Методические указания к выполнению работы

 

 Протеолитические ферменты бактерий определяются по наличию продуктов деструкции белка. Протеолитическая активность одного и того же микроорганизма культивации на разных питательных средах проявляется неодинаково, что обусловлено специфичностью ферментов. Чаще всего для этой цели в качестве белкового субстрата применяют желатин, свернутую лошадиную сыворотку, молоко.

Некоторые виды микроорганизмов с выраженной протеолитической активностью обладают способностью расщеплять белок и пептон до продуктов глубокого распада: индола, сероводорода, мочевины, аммиака. При определении видов наибольшее значении имеет выявление индола и сероводорода. Образование H₂S и индола в микробной культуре определяют одновременно. Для выявления протеолиза ферментов используемую культуру засевают в питательную среду, содержащую тот или иной белок (МПБ).

Определение индола в культуре микроорганизмов по Морелю. Индол образуется из сложной гетероцикличной кислоты триптофана. Для выявления индолобразования, культуру микроорганизмов засевают петлей в МПБ. Пептон – промежуточный продукт распада белков, представляет собой смесь полипептидов и аминокислот (триптофана). Хорошо растворяется в воде и не свертывается при нагревании. Получают пептон из рубцов крупного и мелкого рогатого скота.

 После посева под пробку вставляют индикаторную бумажку, пропитанную горячим насыщенным 12 % водным раствором щавелевой кислоты и высушенной в термостате. Бумагу закрепляют между пробкой и стенкой пробирки. Пробирки с исследуемой культурой помещают в термостат на трое суток температуре 48°С (следить чтобы она не упала в питательную среду и не касалась её поверхности

Учет результата: образование индола сопровождается окрашиванием нижнего конца индикаторной бумаги в слабо розовый цвет.

Определение сероводорода, который является конечным продуктом расщепления серосодержащих аминокислот (цистеина, цистина, метионина). Для определения H₂S исследуемую культуру микроорганизмов засевают в МПБ. После посева под пробку вносятся индикаторная бумага, пропитанная уксуснокислым свинцом.

Учет результата: в случае если культура при росте на МПБ выделяет H₂S, он вступает в соединение с уксуснокислым свинцом, в результате чего образуется сернокислый свинец. При этом бесцветная индикаторная бумага на H₂S окрашивается в черно-бурый цвет.

ЗАДАНИЕ 4. Сравните биохимическую активность у микроорганизмов, относящихся к роду энтеробактерий, но имеющих разную видовую принадлежность (демонстрационный посев) на среде Олькеницкого. По результатам выполненных исследований сделайте заключение и запишите его в протокол рабочей тетради.

 

 

 

 

⇐ Предыдущая12345Следующая ⇒

Поделиться: