Архитектура Аудит Военная наука Иностранные языки Медицина Металлургия Метрология Образование Политология Производство Психология Стандартизация Технологии |
Кумарины и хромоны. ЛР и ЛРС, содержащие кумарины и хромоны
ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ: 1. Уметь: · определять ЛР по внешним признакам на гербарных образцах и отличать от возможных примесей; · определять подлинность сырья макро- и микроскопическим методами анализа и давать заключение о качестве сырья с использованием НД. · проводить качественный химический и хроматографический анализы ЛРС, содержащего кумарины. 2. Знать: латинские названия, географическое распространение, условия местообитания, районы культуры; сроки, приемы сбора, сушки и хранения ЛРС; химический состав, действующие вещества, их формулы; медицинское применение ЛРС и препаратов, содержащих кумарины и хромоны. ОБЪЕКТЫ ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ: донник лекарственный, амми большая, пастернак посевной, вздутоплодник сибирский, виснага морковевидная (амми зубная). ВОПРОСЫ ДЛЯ САМОПОДГОТОВКИ 1. Определение понятия «кумарины», «хромоны». 2. Классификация. Физико-химические свойства кумаринов. 3. Распространение кумаринов в растительном мире. 4. Методы обнаружения кумаринов в ЛРС. 5. Методы выделения кумаринов из ЛРС. 6. Методы количественного определения в ЛРС. 7. Латинские и русские названия ЛРС, производящих растений и семейств всех объектов изучаемой темы. 8. Морфологическая характеристика растений, ареалы, места обитания, районы возделывания. 9. Рациональные приемы сбора, первичной переработки, сушка и хранение ЛРС. 10. Внешние признаки ЛРС. 11. Химический состав, структурные формулы: кумарин, дигидрокумарин, псорален, ангелицин, изопимпинеллин, бергаптен, умбеллиферон, келлин. 12. Препараты и применение в медицине. ЛИТЕРАТУРА 1. ВФС 42-1049-80. Корневище и корень вздутоплодника сибирского. 2. ГОСТ 14101 - 69. Трава донника. 3. Долгова А.А., Ладыгина Е.Я. Руководство к практическим занятиям по фармакогнозии. М., 1977, с. 164-166. 4. Коноплева М.М. Фармакогнозия. Природные биологически активные вещества – Витебск: ВГМУ, 2002, с.102-113. 5. Муравьева Д.А. Фармакогнозия. М., 1991, с. 413-418, 419, 421-426. 6. Фармакогнозия. Атлас. Под ред. Н.И. Гринкевич, Е.Я. Ладыгиной. М., 1989, с. 424-436. 7. Фармакогнозия / Под ред. проф. Шелюто В.Л., Витебск: ВГМУ, 2003, с. 246 - 265. 8. ГФ РБ. -Молодечно: Типография «Победа», 2009, т.3, с. 704. 9. ФС 42-2548-88. Плоды пастернака посевного. 10. ФС 42-530-72. Амми зубная (смесь плодов с половой). 11. ФС 42-540-72. Плод амми большой. 12. Химический анализ лекарственных растений. Под ред. Гринкевич Н.И., Сафронич Л.Н. М., 1983, с. 94-110. 13. Шелюто В.Л. Лекарственные растения Беларуси. Справочник. – Витебск: ВГМУ, 2003. СОДЕРЖАНИЕ ЗАНЯТИЯ А. Проверка готовности к занятию (тестовый контроль). Б. Выполнение лабораторной работы. Задание 1. Определить подлинность плодов пастернака посевного. 1) Провести макроскопический анализ плодов пастернака посевного. Для этого визуально и с помощью лупы изучить строение плодов и диагностические признаки. 2) Сравнить результаты анализа с ФС и дать заключение о подлинности и качестве сырья по внешним признакам. Задание 2. Определить подлинность травы донника лекарств. 1) Провести макроскопический анализ травы донника. Выделить диагностические признаки. 2) Провести микроскопический анализ листьев донника. Выделить и зарисовать диагностические признаки. 3) Сравнить результаты анализа с ГОСТ и дать заключение о подлинности и качестве сырья по внешним и микроскопическим признакам. Задание 3. Изучить внешний вид ЛР и возможные примеси к ним по гербарным образцам и диагностические признаки ЛРС: плодов амми зубной и амми большой, корневища с корнями вздутоплодника сибирского. Задание 4. Провести качественный химический анализ ЛРС на содержание кумаринов. 1) Получить спиртовое извлечение из ЛРС, содержащего кумарины. Внести в колбу 2, 5 г порошкованного сырья, залить 25 мл 95% спирта и нагреть с обратным холодильником на водяной бане до кипения. Поддерживать кипение 15-20 мин, после чего охладить, профильтровать и использовать для качественных реакций и хроматографии. 2) Определить наличие кумаринов в ЛРС. · Лактонная проба. В 2 пробирки наливают по 2 мл спиртового извлечения. В одну из пробирок прибавляют 0, 5 мл 10 % спиртового р-ра NаОН. Обе пробирки нагревают на водяной бане до кипения и охлаждают. В каждую пробирку приливают по 4 мл воды очищенной. Жидкость в пробирке со щелочью должна быть прозрачной в сравнении с жидкостью, в которую щелочь не добавлялась. При подкислении несколькими каплями НCI (конц.) эта прозрачная жидкость теряет желтую окраску и выделяет белый хлопьевидный (иногда кристаллический) осадок. · Диазореакция. В пробирку наливают 1-2 мл спиртового извлечения и 3-4 мл 2% р-ра натрия гидрокарбоната. Жидкость нагревают до кипения и охлаждают. В пробирку приливают 2-3 капли свежеприготовленного диазотированного n-нитроанилина. Вишнево-красное или интенсивно-буро-красное окрашивание свидетельствует о положительной реакции. Задание 5. Провести качественный хроматографический анализЛРС на содержание кумаринов. Нанести на пластинку " Силуфол" спиртовые извлечения, содержащие кумарины, поместить в хроматографическую камеру с системой растворителей: ЭТИЛАЦЕТАТ: БЕНЗОЛ (1: 2) После прохождения фронта растворителей на 10-12 см хроматограмму извлечь из камеры и высушить. Наблюдать в УФ-свете голубую, синюю, фиолетовую, желтоватую флюоресценцию пятен кумариновых веществ. Отметить их хроматограмме и рассчитать значение Rf. В. Итоговый контроль. Протокол занятия представить преподавателю на проверку и подпись. Ответить на предложенные вопросы по теме занятия.
ЗАНЯТИЕ № 22 Флавоноиды. Анализ ЛРС, содержащего флавоноиды ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ: Знать методы выделения, очистки, обнаружения и количественного определения флавоноидов в ЛРС. Уметь проводить обнаружение и количественное определение флавоноидов в ЛРС. ВОПРОСЫ ДЛЯ САМОПОДГОТОВКИ 1. Классификация и особенности структуры флавоноидных соединений. 2. Физико-химические свойства флавоноидов. 3. Распространение флавоноидов в растительном мире, локализация в растениях по органам и тканям. 4. Методы выделения, очистки и разделения флавоноидов. 5. Анализ (качественный, количественный, хроматографический) ЛРС, содержащего флавоноиды. 6. Формулы: флавона, флавонола, флавана, флаванона, флаванонола, изофлавона, антоцианидина, катехина, халкона, аурона. 7. Биологическая активность флавоноидов. Пути использования ЛРС, содержащего флавоноиды. ЛИТЕРАТУРА 1. Коноплева М.М. Фармакогнозия. Природные биологически активные вещества – Витебск: ВГМУ, 2002, с.113 - 126. 2. Выделение и анализ природных биологически активных веществ. Под ред. Сироткина В.В. Томск. 1987, с. 138-157. 3. ГФ РБ. - Молодечно: Типография «Победа», 2008, т.2.: с. 346, 356, 375, 407, 416, 417, 419, 420. 4. ГФ РБ. -Молодечно: Типография «Победа», 2009, т.3, с. 701, 702, 706. 5. ГФ СССР, ХI изд., Вып. 2. М., 1990, ст. 8, 9, 11. 4. Муравьева Д.А. Фармакогнозия. М., 1991, с. 458 – 468. 6. Фармакогнозия / Под ред. проф. Шелюто В.Л., Витебск: ВГМУ, 2003, с. 266 - 273. 7. Химический анализ лекарственных растений. Под ред. Гринкевич Н.И., Сафронич Л.Н. М., 1983, с. 82 - 93. СОДЕРЖАНИЕ ЗАНЯТИЯ А. Проверка готовности к занятию (тестовый контроль). Б. Выполнение лабораторной работы. Задание 1. Провести качественные реакции обнаружения флавоноидов в ЛРС: цветки боярышника, пижмы, лабазника, бессмертника. Экстракция флавоноидов В колбу на 50 мл поместить 2, 0 измельченного до 1 мм сырья, залить 20 мл (цветки бессмертника залить 30 мл) 70 % этилового спирта. Настаивать 24 часа. Затем процедить через ватный тампон в коническую колбу на 30 мл. 1) Реакции окрашивания: · Цианидиновая проба (восстановление флавонолов, флавонов, флавaнонов до антоцианидинов). В пробирку поместить 1 мл извлечения, добавить 3-4 капли конц. HCl и 1 гранулу металлического цинка. Нагреть до кипения. Наблюдать красное или оранжевое окрашивание. · Реакция с раствором едкой щелочи. К 1 мл извлечения добавить 2-3 капли 5 % спиртового раствора NаОН. Наблюдать желтое окрашивание (флавоны, флавонолы, флаваноны). · Реакция комплексообразования с хлоридом алюминия. К 1 мл извлечения добавить 2-3 капли 2 % спиртового раствора хлорида алюминия. Наблюдать желтое окрашивание, флюоресцирующее в УФ-свете. 2) Реакция осаждения растворами ацетата свинца: К 1 мл извлечения добавить 3 капли раствора основного ацетата свинца. Наблюдать образование желто-оранжевого осадка. К 1 мл извлечения добавить 3 капли раствора среднего ацетата свинца. При наличии флавоноидов с орто-дигидроксигруппировками образуется осадок. Задание 2. Провести обнаружение флавоноидов в ЛРС методом хроматографии в тонком слое. Использовать извлечение флавоноидов, оставшееся от проведения качественных реакций. 1) На стартовую линию хроматографической пластинки " Силуфол" нанести капилляром извлечение и " свидетель" (рутин, кверцетин, гиперозид). Пластинку поместить в хроматографическую камеру с системой растворителей: ЭТАНОЛ: УКСУСНАЯ КИСЛОТА: ВОДА (20: 1: 1). 2) Хроматографирование вести 20 мин (пробег растворителя 13 см), затем хроматограмму высушить на воздухе под тягой. 3) Отметить окраску пятен в видимом и УФ-свете. 4) Обработать хроматограмму 2 % спиртовым раствором хлорида алюминия и высушить в сушильном шкафу при температуре 90-100о С. Наблюдать окраску пятен в видимом и УФ-свете. 5) Рассчитать для флавоноидов величины Rf и сравнить их со " свидетелями". Хроматограмму зарисовать и результаты занести в протокол. Задание 3. Провести количественное определение флавоноидов в ЛРС фотоэлектроколориметрическим методом. 1) Подготовка ЛРС: сырье измельчить, просеять через сито с диаметром отверстий 1 мм, взять точную навеску 0, 5 г и поместить в коническую колбу со шлифом на 100 мл. 2) Экстракция суммы флавоноидов: мерной пипеткой отмерить 50 мл 50 % этанола и внести в колбу с сырьем. Колбу закрыть пробкой, взвесить с точностью до 0, 01 г, затем экстракцию вести на кипящей водяной бане с обратным холодильником в течение 1 часа. Колбу с извлечением охладить, довести до первоначальной массы 50 % этанолом, перемешать. 3) Фильтрация: полученное извлечение профильтровать через бумажный фильтр, отбрасывая первые 20 капель, в пробирку. 4) Получение окрашенного комплекса флавоноидов и стабилизация окраски: отмерить 1 мл фильтрата, перенести в сухую пробирку и прилить 3 мл реактива А (состоящего из ацетатного буфера рН=3, 10 % р-ра ацетата натрия на 50 % этаноле, 2 % AlCl3 в 50 % этаноле (1: 1: 1)). Параллельно приготовить контрольный р-р, состоящий из 2 мл исследуемого извлечения и 6 мл реактива Б (состоящего из 2 мл ацетатного буфера рН=3 и 4 мл 50 % этанола). Оба раствора (исследуемый и контрольный) выдержать в темном месте в течение 10 минут. 5) Фотоэлектроколориметрирование. Измерить оптическую плотность исследуемого р-ра на фоне контрольного р-ра на ФЭК-М в кювете толщиной 5 мм при синем светофильтре № 4. Используя полученное значение оптической плотности, найти содержание суммы флавоноидов в 1 мл р-ра по калибровочному графику, построенному по стандартному раствору рутина. Рассчитать результаты по формуле:
С * U * 100 * К * 100 % = ------------------------, где m * U1 * (100 - W) m - навеска ЛРС в мкг (1, 0 = 106 мкг); С - концентрация флавоноидов (мкг/мл), найденная по калибровочному графику; U - объем экстрагента, взятого для экстракции флавоноидов (50мл); U1 - объем экстракта (1мл); W - влажность ЛРС; К - коэффициент разбавления раствора перед колориметрированием. ПРИМЕЧАНИЕ: При использовании кюветы на 10 мм: · для приготовления рабочего раствора берется 2 мл фильтрата и 6 мл реактива А; · для приготовления контроля - 4 мл фильтрата и 12 мл реактива Б. Работу оформить в виде протокола фитохимического анализа. На основании проведенного анализа дать заключение о качественном и количественном содержании флавоноидов в исследуемом образце. В. Итоговый контроль. Протокол занятия представить преподавателю на проверку и подпись. Ответить на предложенные вопросы по теме занятия. ЗАНЯТИЕ № 23 Флавоноиды. |
Последнее изменение этой страницы: 2017-03-14; Просмотров: 1199; Нарушение авторского права страницы