуноферментный метод и многие другие.

 

Приложение 9.

Этапы патогенеза прионных инфекций:

­ На нормальных нейронах экспрессируется клеточный гомолог PrP, по своим свойствам мало отличающийся от инфекционной формы. Он содержит резистентную к протеазам сердцевину, гомологичную инфекционному прионозу (PrP^sc).

­ PrP^sc локализуется внутриклеточно, полимеризуясь в амилоидные полочковидные структуры. Внутриклеточная локализация прионов и резистентность его к действию протеаз обуславливает отсутствие у него иммуногенных свойств.

­ Проникновение инфекционного агента в клетку изменяет ход структуры PrP и приводит к развитию дегенеративных процессов в нейроне.

Клинически прионные инфекции протекают по типу спонгиоформных энцефалопатий с постепенным расстройством рефлексов с конечностей, гипотонией, нарушением глотания и деменцией. Процесс медленно прогрессирует и заканчивается гибелью пациента. Поэтому прионозы называются медленными инфекциями.

       В группу возбудителей медленных (неконвенционных) инфекций включены агенты, способные вызвать развитие подострых, но прогрессирующих поражений ЦНС. Среди болезней человека наиболее изучены Куру, болезнь Крайтцефельда-Якоба, синдром Рерсимана-Страуселера-Шайкера, амнотрофический лейкоспондгиоз, спогиоформная энцефалопатия крупного рогатого скота. Особенность этих заболеваний – практически полное отсутствие значимых иммунных реакций. Гистологически в тканях мозга выявляют амилоидные скопления, генерализованную гипертрофию астроцитов и выраженную губчатую дегенерацию.

⇐ Предыдущая123

Поделиться: