Заполнение счетной камеры

Рис. 2. Счетная камера: А - вид сверху. Б - вид сбоку. В - сетка Горяева. 1 - маленький квадрат, 2 - большой квадрат.

 

Счетная камера (рис.2) состоит из толстого прямоугольной формы стекла с двумя сетками Горяева, нанесенными на средние площадки камеры. Кнаружи от желобков, образующих букву «Н», находятся две прямоугольные пластинки, к которым прикладывается покровное стекло. Сетка Горяева состоит из 225 больших квадратов, 25 из которых разделены на 16 малых. Сторона малого квадрата составляет 1/20 мм, площадь - 1/400 мм², глубина камеры - 1/10 мм. Следовательно, объем камеры над малым квадратом равен 1/4000 мм³.

Незаполненную счетную камеру помещают под микроскоп и сначала под малым, а затем большим увеличением рассматривают сетку, находят большие и малые квадраты.

Затем счетную камеру и покровное стекло промывают водой, протирают марлевым тампоном, смоченным эфиром, спиртом и сухой полотняной салфеткой.

Придавливают покровное стекло к боковым поверхностям камеры (см. описание камеры).

Перед заполнением камеры выпускают на ватный тампон две-три капли содержимого из капилляра смесителя, затем заполняют камеру: наносят каплю разведенной крови на среднюю пластинку у края покровного стекла. В силу капиллярности жидкость равномерно распределится над сеткой.

После заполнения камеру оставляют на одну минуту для равномерного распределения и оседания эритроцитов.

Подсчет эритроцитов

Камеру кладут на предметный столик микроскопа, установленный горизонтально, и приступают к подсчету эритроцитов при малом увеличении микроскопа (объектив 8x, окуляр 10x или 15x). Поле зрения должно быть затемнено диафрагмой и несколько опущенным конденсатором. Подсчитывают эритроциты в 5 больших квадратах, разделенных на 16 малых (всего в 5 x 16 = 80 малых квадратах), расположенных по диагонали. Во избежание двукратного подсчета клеток, лежащих на границах квадратов, руководствуются правилом Егорова. Считают эритроциты, находящиеся внутри квадрата и на его верхней и левой границах.

Подсчитав, таким образом, сумму эритроцитов в 5 больших квадратах (т.е. в 80 малых), находят среднее арифметическое число эритроцитов в одном малом квадрате - Э/80. Зная, что объем пространства камеры над одним малым квадратом равен 1/4000 мм³, умножают найденное число на 4000. Получают число эритроцитов в 1 мкл разведенной крови. Умножив на кратность разведения (200), рассчитывают количество эритроцитов в 1 мкл цельной крови.

Таким образом, формула для вычисления количества эритроцитов следующая:

Х = (А ´ 4000 ´ 200) / 80,

где Х - искомое число эритроцитов в 1 мкл крови;

А - число эритроцитов в 80 малых квадратах;

1/4000 мм³ - объем разведенной крови над одним малым

квадратом;

80 - число малых квадратов;

200 - степень разведения.

Полученное число эритроцитов умножают на 10⁶ и получают содержание клеток в 1 литре крови.

Ошибка метода составляет ±2-3%.

Возможные источники ошибок при подсчете эритроцитов:

· Образование сгустка во время взятия и разведения крови.

· Несоблюдение условий, обеспечивающих должную высоту камеры (неправильный выбор покровного стекла и плохое его прижатие к камере).

· Проведение подсчета сразу после заполнения камеры, когда клетки еще не распределились равномерно и не осели.

· Попадание воздуха в капилляр с кровью.

 

Оформление протокола. Указать, чем разводится кровь для подсчета эритроцитов и почему. Написать формулу подсчета эритроцитов, провести ее анализ – описать значение всех цифр в формуле. Нарисовать фрагмент сетки Горяева, указать площадь малого квадрата и объем крови над ним. Начертить пять больших квадратов, указать подсчитанное количество эритроцитов в них. Записать нормальные значения количества эритроцитов у мужчин, женщин и новорожденных.

Вывод. Сравнить полученный результат с нормой.

 

 

Подсчет эритроцитов с использованием пробирочного

Метода разведения крови

Цель работы: ознакомиться с методом подсчета эритроцитов.

Объект исследования – кровь человека.

Для работы необходимо: Донорская кровь, химические или серологические пробирки с пробками, капиллярная пипетка от гемометра Сали, градуированная пипетка для отмеривания разводящей жидкости, камера с сеткой Горяева, 3% раствор хлористого натрия (желательно подкрасить красителем типа метиленового синего), микроскоп, вата.

Проведение работы. В чистую пробирку точно отмеривают 4 мл разводящей жидкости и закрывают ее резиновой пробкой. Кровь в количестве 20 мкл набирают до метки в капилляр от гемометра Сали. Осторожно выдувают кровь из капилляра в пробирку и тщательно перемешивают и промывают капилляр разводящей жидкостью; полученное разведение можно приравнять к 1:200. Капиллярную пипетку промывают несколько раз дистиллированной водой.

Заполнение камеры, подсчет эритроцитов, анализ результатов и оформление протокола осуществляют, как указано в работе 3.1.1. в пунктах 2 и 3. Источники ошибок и точность метода такие же, как и в работе 3.1.1.

⇐ Предыдущая12345678910Следующая ⇒

Поделиться: