Пластинчатая реакция агглютинации

Практические навыки, осваиваемые студентами на занятии:

1. Постановка и учет пластинчатой реакции агглютинации (РА) на стекле.

 

Пластинчатая (или ориентировочная) РА.

 

Пластинчатая РА выполняют перед постановкой развернутой реакции для того, что­бы получить предварительное представление о выделенном виде или сероваре бактерий, отобрать положительно реагирующие с ни­ми колонии (культуры) и исключить из дальнейших исследований неагглютинирующиеся.

Пластинчатую РА ставят при комнатной температуре на предметных стеклах.

Для этого пастеровской пипеткой наносят на стекла раздельно друг от друга капли сыворотки в не­больших разведениях (1:10 - 1:20) и две капли 0,5 % раствора нат­рия хлорида (контроль РА).

В каждую каплю (за исключением од­ной контрольной) вносят колонии, снятые с по­верхности плотной питательной среды, или петлю суточной жидкой культуры бактерий.

Внесенные микроорганизмы тщательно пере­вешивают в каплях жидкости до равномерного их помутне­ния.

Результаты реакции учитывают через 5-10 мин простым глазом или с помощью лупы (5х).

При положительной реакции в капле с сывороткой появляются крупные или мелкие хлопья, при отрицатель­ной - жидкость остается равномерно мутной.

Занятие № 14

ГУМОРАЛЬНЫЙ ИММУННЫЙ ОТВЕТ. ИММУНОГЛОБУЛИНЫ

Объемная реакция агглютинации

Практические навыки, осваиваемые студентами на занятии:

1. Постановка и учет объемной реакции агглютинации для определения титра антител.

Алгоритм постановки и учёта объемной (развернутой) реакции агглютинации для определения титра антител.

 

В агглютинационные пробирки предварительно разливают по 1 мл изотонического раствора натрия хлорида.

В пер­вую из них доливают 1 мл сыворотки, разведенной 1:100, и, смешав ее, 1 мл переносят во вторую, из второй - в третью пробирку и т.д.

Получив двукратные разведения сывороток ((двукратные – 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 1:512 1:1024), вносят в них по 1 - 2 капли антигена (1-2 млрд бактерий).

Контролями служат изотонический раствор натрия хлорида с анти­геном и исследуемая сыворотка без него.

Пробирки энергично встряхивают и помещают на 2 ч в термостат при температуре

37 °С, затем ведут предварительный учет, начиная с контрольных.

Отсут­ствие агглютинации в контрольных пробирках и наличие взвешенных хлопьев в двух-трех и более пробирках опыта свидетельствует о положительной реакции.

Окончательные результаты учитывают через 18 - 20 ч, выдерживая штатив с пробирками при комнатной температуре.

Интенсивность реакции выражается плю­сами: "++++" –  сыворотка прозрачная, с хлопьевидным осадком склеившихся бактерий на дне пробирки; "+++","++" и "+" –убывающие просветления с уменьшением бактериального осадка.

Заостряя внимание на образовании и характере осадка, следует указать, что атрихиальные бактерии и риккетсии, имеющие лишь соматические антигены, склеиваются через 18 - 20 ч с образованием мелкозернистых, трудно разбиваемых при встряхивании осадков; жгутиконосные бактерии агглютинируются спустя 2 - 4 ч в виде рыхлых, легко взбиваемых хлопьев.

 

 

Занятие № 15

АЛЛЕРГИЯ (ГИПЕРЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ)

Реакция преципитации

Практические навыки, осваиваемые студентами на занятии:

1. Постановка и учет реакции преципитации по Асколи.

 

Алгоритм проведения РП по Асколи

В узкую пробирку диаметром 0,5 см с неразведенной преципитирующей сывороткой в количестве 0,3 -0,5 мл, держа ее в наклонном положении, пастеровской пипеткой с тонко оттянутым капилляром медленно по стенке наслаивается такой же объем антигена.

Пробирку осторожно, чтобы не смешать жидкости, ставят вертикально.

При правильном наслоении преципитиногена на сыворотку возникает четкая граница между двумя слоями жидкости.

Реакцию учитывают в зависимости от вида антигена и антител через 5-10 мин, 1 - 2 ч или через 20 - 24 ч.

При положительной реак­ции в пробирке на границе между сывороткой и исследуемым эк­страктом появляется преципитат в виде кольца белого цвета.

Постановка реакции обязательно сопровождается контролями сыворотки и антигена.

 

Реакция преципитации в геле

РПГ ставится на гелевых пластинах или на чашках Петри (метод Оухтерлони).

В ка­честве геля для реакции используют 1 % хорошо отмытый про­зрачный агар.

Антигены и сыворотки вносятся в агаровый гель так, чтобы лунки, содержащие их, находились на определенном расстоянии.

Диффундируя навстречу друг другу и соединяясь друг с другом, антитела  и антигены образуют иммунологический комплекс в виде белой полосы.

При наличии сложного по составу преципитиногена его предварительно делят на составные компоненты в реакциях иммуноэлектрофореза.

Занятие № 16

ИММУНОПАТОЛОГИЯ И КЛИНИЧЕСКАЯ ИММУНОЛОГИЯ. ОСОБЕННОСТИ ТРАНСПЛАНТАЦИОННОГО И ПРОТИВООПУХОЛЕВОГО ИММУНИТЕТА

⇐ Предыдущая123456789Следующая ⇒

Поделиться: