Искусственное осеменение свежей спермой

Практикуется в случаях, если естественная вязка невозможна по ряду причин: кобель и сука живут довольно далеко друг от друга; заводчик намерен осеменить несколько сук или опасается прямого контакта суки с производителем в связи с распространенностью инфекционных заболеваний.

Искусственное осеменение замороженной спермой

Обычно предпринимают, если производитель находится далеко, а отправить свежую сперму не представляется возможным, либо в связи с запретом провозить через границу свежую сперму, либо в случае гибели производителя. В Европе и США существуют банки спермы в национальных собачьих клубах, в научных институтах и в некоторых частных компаниях.

Определение даты осеменения

При наличии свежей спермы процедуру осеменения проводят в день овуляции, а потом через 2 дня повторяют. При использовании замороженной спермы, которая характеризуется сниженной жизнеспособностью, поскольку процессы замораживания и размораживания оказывают негативное воздействие на акросомы и мембраны сперматозоидов, — осеменение осуществляют через 1–2 дня после овуляции, и вторую процедуру проводят через 24 часа после первой. Пробы прогестерона в сыворотке крови служат хорошим индикатором овуляции. Концентрация прогестерона, определяемая радиоиммунным методом, должна поддерживаться на уровне 30 нмоль/л (10 нг/мл) в первый день и между 55 и 75 нмоль/л (18–25 нг/мл) на второй день осеменения. Быстрый иммуноферментный метод (ELISA) определения также подходит для оценки качественного и количественного содержания прогестерона. У лисиц искусственное осеменение позволяет добиваться увеличения численности помета, и при правильном выборе даты оплодотворение наступает в результате одной процедуры.

Техника осеменения

Свежую сперму вводят во влагалище с помощью жесткого пластикового катетера, применяемого для осеменения коров, но укороченного до нужного размера. Катетер снабжен шприцем на 2–5 мл с резиновым поршнем (фиг. 9.6). Необходимо иметь в виду, что не всякий шприц можно использовать, поскольку некоторые типы резин оказывают токсическое воздействие на сперматозоиды.

Вводимый объем не должен превышать 3 мл для крупных пород и 2 мл для мелких, в противном случае сперма может вытекать из половых путей суки. Вульву приподнимают указательным пальцем и постепенно вводят во влагалище пластиковый катетер. После введения каудальный конец катетера приподнимают и ведут вдоль дорсальной стенки влагалища к своду влагалища для того, чтобы избежать попадания катетера в мочевой пузырь, поскольку отверстие уретры располагается на вентральной стенке влагалища. Второй рукой оператор пальпирует шейку матки через брюшную стенку, корректируя продвижение катетера. Сперму вводят медленно, после чего выдерживают самку в течение 10 минут в положении с приподнятым крупом. Поглаживание области вульвы вызывает сокращения матки, способствующие продвижению спермы.

Для осеменения свежей и замороженно-оттаяной спермой в лаборатории автора разработан специальный внутри маточный катетер (фиг. 9.6), состоящий из нейлоновой направляющей и металлического катетера с прикрепленным шприцем. Техника заключается во введении во влагалище направляющей трубки, с металлическим катетером внутри; после того, как трубка коснется свода влагалища, металлический катетер выдвигают вперед и вводят в шейку матки, придерживая ее большим и указательным пальцем через стенку брюшной полости (фиг. 9.7). Канал шейки прямой с незначительными складками и почти полностью раскрыт на стадии эструса, поэтому введение катетера обычнд не вызывает затруднений. Для выполнения процедуры животное поднимают на стол, седация обычно не требуется (фиг. 9.8). Выполнение манипуляции предполагает наличие определенных навыков, занимает у опытного оператора не более 1–2 минут и не причиняет животному дискомфорта. После выполнения внутриматочного осеменения приподнимать тазовую область суки необязательно.

Фиг. 9.6.

^{Три различных вида катетеров с нейлоновой направляющей трубкой, используемых для трансцервикального внутриматочного искусственного осеменения собак. Внизу — обычный пластиковый катетер для коров, укороченный до необходимой длины для интравагинального осеменения у собак}

Фиг. 9.7.

^{Искусственное осеменение собаки с помощью внутриматочного катетера. Поверх катетера надета пластиковая трубка, предотвращающая контаминацию влагалищной микрофлорой или травму слизистой влагалища металлическим катетером}

Фиг. 9.8.

^{Трансцервикалъное искусственное осеменение. Животное находится на столе. Седация обычно не требуется, процедура занимает менее 5 мин.}

 

Рекомендуемая доза при внутриматочном осеменении замороженно-оттаявшей спермой составляет 100 х 10⁶ сперматозоидов на одно осеменение, однако оплодотворение обеспечивается и меньшим количеством сперматозоидов — 35–40 х 10⁶ на одно осеменение при условии корректного выбора даты проведения процедуры и соблюдения технологии размораживания спермы. Доза 100 х 10⁶/мл основана на результатах экспериментов автора со спермой лисиц, в ходе которых важным параметром являлась численность помета. При осеменении в ходе лапаротомии можно ограничиться еще меньшим количеством спермы, однако, насколько известно автору, подобные эксперименты не проводились.

Несмотря на возможность интравагинального осеменения при использовании замороженно-оттаявшей спермы наилучшие результаты обеспечивает внутриматочное осеменение, позволяющее к тому же снизить дозу спермы.

Если катетеризация невозможна или оператор незнаком с техникой ее проведения, рекомендуется искусственное осеменение в ходе лапароскопии или с применением эндоскопа. В США и Канаде хирургические методы искусственного осеменения являются наиболее распространенными. Однако в большинстве европейских стран интравагинальное осеменение, а также техники с применением катетера и эндоскопа считают более этичными.

ЛИТЕРАТУРА

Andersen К. (1975) Insemination with frozen dog semen based on a new insemination technique. Zuchthygiene 10, 1.

Evans H. E. and deLahunta A. (1971) Miller's Guide to the Dissection of the Dog. Revised reprint. W. B. Saunders Company, Philadelphia.

Farstad W. (1984a) Bitch fertility after natural mating and after artificialinsemination with fresh or frozen semen. Journal of Small Animal Practice 25, 561–565.

Farstad W. (1984b) The correlation between a cyclus coefficient basedon cytological indices in the vaginal smear and circulating progesterone in oestrous bitches. Zuchthygiene 19, 211–217.

Farstad W. (1992) The optimum time for artificial insemination of blue fox vixens (Alopex lagopus) with frozenthawed semen from silver foxes (Vulpes vulpes). Theriogenology 38, 853–865.

Farstad W. (1996) Semen cryopreservation in dogs and foxes. Proceedings, XIII International Congress on Animal Reproduction and Artificial Insemination, Sydney. Animal Reproductive Science 42, 1–4, 251–260.

Farstad W. and Andersen Berg К. (1989) Factors influencing the success rate of artificial insemination in the dog. Journal of Reproduction and Fertility 39, 289–292.

Hofrno P. O. (1988) Studies on Cr/opreservation of Fox Spermatozoa and Evaluation of the Fertilizing Capacity of Frozen-tha/ved Silver Fox Spermatozoa. PhD thesis, Norwegian College of Veterinary Medicine, Oslo.

Kieffer J. P. (1992) Accouplement dans Tespece canine (mating in thecanine species) In: Les Indispensables l'Animal de Compagnie. Reproduction, ed. С. Dumon and A. Fontbonne, pp. 67–73. P. M. C. A. C, Paris.

Kumi-Diaka J. and Badtram G. (1994) Effect of storage on sperm membrane integrity and other functional characteristics of canine spermatozoa: In vitro bioassay for canine semen. Theriogeno/ogv 366. 41, 1355–1

Laing J. A., Brinley Morgan W. J. and Wagner W. C. (1988) Fertility and Infertility in Veterinary Practice, 4th edn, pp. 10–12. Balliere-Tindall, London.

Linde-Forsberg С. (1995) Artificial insemination with fresh, chilled extended and frozen-thawed semen in the dog. Seminars in Veterinary Medicine and Surgery (Small Animal) 1, 48–58.

Nothling J. O. and Valkman D. H. (1993) Effect of addition of autologous prostatic fluid on the fertility of frozen-thawed dog semen after intravaginal insemination. Journal of Reproduction and Fertility 47, 325–327.

Oettle E. (1986) Using a new acrosome stain to evaluate sperm morphology. Veterinary Medicine 3, 263–266.

Roberts S. J. (197 i)Veteri nary Obstetrics and Genital Diseases (Theriogenology), pp. 609, 620. Edwards Brothers Inc., Ann Arbor Michigan, and Ithaca, New York.

Rodriguez-Gil J. E., Montserrat A. and Rigau T. (1994) Effects of hypoosmotic incubation on acrosome and tail structure on caninespermatozoa. Theriogenology 42, 815–829

Rota A., Strom В. and Linde-Forsberg С. (1995) Effects of seminal plasma and three extenders on canine semen stored at 4º C. Theriogenology 44, 885–887.

Silva L. D. M., Onclin K., Snaps F. and Verstegen J. (1995) Laparoscopic intrauterine insemination in the bitch. Theriogenology 43, 615–623.

Wilson M. (1993) Non-surgical artificial insemination in bitches using frozen semen. Journal of Reproduction and Fertility 47, 307–311.

ГЛАВА 10 Вязка и искусственное осеменение у кошек Е. Акснер (Eva Axner)

ВВЕДЕНИЕ

Для племенного разведения отбирают животных, соответствующих породным стандартам, лишенных дефектов и отличающихся хорошим темпераментом. Кошки должны иметь в прошлом неосложненные роды и обладать выраженным материнским инстинктом. Целью племенного разведения является получение здоровых котят, а не нескольких выставочных экземпляров, выбранных из помета, имеющего врожденные дефекты или отклонения от породных стандартов. Инбридинг может в течение определенного периода времени способствовать рождению котят с превосходным экстерьером, однако в дальнейшем становится причиной врожденных дефектов, практиковать его не рекомендуется, особенно при разведении редких, малочисленных пород.

Для того, чтобы дифференцировать репродуктивные проблемы, обусловленные ошибками в содержании, от патологий репродуктивного тракта, необходимо понимать сущность физиологических процессов, обеспечивающих репродуктивное поведение и механизм овуляции. Инфекционные заболевания часто вызывают репродуктивные нарушения, поэтому от заводчика требуются серьезные усилия, направленные на предотвращение их распространения. Перед вязкой проводят обследование обоих партнеров, выявляя признаки заболеваний, а также вероятные дефекты, имеющие наследственный характер. Уничтожают внешних и внутренних паразитов. Рекомендуется проведение тестов на наличие вирусов лейкемии и иммунодефицита кошек. Племенные животные должны быть вакцинированы от герпесвирусной и калицивирусной инфекций и панлейкопении. Проведение андрологического и гинекологического обследования перед вязкой не практикуется, однако рекомендуется осматривать семенники и пенис самца. Если в анамнезе имеются указания на нарушения репродуктивной функции, обследование, включая анализ спермы, проводят с большей тщательностью.

ВЯЗКА

Поведенческий эструс

Поведенческий эструс у кошек объясняется повышением концентрации эстрадиола, вырабатываемого развивающимися фолликулами. Проэструс непродолжителен (1–2 дня) и не всегда явно выражен. Кошка кричит, трется о различные предметы и хозяев, проявляет беспокойство, однако не подпускает к себе самца. После начала эструса крики становятся монотонными и настойчивыми, кошка трется головой, катается по полу, принимает характерную позу: поднимает круп и припадает грудью к земле. На данной стадии часто наблюдаются прозрачные вагинальные выделения. Характерное поведение самки (позу лордоза, переступание задними лапами и отведение хвоста в сторону) можно спровоцировать, поглаживая круп или взяв животное за холку (фиг. 10.1). Как правило, у кошки наблюдается снижение аппетита и учащенное мочеиспускание. Однако у некоторых кошек поведенческий эструс выражен незначительно или отсутствует, несмотря на повышенную концентрацию эстрадиола и активность фолликулов, подтвержденные анализом крови или вагинальных выделений. Интенсивность поведенческого эструса связана с породой (у ориентальных пород эструс более выражен по сравнению с персидскими).

Фиг. 10.1.

^{Позу лордоза и переступание задними лапами можно спровоцировать, взяв кошку за холку и поглаживая основание хвоста или перинеальную область}

Фиг. 10.2.

^{Пост-коитальная реакция кошки включает катание по полу и вылизывание гениталий}

Поведение во время вязки

Кошка привлекает кота с помощью криков, запаха и характерного поведения. Перед садкой кот сжимает зубами холку кошки и переступает задними лапами, часто прикасаясь к перинеальной области кошки, побуждая ее принять характерную позу. Интромиссия продолжается всего несколько секунд (от 3 до 30), при этом сперма попадает во влагалище. По окончании вязки кошка издает характерный крик, повышающийся до пронзительного визга. Опытный кот поспешно ретируется на безопасное расстояние, поскольку кошка нападает на него, если он держится поблизости. Так называемый копуляционный крик и агрессия по отношению к коту являются частью пост-коитальной реакции кошки, к которой относятся катание по полу и вылизывание гениталий (фиг. 10.2). Часто кошка подпускает кота для следующей садки уже через 10 минут, хотя этот интервал может растянуться до часа. Отсутствие пост-коитальной реакции свидетельствует о том, что интромиссия не состоялась. Вероятно, такая реакция самки объясняется стимуляцией вагины остистыми выростами (шипиками) на пенисе кота.

Овуляция

Коитус стимулирует выработку гипоталамусом ГнРГ, вызывающего в свою очередь продукцию лютеинизирующего гормона ЛГ гипофизом. Овуляция происходит по достижении определенной концентрации Л Г. Репродуктивное поведение кошек характеризуется неоднократными коитусами, поскольку однократный коитус не обеспечивает достаточного выброса ЛГ и овуляции. Чаще всего необходимое повышение концентрации ЛГ наблюдается после четырех вязок.

Начало эструса может не совпадать со способностью вырабатывать ЛГ в ответ на коитус, поэтому вязка в первый или во второй день эструса не всегда вызывает овуляцию, что, вероятно, объясняется недостаточной зрелостью ооцитов. После повышения концентрации ЛГ до необходимого уровня одновременно овулируют все зрелые ооциты. Обычно это случается через 26–29 часов, считая от вязки, происходившей на фоне высокой концентрации ЛГ. Последние данные позволяют предположить, что спонтанная овуляция бывает гораздо чаще, чем принято считать (у 35 % кошек из 20 исследованных особей). Пробы прогестерона, взятые через неделю после вязки, позволяют установить, произошла ли овуляция. Концентрация прогестерона на базальном уровне указывает на отсутствие вязки, недостаточное количество интромиссий или вязку, состоявшуюся слишком рано или слишком поздно. Уровень прогестерона > 15 нмоль/л (> 5 нг/мл) подтверждает факт овуляции. Продолжительный интервал интерэструса также свидетельствует об овуляции, хотя не у всех кошек наблюдается регулярный цикл.

Организация вязки

Согласно общепринятой практике вязку проводят в привычном для кота окружении, поэтому, как правило, кошек доставляют к производителю. Если кот спокоен и опытен, а кошка излишне пуглива, можно поступить наоборот. Животным следует предоставить возможность привыкнуть друг к другу и освоиться в незнакомом месте; приглушенное освещение помогает создать ощущение безопасности. Если кошка неопытна, пуглива и не подпускает кота, ее можно поднести к нему, взяв за холку и поглаживая перинеальную область, тем самым стимулируя ее, принять характерную позу и побуждая самца совершить садку. Для обеспечения овуляции животных не следует разлучать до третьего дня эструса и совершения, по крайней мере четырех коитусов. Об их завершении судят по посткоитальной реакции самки. В пару неопытному коту выбирают опытную и спокойную кошку, тогда как для неопытной кошки предпочтительнее вязка с опытным котом. Однако в некоторых случаях взрослые самки могут отвергать молодого, неопытного самца. Вероятные проблемы, наблюдающиеся в ходе вязки, приведены в таблице 10.1.

Табл. 10.1. Проблемы, наблюдающиеся в ходе вязки, и их решение

Проблема: Неопытная кошка отвергает кота.

Действия: Необходимо предоставить животным возможность привыкнуть друг к другу.

 

Проблема: Кошка на стадии проэструса отвергает кота.

Действия: Необходимо перенести вязку на период эструса.

 

Проблема: Сниженное либидо у кота, связанное с отсутствием опыта (агрессия со стороны кошки).

Действия: Следует провести вязку с другой, более спокойной кошкой.

 

Проблема: Отсутствие влечения к определенному партнеру.

Действия: Необходимо сменить партнера.

 

Проблема: Сохранение уздечки полового члена, препятствующее интромиссии.

Действия: Провести хирургическую коррекцию дефекта.

 

Проблема: Шерсть в области пениса препятствует интромиссии.

Действия: Удалить шерсть.

 

Проблема: Проблемы с зубами, мешающие нормальной садке.

Действия: Провести осмотр животных перед вязкой.

 

Проблема: Сниженное либидо, вызванное клиническими заболеваниями и/или дегенерацией тестикулов.

Действия: Диагностировать заболевание и провести лечение.

 

Проблема: Врожденный дефект — сниженное либидо.

Действия: Исключить животное из племенного разведения, поскольку такие дефекты часто являются наследственными.

СБОР И АНАЛИЗ СПЕРМЫ

Сбор спермы

Сперму собирают с помощью искусственной вагины или электроэякуляции. Кроме двух названных методов практикуется лаваж влагалища после вязки или извлечение сперматозоидов из хвоста придатка после кастрации.

Искусственная вагина

Искусственную вагину изготавливают из резинового «пальца» от пипетки Пастера и небольшой пробирки (фиг. 10.3). Самцу позволяют сделать садку на течную самку и подносят искусственную вагину, направив в нее пенис самца (фиг. 10.4). К недостаткам данного метода можно отнести необходимость присутствия возбужденной самки, а также невозможность проведения манипуляции без предварительной подготовки самца, занимающей 2–3 недели. Процедура завершается успехом лишь в 2/3 случаев. Сбор спермы с помощью искусственной вагины эффективен при работе с лабораторными животными, но редко практикуется в клинических условиях.

Фиг. 10.3.

^{Искусственная вагина для сбора спермы состоит из резинового «пальца» и пробирки}

Фиг. 10.4.

^{Получение спермы с помощью искусственной вагины}

Электроэякуляция

Манипуляция не требует предварительной подготовки кота, однако проводится под общей анестезией для того, чтобы животное не испытывало неприятных ощущений. В прямую кишку вводят ректальный зонд (1 x 12 см), изготовленный из нетоксичного пластика и соединенный с электрическим стимулятором (фиг. 10.5). Зонд снабжен тремя электродами (1, 5 мм х 5 см), два из которых (наружные) соединяют между собой, а центральный имеет противоположную полярность. Для предотвращения попадания слизистой прямой кишки между зондом и электродами последние должны плотно прилегать к корпусу зонда. Лаборатория автора использует электроэякулятор, работающий на частоте 50 Гц, снабженный трансформатором, обеспечивающим продолжительные импульсы мощностью от 0 до 30 вольт. Прибор работает от источника напряжения 220 вольт. Сила тока и напряжение регулируются с помощью вольтметра и амперметра.

Фиг. 10.5.

^{Оборудование для электроэякуляции у котов. Электрический стимулятор и ректальный зонд с тремя электродами}

 

После проведения анестезии зонд смазывают и осторожно вводят в прямую кишку на 7–9 см, направляя электроды вентрально. Пенис обнажают легким нажатием на его основание и подносят к нему лабораторную пробирку. Серия из 80 импульсов мощностью от 2 до 5 вольт обеспечивает эякуляцию (табл. 10.2). Общая последовательность манипуляций включает три серии: 30 стимуляций (по 10 при 2, 3 и 4 вольтах), 30 стимуляций (по 10 при 3, 4 и 5 вольтах) и 20 стимуляций (по 10 при 4 и 5 вольтах). Между сериями делают паузы продолжительностью 2–3 минуты. Стимуляцию начинают, повышая напряжение в течение 1 секунды с 0 вольт до требуемого, после чего выдерживают 2–3 секунды при этом напряжении и резко снижают его до 0, снова выдерживая 2–3 секунды. Существуют иные методики, предусматривающие другие напряжения и длительность стимуляций. Каждый разряд сопровождается реакцией, выражающейся в вытягивании задних конечностей, что указывает на адекватность раздражения. Отсутствие реакции при напряжении 2 вольт и более свидетельствует о неправильном положении электродов или о наличии в прямой кишке каловых масс. В ходе эякуляции часть сперматозоидов попадает в мочевой пузырь, эта особенность эякуляторного процесса является нормой для домашних кошек, но может усиливаться в результате применения альфа-2 стимуляторов адренорецепторов (ксилазин и медетомидин) для седации.

Табл. 10.2. Методика проведения электроэякуляции

⇐ Предыдущая47484950515253545556Следующая ⇒

Поделиться: