Тема занятия. Микробиология респираторных, нейротропных вирусных инфекций.

Стр 1 из 3Следующая ⇒

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ДЛЯ ПРЕПОДАВАТЕЛЕЙ

к практическому занятию № 21

на тему: «Микробиология респираторных, нейротропных вирусных инфекций»

по программе дисциплины «Микробиология, вирусология»

по специальности - 31.05.01. «Лечебное дело» (уровень специалитета)

курс 3, семестр 5

Составитель: Зайцева Е.А., д.м.н., профессор кафедры Рецензент: Шаркова В.А., д.м.н., профессор, заведующая кафедрой

Владивосток - 2016

Тема занятия. Микробиология респираторных, нейротропных вирусных инфекций.

2. Мотивация изучения темы. Число возбудителей респираторных вирусных инфекций велико: вирусы гриппы, парагриппа, риновирусы, реовирусы и т.д. Известно около 200 возбудителей ОРВИ. При этом появляются новые вирусы (SARS-ассоциированный коронавирус -SARS-Co), рециркулируют старые (вирус гриппа А с антигенами H1N1 появился в 1917 году, проциркулировал 10 лет, на 20 лет исчез, вновь появился в 1957 году и циркулирует до сих пор), отмечены тенденции к увеличению устойчивости вирусов (в 1997г. впервые обнаружилось, что вирус птичьего гриппа может напрямую передаваться от птиц человеку). Доказать что заболевание вызвано вирусом гриппа и др. можно только лабораторным методом. Даже в период эпидемии каждый 10-й диагноз грипп является ошибочным, в неэпидемический период число ошибок достигает 30-40%. Поэтому, знание этих инфекционных заболеваний, биологических особенностей, их возбудителей, принципов их диагностики, профилактики, лечения имеет большое значение для врачей всех специальностей.

Нейротропные вирусные инфекции подчас отличаются смертельными исходами и дают тяжёлые осложнения с инвалидизацией переболевших. Вновь регистрируется рост заболеваемости некоторых из них (полиомиелит). Наряду с такими давно известными инфекциями как бешенство, клещевой и японский энцефалит, полиомиелит, регистрируются заболевания, связанные с другими инфектами, поражающими НС, ранее относящиеся к медленным вирусным инфекциям - прионозам.

Цели занятия.

3.1. Общая цель: изучения темы направлено на формирование компетенций по ФГОС специальности (компетенции, которые формируются на данном занятии - (ОПК-9).

3.2. Конкретные цели и задачи. Познакомиться с морфологией, биологическими свойствами возбудителей респираторных и нейротропных вирусных инфекций, патогенезом, микробиологической диагностикой, иммунопрофилактикой инфекций – бешенства, энцефалитов, полиомиелита.

При этом задачами дисциплины являются:

- приобретение студентами знаний по классификации, морфологии и физиологии респираторных и нейротропных вирусов, в области их биологических и патогенных свойств, влияния на организм человека;

- обучение студентов навыкам пользования биологическим оборудованием; методам микробиологической диагностики респираторных и нейротропных инфекций; алгоритму постановки микробиологического диагноза изучаемых инфекций;

-на основе изучения учебного материала инициировать самообразовательную деятельность студентов: формировать умение сопоставлять факты, делать выводы, развивать личностные качества, научить стремиться использовать современные достижения науки.

I уровень - «иметь представление» - о морфологиии, биологических свойствах возбудителей респираторных и нейротропных вирусных инфекций, о патогенезе, микробиологической диагностике, иммунопрофилактике инфекций – бешенства, энцефалитов, полиомиелита, ОРВИ

II уровень «Знать» - морфологию и физиологию респираторных и нейротропных вирусов, вирусологический метод исследования, варианты взаимодействия вирусной частицы и клетки; способы забора материала; роль изменчивости вируса, обусловленной генетическим шифтом и антигенным дрейфом, знать условия, необходимые для качественного проведения вирусологических исследований, принципы и методы их выполнения, состав и назначение диагностических препаратов.

III уровень - «Уметь» - сопоставлять биологические свойства возбудителей вирусных инфекций с патогенетическими механизмами, анализировать их с учетом динамики развития, выбирая методы лабораторной диагностики, определяя характер и объем материала, подлежащего исследованию, сроки его взятия и сроки отбора проб, забирать его, оформить направление в лабораторию, ставить некоторые методы диагностики (РПГА, РТГА, РСК, РН, РИФ, ИФА), читать результаты лабораторных анализов (экспресс-методов, серологических исследований), оценивать результаты лабораторных исследований, уметь выбрать препараты для специфической диагностики, терапии и профилактики изучаемых инфекций,

IV уровень - «Владеть» - умением сопоставлять факты, делать выводы, развивать личностные качества. Стремиться использовать современные достижения науки, отечественных ученых. микроскопией материала исследования; инфицированием куриного эмбриона; работой с лабораторными приборами и оборудованием, интерпретацией результатов вирусологического исследования.

Ориентировочная основа действия (ООД) для проведения практического занятия (лабораторного, семинарского).

1. Проверить материалы по самоподготовке (письменные ответы на вопросы домашнего задания, лекции по теме занятия).

2.Сформулировать цель занятия.

3.Контроль исходного уровня знаний.

4. Выполнить самостоятельное решение ситуационных задач в соответствии с алгоритмом:

5. Составить и обсудить алгоритма вирусологического метода исследования (см. п.6).

Задания для контроля уровня сформированности компетенций в учебное время.

Эталон ответа на задачи:

Задача 1.

1. Диагностическая ценность наличия антител в сыворотке крови относительна, так как возможно проявление следовых реакций. Но, если в процессе исследования выявляется нарастание титра антител в парных сыворотках (то есть в динамике исследования) не менее, чем в 4 раза (а по условию задачи – в 8 раз), то это служит основанием для подтверждения диагноза гриппа.

2. Обследование на наличие специфических противогриппозных антител в сыворотке крови проводят для установления начала эпидемии заболевания гриппом и выявления серовара (сероваров) возбудителя.

Задача 2.

1.У больного для исследования взяли смыв с носоглотки. Обнаружение вируса в носоглоточном смыве является основанием для подтверждения диагноза.

2. Для идентификации вируса можно провести реакцию задержки цитопатического действия вируса со специфической иммунной сывороткой, РТГА, РИФ.

Задача 3.

1.Врач поступил правильно, решив изучить динамику титра антител к гриппозному диагностикуму, так как по нарастанию титра антител в РТГА можно судить о правильности постановки диагноза.

2.Диагноз гриппа подтвердился только у больного Б., так как в сыворотке крови больного на 12-й день наблюдался рост титра АТ в 4 раза.

3.Стабильное количество антител в сыворотке крови больного А. в разные сроки исследования объясняется анамнестической реакцией: возможно, он ранее переболел или был вакцинирован против гриппа.

7. Задания для самостоятельной подготовки к практическому занятию:

7.1. Перечень контрольных вопросов для самоконтроля знаний.

1. Классификацию возбудителей респираторных вирусных инфекций.

2. Морфология и состав вириона, назначение структурных элементов.

3. Антигенная структура, ее вариабельность. Антигенный дрейф, антигенный шифт. Формирование новых или с новыми свойствами вирусов.

4. Стратегия генома (взаимодействие вируса с клеткой).

5. Источники и пути инфицирования. Особенности эпидемий гриппа.

6. Патогенез поражений при респираторных вирусных инфекциях.

7. Основные клинические проявления. Особенности развития и течения в детском возрасте.

8. Особенности иммунитета.

9. Материал и методы лабораторной диагностики: микроскопический, вирусологический, серологический. Экспресс-методы.

10. Принципы специфической терапии респираторных вирусных инфекций, механизм действия препаратов для специфической терапии ОРВИ в организме.

11. Профилактика: неспецифическая, специфическая. Особенности вакцинопрофилактики при респираторных вирусных инфекциях (сроки вакцинации, виды вакцин). Живые вирусные вакцины, возможные осложнения при их применении. Показания и противопоказания к назначению.

12. Классификация нейротропных вирусных инфекций и их возбудителей.

13. Структурная и морфологическая характеристика возбудителей нейротропных вирусных инфекций. Способы выявления.

14. Антигенная структура и иммуногенность возбудителей.

15. Эпидемиология: источники, пути инфицирования, контингент повышенного риска.

16. Патогенез заболеваний, органотропность.

17. Основные клинические проявления.

18. Лабораторная диагностика: материал, методы, идентификация, индикация, оценка.

19. Иммунопрофилактика: средства и их эффективность.

20. Принципы лечения: бешенства, энцефалитов, полиомиелита. Значение специфических средств. Возможные осложнения и исходы.

21. Прионы и прионозы

7.2. Задания для СРС во внеучебное время

1. Составить схему классификация респираторных вирусов, отразив риновирусы, реовирусы, ортомиксовирусы, парамиксовирусы (парагриппа, респираторно-сентициальный, эпид. паротита, кори), везикулярного стоматита, коронавирусы, аденовирусы.

2. Зарисовать, обозначить структурные элементы вирионов вируса гриппа, аденовируса и др.

3. Составить схему вирусологического исследования при различных ОРВИ и нейротропных вирусных инфекциях.

4. Составить список иммунобиологических препаратов, вакцин, применяемых при респираторных и нейротропных вирусных инфекциях.

7.3. Задания для самоконтроля подготовки к практическому занятию (тесты, эталоны) .

1. Какова форма вириона вируса гриппа:

+а) икосаэдра

б) палочковидная

в) спиралевидная

г) пулевидная

2. Какие из перечисленных утверждений наилучшим образом характеризует антигенный дрейф возбудителей гриппа:

а) антигенные изменения вирусных гемагглютининов незначительны

+б) связан с незначительными антигенными изменениями протеинов вирусного капсида

в) основная причина пандемий

г) вызывает появление новых антигенных типов вирусов гриппа

3.Для профилактики вирусных инфекций используют все перечисленное, кроме:

а) марлевые четырёхслойные маски

б) своевременная вакцинация

в) облучение воздуха бактерицидными лампами

+г) антибиотики

4. Каким образом можно выявить наличие вируса в зараженной культуре клеток?

а) по цитопатическому эффекту (деструкция)

б) по способности цитоплазматической мембраны инфицированных клеток адсорбировать эритроциты

в) по рН и цвету культуральной среды (цветная проба)

+ г) по всем перечисленным критериям

5. Каким из перечисленных признаков должна отвечать культура клеток:

а) способность к быстрой пролиферации

б) являться низкодифференцированной

+в) все выше перечисленное

г) ни одно из указанного

6. Возбудителем SARS является:

а) вирус «куриного» гриппа

+б) коронавирус

в) аденовирус

г) респираторно-сентициальный вирус.

7. Какой фактор или условие обеспечивает контроль за распространением бешенства?

А) Иммунизация людей.

+Б) Иммунизация животных.

в) Уничтожение летучих мышей.

Г) Ни один из указанных

8. Для какого из перечисленных заболеваний характерно наличие в нервных клетках телец Бабеша-Негри?

+А) Бешенство.

Б) Инфекционные мононуклеоз.

В) Эпидемический паротит.

Г) Ветряная оспа.

9. Как происходит заражение вирусом бешенства?

А) Алиментарным путём.

Б) При половом контакте.

В) Водным путём.

+ Г) При укусе или ослюнении больным животным

10. Чем обусловлена сезонность энцефалитов?

а ) С временем активности человека.

б ) С благоприятными условиями.

в ) С активностью источников возбудителей энцефалитов.

+г ) С активностью переносчиков

8. Оснащение практического занятия:

8.1. Наглядные пособия:

а) таблицы:

1. Вирион возбудителя бешенства

2.Классификация культуры клеток

3. Куриный эмбрион (в разрезе)

б) схемы, стенды, витражи, альбомы:

1.Схема вириона гриппа в разрезе

2.Схема культивирования вируса

3. Витраж: цветная проба, РГА, РТГА

в) слайды (диапозитивы):

1.Вирион возбудителя клещевого энцефалита

2. Вирион возбудителя полиомиелита

3.Вирион аденовируса

4. Вирион возбудителя SARS

5. Результаты ЦПД : культура клеток интактная и после инфицирования (7 слайдов)

8.2. Технические средства обучения: мультимедийный проектор, нетбук, оверхет, овоскоп, микроскопы культура клеток с ЦПД, куриные эмбрионы, лабораторное оборудование

9.Учебно-материальное обеспечение:

9.1. Литература:

а) обязательная

1. Лекция

2. Методическая разработка

3. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. В 2-х томах / под ред. В.В. Зверева, М.Н. Бойченко.- М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010.- 448 с.: ил.

4. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: учебник для студентов мед.вузов / под ред. А.А. Воробьева. - 2-е изд.,исправ.и доп. - М. : Медицинское информационное агентство, 2006. - 704 с.

5. Руководство по организации и проведению практических занятий по медицинской микробиологии / под ред. О.В. Бухарина. Екатеринбург: УрО РАН, 2009. 399 с.

6. Руководство по медицинской вирусологии / Под ред. Д. К. Львова. — М., 2008.

7. Пособие к практическим занятиям по общей микробиологии, вирусологии и иммунологии для студентов медицинских вузов. Шаркова В.А. с соавт. Владивосток: ИПК МГУ им. адм. Г.И. Невельского, 2010. 144 с.

б) дополнительная

1. Атлас-руководство по микробиологии, иммунологии и вирусологии/ под ред. Академика РАМН, проф. А.А. Воробьева и проф. А.С. Быкова.- М.: МИА. – 2003, 2005. – 563с.

2. Поздеев Щ.К. Медицинская микробиология / Под ред. В.И. Покровского. М., 2008. С. 662.

3. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология/ Под ред. Л.В. Борисова, 2008.

4. Микробиология, вирусология иммунология/ под ред. В.Н. Царева.- М., 2009.

5. Шаркова В.А., Забелина Н.Р., Воропаева Н.М. с соавт. Учебно-методическое пособие к практическим занятиям по общей микробиологии, вирусологии и иммунологии для студентов медицинских вузов. Владивосток: Медицина ДВ, 2011. 179 с.

6. Букринская. Вирусология. - М., 1987. – 221с.

7.Лусс Л.В. Современные принципы терапии и профилактики гриппа// Росс. аллергол. журн., 2007. - №2. – С. 32-45.

8.Онищенко Г.Г., Нетесов С.В., Агафонов А.П. и др. Высокопатогенный птичий грипп: угроза новой пандемии и возможности ее противостоять// Вестн. РАМН, 2006. - №12. – С 36-41.

9.Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования (пол ред. Биргера М.О.). М., 1982. С. 303.

10. Медицинская микробиология. Под ред. Королюка А.М., Сбойчакова В.Б. СПб: ЭЛБИ-СПб, 2002. 266 с.

11. Социально-значимые инфекции: (в 2-х ч.) / В. В. Нечаев, А. К. Иванов, А. М. Пантелеев ; М-во здравоохранения и социал. развития РФ, С.-Петерб. гос. мед. акад. им. И.И. Мечникова. - СПб. : Береста, 2011. Ч. 1 : Моноинфекции: туберкулез, ВИЧ-инфекция и вирусные гепатиты. - 2011. - 439 с. : ил.

12. Львов Д. К., Дерябин П. Г., Щелканов М. Ю. и др. Грипп и другие новые и возвращающиеся инфекции Северной Евразии: глобальные последствия. Вестник

Российской военно_медицинской академии, приложение 2, часть 1, 2008, № 3 (23). С. 5.

9.2. Программное обеспечение и Интернет-ресурсы

базы данных, информационно-справочные и поисковые системы:

1.Реферативная база данных Медицина ВИНИТИ. http://www2.viniti.ru/

2. Электронные каталоги библиотеки. http://lib.vgmu.ru/catalog/

3. База данных компании EBSCO Publishing

Medline, Medline with Full Text, Health Source Nursing/Academic Edition, Health Source Consummer Edition, Green FILEhttp://web.ebscohost.com/

4. Электронная библиотека Российской национальной библиотеки: фонд авторефератов диссертаций. http://leb.nlr.ru/search/

5. ЭБС «Университетская библиотека on line». http://www.biblioclub.ru/

6. ЭБС «Консультант студента». http://www.studmedlib.ru/

7. КонсультантПлюс.http://www.consultant.ru/

8. Тихоокеанский медицинский журнал – электронная версия. http://lib.vgmu.ru/journal/?name=pmj

9. Сводный каталог периодики и аналитики по медицине MedArt. http://ucm.sibtechcenter.ru/

10. Электронный каталог «Российская медицина». Библиографическая база данных Центральной научной медицинской библиотеки. http://www.scsml.rssi.ru/

11. Электронные учебники CD и DVD диски

12. www.cardiosite.ru

15.http://consilium-medicum.com/media/consilium/07_01/4.shtml

16. Интернет-библиотека IQlib on-line доступ: http://www.iqlib.ru/

17. Электронные книги по медицине on-line доступ:

http://www.medbook.net.ru

http://www.medtext.ru/pafiledb/index.php

http://www.medliter.ru/

http://www.knigafund.ru/

Приложение 1

Источник выделения вируса

Клинический

Трупный

Инфекции верхних дыхательных путей: 1.1 - риновирус; 1.2 – парагриппозные вирусы; 1.3 – респираторно-синцитиальный вирус (РС-вирус); 1.4 - аденовирусы; 1.5 - реовирусы; 1.6 - энтеровирусы

Носоглоточные смывы; секрет из носа

II.

Инфекции нижнего отдела дыхательных путей: 2.1 - грипп; 2.2 - аденовирусы; 2.3 - парагриппозные вирусы; 2.4 - риновирусы; 2.5 - РСВ; 2.5 – вирусы коксаки

Носоглоточные смывы, мокрота Носоглоточные смывы, фекалии

Лёгкие

Приложение 2.

Исследований

1. Отделяемое из зева, носовых ходов целесообразно брать на 1-2-й день от начала заболевания:

- больному предлагают прополоскать рот водой, затем 8-10 мл слабощелочного раствора Хенкса. Полоскание ведут, запрокинув голову, затем осторожно сплёвывают смыв в стеклянную воронку, вставленную в стеклянную пробирку;

- у детей, ослабленных взрослых материал получают с помощью стерильного ватного тампона, который вводят по наружной поверхности языка, придавливая его шпателем и тщательно протирая им слизистые стенки зева;

- слизь из носовых ходов забирают тампоном с помощью носового зеркала-расширителя, которое вводят в область средней раковины;

- для получения секрета из полости носа в большом объёме в оба носовых хода глубоко вводят длинным узким пинцетом марлевую ленточку (тампоны). Через 15-20 минут её извлекают и помещают в шприц ёмкостью 5-10 мл, с помощью поршня отжимают адсорбированный субстрат в стерильную пробирку. 0,1-0,5 мл секрета помещают на лёд и быстро переправляют для анализа в лабораторию;

- материал транспортируют в охлаждённом состоянии (пробирки помещают в термостат или сосуд со льдом);

- тампоны со слизью из зева и носа от одного больного можно погружать в общую пробирку с 3 мл раствора Хенкса.

2. Мокроту для выделения вируса собирают утром, натощак. Накануне больному можно назначить отхаркивающее. Мокроту помещают в холодильник или в смесь сухого льда со спиртом на 2-3 часа. Затем отттаивают, верхний слой осторожно переносят пипеткой в стерильную пробирку и добавляют 500 ед. пенициллина и 250 ед. стрептомицина на 1 мл. Для инактивации сопутствующих бактерий, смесь выдерживают 3 часа при комнатной температуре и используют для вирусологических исследований.

3. Кровь – 3-5 мл берут из вены утром натощак, дефибринируют, добавляют 200 ед. пенициллина и 100 ед. стрептомицина на 1 мл. выдерживают до работы 15-20 минут при комнатной температуре:

- Можно использовать свернувшуюся кровь, которую предварительно растирают в ступке и разводят 1:2 физиологическим раствором, выдерживают в холодильнике 1 час, работают с надосадочной жидкостью$

- Иногда кровь берут из вены и немедленно разводят дистилированной водой 1:3

- От трупа кровь берут из сердца.

4. Кал при энтеровирусной, респираторной инфекциях помещают в пенициллиновые флакончики (заполняют на 1/3 его), закрывают резиновой пробкой, транспортируют в лабораторию при 16-20 ⁰С.

Приступая к анализу, во флакон добавляют 7-8 мл дистилированной воды, заворачивают в марлевую салфетку, смоченную 3% раствором хлорамина, встряхивают до получения гомогенной взвеси. Её центрифугируют 30 минут при 1500-3000 об/мин.

Надосадочную жидкость отбирают пипеткой, добавляют 1000 ед. пенициллина и5 00 ед. стрептомицина на 1 мл взвеси, выдерживают 40 минут при комнатной температуре и 12 часов при 16-20 ⁰С. После отстаивания суспензию повторно центрифугируют.

Приложение 3 .

Приложение 4.

Приложение 5

Приложение 6

Приложение 7

Приложение 8

Иммунологические методы диагностики:

Раннее применение иммунологической диагностики используют для идентификации выделенных от больного вирусов с помощью известных специфических противовирусных иммунных сывороток. По сути все эти реакции демонстрируют разные варианты биологической нейтрализации действия вирусов:

Соединив вирусосодержащий материал с иммунной сывороткой, помещают взвесь в термостат при температуре +4,+18,+37⁰С (в зависимости от вида вируса) на 1 час. Предполагаем, что антитела при этом взаимодействуют с вирионами и лишают их инфекционности;

Далее эту смесь можно ввести чувствительным животным и не наблюдать симптомов, присущих активности данного возбудителя, в связи с его нейтрализацией антителами;

Её можно ввести в культуру ткани и наблюдать феномен подавления ЦПД, цветной пробы, бляшкообразования. На том же основании эту смесь можно ввести в развивающиеся куриные эмбрионы (если изучаемый вирус способен развиваться в них) не причиняя им при этом вреда. На этом же основании поиск вирусного антигена в организме больного или вирусоносителя.

II. Методы поздней и ретроспективной диагностики – основан на поиске антител в сыворотках крови больных и переболевших. Они выполняются с помощью эталонных вирусных диагностикумов. При этом можно использовать разные реакции.

-РСК с парными сыворотками по общим правилам, с учётом нарастания их титра и интенсивности.

Реакцию иммунодиффузии (РИД) – взаимодействие (с предполагаемыми антителами) сыворотки крови больного и антигена (известного, приготовленного на биофабрике) наблюдают в полужидкой агарозной среде и оценивают по появлению линий преципитации.

Различные варианты реакций иммунобиологической нейтрализации (см. выше).

Иммуноферментный метод и многие другие.

Приложение 9.

Этапы патогенеза прионных инфекций:

На нормальных нейронах экспрессируется клеточный гомолог PrP, по своим свойствам мало отличающийся от инфекционной формы. Он содержит резистентную к протеазам сердцевину, гомологичную инфекционному прионозу (PrP^sc).

PrP^sc локализуется внутриклеточно, полимеризуясь в амилоидные полочковидные структуры. Внутриклеточная локализация прионов и резистентность его к действию протеаз обуславливает отсутствие у него иммуногенных свойств.

Проникновение инфекционного агента в клетку изменяет ход структуры PrP и приводит к развитию дегенеративных процессов в нейроне.

Клинически прионные инфекции протекают по типу спонгиоформных энцефалопатий с постепенным расстройством рефлексов с конечностей, гипотонией, нарушением глотания и деменцией. Процесс медленно прогрессирует и заканчивается гибелью пациента. Поэтому прионозы называются медленными инфекциями.

В группу возбудителей медленных (неконвенционных) инфекций включены агенты, способные вызвать развитие подострых, но прогрессирующих поражений ЦНС. Среди болезней человека наиболее изучены Куру, болезнь Крайтцефельда-Якоба, синдром Рерсимана-Страуселера-Шайкера, амнотрофический лейкоспондгиоз, спогиоформная энцефалопатия крупного рогатого скота. Особенность этих заболеваний – практически полное отсутствие значимых иммунных реакций. Гистологически в тканях мозга выявляют амилоидные скопления, генерализованную гипертрофию астроцитов и выраженную губчатую дегенерацию.