Понятие об асептике, антисептике, стерилизации и дезинфекции.

Асептика – совокуп всех методов направленных на уничтожение или резкое снижение численности.

Дезинфекция – мероприятия, направленные на уничтожение или резкое подавление численности патогенных и условно-патогенных мик-мов во внешней среде и на объектах. (методы – химический, физический, механический, биологический) Вещества: Галоидсодержащие, кислородсодержащие, спирты, альдегидосодержащие.

Антисептика – подаление патогенных и условнопатогенных бактерий на коже и слизистых. Стерилизация – освобождение объекта от всех микроорганизмов путем химического и физических методов. Методы стерилизацииТермическая: паровая и воздушная (сухожаровая).Химическая: газовая или химическими растворами (стерилянтами)Радиационная стерилизация — применяется в промышленном вариантеМетод мембранных фильтров — применяется для получения небольшого количества стерильных растворов, качество которых может резко ухудшиться при действии других методов стерилизации(бактериофаг, селективные питательные среды, антибиотики)

 

14. Действие физических факторов на микроорганизмы.. Стерилизация — обработка объектов, при кот достиг-ся полное уничтож всех мик-мов. В рез-те стерилиз объект становсвобод как от патогенных, так и от сапрофитных микробов. в основе лежит дей-е физич или хим факторв. Критерием гибели мик-мов явл необратимая утрата спос-ти к размножПрокаливание на огне —бактер-чских петель, металлич и стекл предметов. применяется огранич-но ввиду их порчи. Стерилизац сухим жаром или горяч воздухом произ-тся в сушильных шкафах или печах Пастера при т. 160—170°С в теч 1—1, 5 ч. стерилизуют лаб-ую посуду, инструменты, минер масла.Кипячением в теч-е 30 мин.убивает вегетатив форм. микр-ов. Споры многх бактерий при этом сохр, выдерж кипячение в теч неск часов. Для унич вирусов —в теч 45—60 мин. подверг шприцы, хир инстр, иглы, резин трубки. В автоклаве. Это 2-стенный металлич котел, + герметич закрыв крышку. Под котел налив воду. Вода нагрев и образ-ся пар.по спец патрубку, соед с котлом, поступв рабоч камеру котла.Пар вытесн воздух(вых через клапан). как воздух полн-ю вытеснен из камеры, из выпуск-го клапана пойдет насыщ «сухой пар», крышку герметически закрывают. Стерилизация текучим паром пров-тся в аппарате Коха или в автоклаве при незавинч крышке и открытом выпускном кране. На дно аппарата Коха наливают воду и нагревают до 100°С. Образующ-чся пар движ вверх через заложенный материал и стерилизует его.
Стерилизация фильтрованием через бактериальные фильтры для освобождения жидкостей от бактерий. используют в тех случаях, когда жидкость портится от нагрев, при необ-ти отделения бактериальных клеток от растворимых продуктов их жизнед-сти (экзотоксины, антибиотики и др.), фагов, вирусов. В механизме стерилизации фильтрованием играют роль размер пор и адсорбция микробов на стенках пор фильтров.
Химическая стерилизация применяется в том случае, если объекты нельзя автоклавировать. Обычно это питательные среды, содержащие термолабильные вещества..1.Температура: термофилы (50-60) психрофилы (10-15) мезофилы (35-37)2.Реакция среды – нейтр и слаб-щел кисл3.Влажность –4.Радиация, ультразвук и давление.

 

15. Бактериофаг. Получение, титрование Это вирусы, избирательно поражающие бактериальные клетки. Чаще всего бактериофаги размножаются внутри бактерий и вызывают их лизис. большинство фагов состоит из головки, воротничка и хвостового отростка, заканчивающегося базальной пластинкой, к которой прикреплены фибриллы.Содержание головки — это ДНК (иногда РНК). Хвостовой отросток имеет цилиндрический стержень, окруженный сократительным чехлом. В оболочку фаговой частицы и отросток входит белок, состоящий из полиаминов: спермин, путресцин, кислоторастворимый пептид. Фаг получают путем добавления в котлы с бульонными культурами специального производственного фага, который выдерживают сутки при 37°С, затем фильтруют. Проверяют на чистоту, стерильность, безвредность и активность (силу действия). Титрование бактериофага - определение активности бактериофага по способности различных разведений его взвеси лизировать бактериальные культуры в жидких питательных средах или образовывать негативные колонии в бактериальном газоне на плотных питательных средах. Применение: фаготипирование и дифференцировка бактерий, лечение.

 

16. Фазы взаимодействия фага с бак. Клеткой. К клет стенке бактерий фаги прикреп концевы­ми нитями отростков. Затем оболочка бактерии раств-ся с пом-ю фермента лизоцима, белковый чехол хвостового от­ростка сокращается и через канал хвостового отростка нукл кис-та вводится (впрыскивается) в цитоплазму клетки. После проникн нукл кис-ы внутрь клетки бак­терии следует Си-фаза, или фаза смены информации. В этот период фаговые частицы не обнаруживаются, однако в клетке развиваются процессы, обусловл. фаговым геномом. Начи-ся синтез иРНК и ранних белков, необх для синтеза ДНК фага и других структурных компонентов зрелого фага. Син­тез ДНК фага осущ-ся с пом клеточной ДНК-полимеразы и сопровожд полным распадом ДНК бактерии и ее утилизацией. Если ДНК бактерии не хватает, фаговая ДНК син­тезируется из компонентов среды. ДНК фага можно обнаружить в клетке через 8—9 мин после заражения. С 9-й минуты начина­ют синт-ся специфичные фаговые белки. На последнемэтапе взаим-ия фага с бактерией происходит самосборка фаговых частиц, кот состоит в необратимом объединении фаговой ДНК и сформировавшейся белковой оболочки. После происходит лизис бактерии и зрелые фаги выходят в окру­ж среду. Полный цикл развития фага составляет 30— 90 мин. За этот период образуется 200 и более фаговых частиц, которые способны заражать новые клетки. Лизогения — совместное существование бактерий и бактериофагов, при котором бактериофаг является составной частью нормально развивающейся бактериальной клетки.

 

17. Генетический аппарат у бактерий.. Нуклеоид - ядерное вещество, распыленное в цитоплазме клетки. Не имеет ядерной мембраны, ядрышек. В нем локализуется ДНК, представл двухцепочечной спиралью. Обычно замкнута в кольцо и прикреплена к цитоплазматич мембране. виды изменчивости микроорганизмов.Диссоциация — измельчение гладких форм колоний (S-форма) в шероховатые (R-форма). Такой переход от S- к R-форме совершается под влиянием бактериофага и других внешних условий. С изменением формы микроор-ма меняются его некоторые морфолог и физиологич свойства.

Адаптация — приспособл к новым условиям существования, это временные изменения.

Трансформация — передача опред свойств одного микроор-ма другому посредством дезоксирибонуклеиновой (ДНК) или рибонук кислот (РНК). Мутация — вновь возникающее изменение свойств мик-ма, передающ по наследству. Бактерии с измененн признаками наз мутантами. Спонтанные мутации возникают под влиянием неизвестных причин и лежат в основе эволюции мик-мов. Факторы, вызыв мутации, наз мутагенами. Различ физич, хим и биол мутагены. Фенотипич изменчивость - модификации - не затрагивает генотип. Модификации затрагивают боль-во особей популяции. Они не передаются по наследству и с теч-м времени затухают, т.е. возвр-ся к исход фенотипу через большее (длител модификации) или меньшее (кратковрем модификации) число поколений.Генотипич изменчивость затрагивает генотип. В ее основе лежат мутации и рекомбинации.

18. Генетические рекомбинации:

Процесс образов геномов, содерж генетич материал от 2 родит-х форм.у бактерий осущ в рез-е (назв бил.). Рекомбинации: законные и незак. З. рек-я требует налич протяженных, комплементаручастков ДНК в рекомбинир-х молекулах. Она про-дит только между близкородств видами мик-мов.Н.р. не требует наличия протяж ком.уч. ДНК. Трансформация — процесс поглощения клеткой орг-ма свободной молекулы ДНК из среды и встраивания её в геном, приводит к появл у клетки новых для нее признаков, хар-ных для организма-донора ДНК. Клетки, способные воспринимать донорную ДНК, наз-ся компетентными. Сост-е комп-ти непродолж. возникает в опред период роста бактер культуры.В сост ком-ти клет стенка бактерий стан-ся проницаемой для высокополимерных фрагментов ДНК. трансформ-мый фрагмент ДНК связ-ся сбелком,, образ. трансформасому, в кот. он перен-ся в бактер-ю клетку..После проникнов внутр клетки трансформирующая ДНК деспирализуется. -> происх-ит физич включ любой из 2нитей ДНК донора в геном реципиента. Трансдукция — процесс переноса бактериальной ДНК из 1 клетки в другую бактериофагом. Неспецифич: трансдуцир фаги явл только переносчиком генетич материала от одних бактерий к другим Специфич: хар-ся способ-ю фага переносить опред гены от б.-донора к б.-реципиенту. Абортивная: принесенный фагом фрагмент ДНК бактерии донора не включ-ся в хро-му бактр реципиент, а располаг в цитоплазме. Конъ-ция - однонаправл перенос части генетич матер-ла при непосредств контакте 2 бак-ых клеток. 1 этап явл прикрепл клетки-донора к реципиентн клетке с пом. половых ворсинок.Затем между обеими клетками обр-ся конъюгационный мостик через кот из клетки-донора в клетку-реципиент могут передаваться F-фактор и другие плазмиды, наход-ся в цитоплазме бактерии-донора в автономном состоянии. Транспозиция - перемещ опред генетич элементов из одного места на хромосоме в другое. Генная инженерия — совокуп приёмов, методов и технологий получения рекомбинантных РНК и ДНК, выделения генов из организма(клеток), осуществл-я манипуляций с генами и введения их в другие организмы.

 

19. Нехромосомные генетические факторы у бактерий. Плазмиды — внехромосомные мобильные генетич структуры бактерий, представл собой замкнутые кольца двунитчатой ДНК несущие от 40 до 50 генов. Выделяют автономные (не связанные с хромосомой бактерии) и интегрированные (встроенные в хромосому) плазмиды.Автономные существуют в цитоплазме бактерий и способны самост-о репродуцироват-я; в клетке может присутствовать несколько их копий.Интегрированные плазмиды репродуц-ся одновременно с бактериал. хромосомой. Интеграция плазмид происходит при наличии гомологичных последовательностей ДНК, при которых возможна рекомбинация хромосомной и плазмидной ДНК (что сближает их с профагами).Плазмиды также подразделяют на трансмиссивные (например, F- или R-плазмиды), способные передаваться посредством конъюгации, и нетрансмиссивные.iS-последовательности — короткие фрагменты ДНК. Они не несут структурных (кодирующих тот или иной белок) генов, а содержат только гены, ответственные за транспозицию (спо­собность IS-последовательностей перемещаться по хромосоме и встраиваться в различные ее участки). IS-последовательности одинаковы у разных бактерий. Транспозоны — это молекулы ДНК, более крупные, чем IS-после­довательности. Помимо генов, ответственных за транспози­цию, они содержат и структурный ген, кодирующий тот или иной признак. Транспозоны легко перемещаются по хромосоме. Их положе­ние сказывается на экспрессии как их собственных структур­ных генов, так и соседних хромосомных. Транспозоны могут существовать и вне хромосомы, автономно, но неспособны к автономной репликации.Бактериофа́ ги — вирусы, избирательнопоражающие бактериальные клетки. Чаще всего бактериофаги размножаются внутри бактерий и вызывают их лизис. Как правило, бактериофаг состоит из белковой оболочки и генетического материала одноцепочечной или двуцепочечной нуклеиновой кислоты (ДНК или, реже, РНК). Размер частиц приблизительно от 20 до 200 нм

 

20. Молекулярные методы диагнос(пцр) (ПЦР) — эксперимент-ый метод молекулярной биологии, позволяющий добиться значительного увеличения малых концентраций опред фрагментов нукл к-ты (ДНК) в биологич материале (пробе). Помимо амплификации ДНК, ПЦР позволяет производить множество других манипуляций с нукл к-ми (введение мутаций, сращивание фрагментов ДНК) и широко исп-ся в биологич и мед практике, н-р, для диа-ки заболеваний (наследственных, инфекц-х), для установ отцовства, для клонированиягенов

, выделения новых генов.Денатурация 2-цеп-ую ДНК-матрицу нагревают до 94—96 °C чтобы цепи ДНК разошлись. Эта стадия называется денатурацией, так как разруш водородные связи между 2 цепями ДНК.Отжиг Когда цепи разошлись, температуру понижают, чтобы праймеры могли связаться с одноцепочечной матрицей. Эта стадия наз-ся отжигом.Элонгация ДНК-полимераза реплицирует матричную цепь, используя праймер в качестве затравки. Это — стадия элонгации. Полимераза начинает синтез второй цепи от 3'-конца праймера, который связался с матрицей, и движется вдоль матрицы в направлении от 3' к 5'.При проведении лигазной цепной реакции исп-ся способность ДНК лигаз восстанавливать фосфодиэфирные связи в одноцепочечных разрывах 2-цеп-ных молекул ДНК. Для этого синтезируют 2 олигонуклеотида, комплементарные непрерывной последовательности нуклеотидов ДНК, которые после гибридизации с такой последовательностью примыкают друг к другу и разделены лишь одноцепочечным разрывом. При этом 3'-конец предшествующего нуклеотида должен содержать свободную 3'-ОН-группу, а в 5'- положении 5'-конца олигонуклеотида, следующего за ним, должна находиться фосфатная группа.

.

 

 

21. Учение о микробном антагонизме. Антагонизм микробный — угнетение роста одного микроба другим..Механизм антагонистического д-я микробов м.б. связан с различ причинами: образованием токсич продуктов метаболизма, а.б..А.б. - вещ-ва микробного происхождения, облад способностью задерживать развитие и вызывать гибель различных мик-мов, главным образом бактерий..Похарактеру воздействия на бактер клетку а.б. можно разделить на 3 группы: бактериостатич(бактерии живы, ноневсостояни размножаться), бактерициды (бактерии погибают, но физич продолжают присутств в среде), бактериолитические (бактерии погибают, и разрушаются бактер. Клет. стенки). группы: Пенициллины

⇐ Предыдущая123Следующая ⇒

Поделиться: