|
Архитектура Аудит Военная наука Иностранные языки Медицина Металлургия Метрология Образование Политология Производство Психология Стандартизация Технологии |
|
|
Архитектура Аудит Военная наука Иностранные языки Медицина Металлургия Метрология Образование Политология Производство Психология Стандартизация Технологии |
Подтема 1.2: Заготовка производителей
Для более эффективного использования производителей при рыборазведении большое значение имеет знание внутривидовых биологических групп. Изучение стад отдельных видов рыб дало возможность акад. Л.С. Бергу установить у некоторых из них наличие внутривидовых биологических групп. Дальнейшая разработка этого вопроса принадлежит проф. Н.Л. Гербильскому. Учение о внутривидовых биологических группах основано на признании факта внутривидовой биологической разнокачественности. Заготовка для рыбоводных целей производителей осетра, относящихся к разным биологическим группам, осуществляется в различные сроки. Так, раннего ярового осетра заготовляют в дельте Волги во 2-й половине апреля – начале мая и используют для получения зрелых половых продуктов после краткосрочного резервирования в мае (Таблица 2). Таблица 2 Сроки заготовки производителей в реках
Заготовку озимого осетра осеннего хода осуществляют в октябре, а получают от него половые продукты после длительного выдерживания во 2-й половине апреля следующего года. При отборе производителей обращают внимание на их внешний вид: – - самки, близкие к овуляции, имеют тонкую тешку, у менее зрелых рыб она очень толстая и жирная; – - у зрелых рыб хвостовой стебель (от заднего края спинного плавника до начала хвостовой лопасти) имеет в поперечном разрезе овальную форму, т.е. его высота значительно больше ширины, что указывает на похудание рыбы. У менее зрелых рыб хвостовой стебель толще и менее высок; – - у зрелых особей рыло заострено в результате похудания, у менее зрелых рыб рыло и вся голова более толстые; – - жучки у зрелых рыб менее острые, кожа больше покрыта густой слизью.
Для того чтобы ориентироваться на эти признаки, надо иметь большой опыт работы с производителями. А.Е. Андронов (1979) разработал способ отбора самок севрюги, основанный на измерении икринок. Среди самок севрюги, мигрирующих в реку, содержится много недостаточно зрелых рыб, в гонадах которых много недоброкачественной мелкой икры, поэтому нужно отбирать самок с наиболее крупной икрой. Икринки измеряют с помощью щупа, имеющего шкалу с ценой деления 2 мм и отметкой нуля на расстоянии 31 мм от начала прорези с диаметром 3 мм. У самок, отбираемых для рыбоводных целей, 15 икринок должны составлять ряд, оканчивающийся не менее чем на втором делении по шкале щупа. Второй вариант отбора самок севрюги состоит в выяснении степени поляризации (крайнего положения) ядра. Вынутую щупом икру помещают в жидкость Серра (6 частей формалина, 3 части спирта, 1 часть ледяной уксусной кислоты), промывают водой и разрезают безопасной бритвой по анимально-вегетативной оси. Положение ядра в икринках оценивается под лупой 7´ 10n пo расстоянию от ядра до оболочки анимального полюса. Хорошими считаются самки севрюги, у которых ядро отошло от своего первоначального положения на расстояние, не превышающее радиуса икринки. Научный сотрудник Азовского научно-исследовательского института рыбного хозяйства Л.В. Баденко разработала метод отбора производителей по физиологическим показателям, позволяющий более объективно судить о ценности производителей для рыбоводных целей. В основе метода лежит тот факт, что осетровые в период нерестовых миграций входят в реки в различном физиологическом состоянии. Это объясняется как неодинаковой зрелостью половых продуктов, так и разным уровнем накопления у них в организме запасных веществ. Так, по данным Л.Ф. Голованенко, истощенные производители, не пригодные для получения икры и спермы, а также особи, имеющие половые продукты в IV незавершенной стадии зрелости, нуждаются в резервировании, а рыбы в IV завершенной стадии могут быть инъецированы сразу после заготовки на местах добычи. Совершенно ясно, насколько важно осуществить оценку производителей, отбираемых для рыборазведения. Это легче всего сделать путем исследования крови. Оказалось, что наиболее четкий ответ на вопрос о качестве производителей могут дать такие показатели, как содержание гемоглобина и состав белка сыворотки крови. По ним Л.В. Баденко и рекомендует отбирать производителей (Таблица 3). Таблица 3 Качество производителей по содержанию гемоглобина и составу белка сыворотки крови
Как видно, в начале нерестового хода самки имеют уровень содержания жира и белка, у них высокие показатели обмена веществ и дыхания, поэтому таких рыб надо заготавливать в первую очередь. Обычно они имеют показатели содержания жира, белка, обмена веществ и дыхания, характерные для рыб, полностью отдающих зрелую икру. Заготовку производят из неводных уловов, отбирая производителей оптимальной для работы массы (не более 15–20 кг для осетра и севрюги и 100 кг для белуги), не имеющих травм, кровоподтеков и т. п. При определении массы рыбы взвешивать отобранных производителей на десятичных весах на приемном пункте запрещается, так как взвешивание без воды отрицательно влияет на состояние рыбы. Массу следует определять по специальной таблице, в которой приведены данные по соотношению длины тела и массы (Таблица 4). Таблица 4 Соотношение длины тела и массы рыб-производителей
Большое значение имеет и возрастной подбор производителей. По данным А.А. Поповой, лучшее потомство дают осетры, пришедшие на нерест во второй и третий раз. Производителей заготавливают с таким расчетом, чтобы иметь резерв на случай отходов в период транспортировки и выдерживания: у белуги и севрюги от 20 до 30 % и у осетра от 10 до 30 % от общего количества заготовленных производителей. Производители отбираются непосредственно из притоняемого невода. Их по одному осторожно помещают в брезентовые носилки и переносят в небольшое живорыбное судно (матенку), в которое можно собирать не более 10 особей. Матенку доставляют к большому живорыбному судну, в котором производителей доставляют на осетровый рыбоводный завод. В несамоходную живорыбную прорезь астраханского типа сажают 5 белуг или 10 осетров, столько же шипов или 16 севрюг. Длина прорези астраханского типа 13 м, ширина 5 м и глубина 0, 8 м, норма загрузки: один осетр на 1, 5–2 м3, одна севрюга на 1 м3 и одна белуга на 5–7 м3. Для предотвращения травмирования рыб шпангоуты прорези обшивают строганными досками. Доставленных на рыбоводный завод производителей поднимают на причал с помощью специального крана грузоподъемностью 500 кг (Рис. 19).
Рис. 19 Выгрузка производителей из прорези (на рисунке брезентовая люлька обозначена условно, в виде сетчатой)
Рыбу транспортируют в наполненной водой брезентовой люльке, подвешенной к металлическому трубчатому каркасу. Ее сверху закрывают брезентовым фартуком. Поднятую на причал люльку сразу же устанавливают на трубчатую подставку в кузове автомашины или самоходного шасси и транспортируют к пруду. Люльку также можно передвигать монорельсовым электротранспортом. Затем по наклонной плоскости люльку вместе с рыбой спускают в водоем. Рыбу можно транспортировать и выгружать также при помощи монорельсового пути и грузовой тали. При таком способе транспортировки люльку с производителями снимают с шасси талью, перемещают над прудом и затем опускают. Монорельсовые пути с электротельфером используют также для внутризаводских перевозок производителей. Из прудов производителей отлавливают волокушей (отцеживающее орудие лова), оснащенной плавом и грузиками. Плав представляет собой поплавки из пенопласта, посаженные по верхней подборе. К нижней подборе прикрепляют грузила из обожженной глины. К концам крыльев привязывают деревянные бруски – клячи. Длина волокуши на 40–50 % больше ширины пруда, а высота на 30–40 % превосходит наибольшую глубину водоема. Рыбу обычно отлавливают за одну продольную тоню. Тянут невод за урезы по обоим берегам водоема. Притонение производят на мелководном участке в головной части пруда. Место притонения укрепляется с помощью каменисто-галечной отсыпки. К этому участку подводят тельферный подвесной путь для механизации подъема производителей. Отловленных производителей укладывают в люльку или на носилки (Рис. 20) и подносят к тельферу, который доставляет рыбу к садкам, где производителей инъецируют.
Рис. 20 Носилки для транспортировки производителей осетровых
После использования волокуши развешивают для просушки на вешалах.
Заготовка гипофизов
Гипофизы лучше всего заготавливать весной, в период хода производителей. В это время половые продукты рыб находятся в IV завершенной стадии, и в гипофизах накапливается максимальное количество гормонов. Заготавливать гипофизы от отнерестившихся рыб нельзя, поскольку ранее содержавшиеся в них гормоны в период размножения полностью расходуются. Нельзя использовать для заготовки и гипофизы от неполовозрелых рыб. Вместе с тем Т.И. Фалеева отмечает, что гипофизы можно заготавливать осенью и зимой. Для извлечения гипофиза вскрывают череп живой или свежей рыбы трепаном, сделанным из стали и представляющим собой металлический стержень, снабженный рукояткой. На нижний конец стержня насажен цилиндр, который можно передвигать по вертикали вдоль стержня и закреплять при помощи винта. У основания цилиндра имеются наточенные и разведенные зубцы, врезающиеся в ткань при вращении трепана. Его диаметр равен 30 мм. Для получения гипофиза от белуги применяют трепаны больших размеров диаметром 35–40 мм.
Рис. 21 Место взятия гипофиза (окружено жирной пунктирной линией позади глаз) у осетра (по Т. И. Фалеевой).
После этого вращают рукоятку и, сделав несколько оборотов, приподнимают стержень во избежание разрушения гипофиза. Затем трепан ввинчивают до отказа и вырезанную пробку, состоящую из кости и хряща, удаляют. В черепной крышке образуется отверстие, которое при правильной установке трепана, находится над гипофизарной ямкой. Для получения гипофизов используют также электротрепан, представляющий собой электрическую дрель, что намного облегчает и ускоряет заготовку гипофизов. Из полости черепа удаляют мозг и жидкость. Подготовительные операции на этом заканчиваются и можно приступать к извлечению гипофиза. Гипофиз извлекают применяемой в хирургии ложкой Фолькмана, имеющей острые края и длинную ручку. Ни в коем случае нельзя брать пинцетом ткань железы, так как можно разрушить гипофиз и сделать его непригодным для инъецирования. С помощью ложки Фолькмана гипофиз легко можно вынуть и перенести в сосуд. Извлеченный гипофиз обезжиривают и обезвоживают, для чего в сосуд с хорошо закрывающейся крышкой (бюкс) наливают ацетон. После извлечения каждого гипофиза заготовитель помещает его в ацетон. После того как все гипофизы извлечены, их помещают в новую порцию ацетона на 12 ч, затем его еще раз сливают и наливают новую порцию, в которой через 6–8 ч происходит обезжиривание. Извлеченные из бюкса гипофизы просушивают на фильтровальной бумаге. Для обработки гипофизов можно применять только безводный, химически чистый ацетон. Объем ацетона должен в 10– 15 раз превышать массу заложенных в него гипофизов. Повторное использование насыщенного водой ацетона недопустимо. Для длительного хранения высушенные гипофизы помещают в полиэтиленовые мешочки и этикетируют. Желательно в отдельные мешочки подбирать гипофизы одной массы с тем, чтобы в полевых условиях на рыбоводном пункте можно было точно рассчитать применяемые дозировки. Заготовку гипофизов следует производить централизованно сразу для нескольких заводов с определением гонадотропной активности выпускаемого препарата с помощью тест-объектов. Централизованная заготовка опытными специалистами позволяет обеспечить высокое качество гипофизов и возможность применения оптимальных доз.
Определение качества гипофизов
Для определения количества гормонов, находящихся в гипофизах, и качества получаемых препаратов осуществляют биологическое тестирование, которое сводится к выяснению различных реакций органов животных, получивших инъекцию исследуемых препаратов. Обычно для биологического тестирования используют вьюна и лягушек. Вьюн после введения гипофиза всегда дает количественно определяемую четкую реакцию. Определение единицы активности гипофиза рыб производят с помощью установленного Б.Н. Казанским понятия вьюновой единицы (в.е.). Вьюновая единица – это такое количество гонадотропного гормона, которое необходимо, чтобы вызвать через 50–80 ч после инъекции созревание икры и овуляцию у зимних самок вьюна IV стадии зрелости массой 35–45 г при температуре воды 16– 18° С в лабораторных условиях. В целях выяснения активности исследуемого препарата гипофиза во вьюновых единицах нескольким группам самок одновременно производят гипофизарные инъекции с различными дозами гипофиза. Наименьшая доза, вызвавшая созревание, и соответствует вьюновой единице. Зная ее, можно сравнивать содержание гонадотропного гормона в различных гипофизах. Использование вьюнов в качестве тест-объектов затрудняется в связи с ограниченностью их распространения в естественных водоемах. Более доступным объектом являются лягушки. Их легко можно получать в необходимых количествах в любое время года. Положительной реакцией у лягушек служит появление подвижных сперматозоидов в клоаке после введения суспензии гипофиза в спинные лимфатические мешки. Эта реакция наступает очень быстро – через 40–50 мин. В этом состоит второе преимущество работы с лягушками по сравнению с вьюнами. Лягушек-самцов заготавливают поздней осенью в местах их концентрации для зимовки. Содержат их в воде при температуре 1, 5°С, слабой проточности и небольшой освещенности. Тестирование препарата следует осуществлять ежегодно в одни и те же сроки. Так, в дельте Волги это делают в первой половине марта. Лягушек выводят из зимнего состояния, медленно повышая температуру воды и доводя ее через неделю до 16–18°С. Тестирование дает лучшие результаты при температуре 18–23°С. Проверку производят следующим образом. Вначале отбирают партии по 8–10 гипофизов, отличающихся цветом и величиной. Затем их взвешивают на аналитических весах с точностью до 0, 1 мг. Взвешенный препарат растирают в ступке, постепенно увлажняя до получения однородной сметаноподобной консистенции. Затем в препарат добавляют физиологический раствор, и суспензия готова для инъецирования. Инъекцию производят одновременно 5 лягушкам. Всего испытывают 3 группы лягушек. Каждую группу инъецируют определенной дозой: 0, 2; 0, 3 и 0, 4 мг сухого препарата гипофиза. Показателем биологической активности испытуемого препарата гипофиза является минимальная весовая доза, вызывающая реакцию спермации более чем у половины проинъецированных лягушек. Биологическую активность препарата рассчитывают путем деления единицы на весовой показатель минимальной эффективной дозы. Одна лягушечья единица (л.е.) – это активность минимальной весовой дозы препарата, вызывающая спермации у самца лягушки. Ацетонированный препарат гипофиза должен иметь стандартную, заранее известную активность, которая равна 3, 3 лягушачьих единицы. Использование препарата позволит расходовать заготовленные гипофизы более экономно. Кроме того, в тех случаях, когда после проведения гипофизарной инъекции созревание производителей не наблюдается, облегчается анализ причин этого явления. Следует также иметь в виду, что дозу вводимого препарата на единицу массы производителей нужно рассчитывать с учетом биологической активности каждой данной партии гипофизов. Кроме вышеизложенной методики определения активности ацетонированных гипофизов существует несколько других методов такой проверки. В частности, Б.Ф. Гончаров предложил для определения качества гипофизов использовать систему созревания икринок вне организма. Проверка осуществляется следующим образом. Щупом берется проба икры и помещается в физиологический раствор с 0, 1%-ным раствором кристаллического альбумина. Туда же добавляется суспензия гипофиза. Если самка подготовлена к созреванию, то зародышевый пузырек растворяется. Преимущества предлагаемого метода состоят в том, что он является чувствительным, дает возможность получать большой цифровой материал и его можно использовать непосредственно на рыбоводных заводах в сезон проведения работ с производителями. При этом методе доза вводимого гипофиза рассчитывается в миллиграммах ацетонированного гипофиза на 1 кг массы производителя или в миллиграммах на одного самца или одну самку. Правильная дозировка во многом предопределяет качество получаемых половых продуктов. Если доза окажется недостаточной, созревание производителей не произойдет. При увеличенной дозе гормонального препарата снижается качество икры или спермы. При более низких температурах (в пределах диапазона нерестовых температур) для созревания производителей необходимы более высокие дозы препарата, при температурах, близких к верхней границе нерестовых температур, количество гормонального препарата снижается. Для созревания самцов по сравнению с самками нужно вводить меньше гормонального препарата. Осетровые рыбоводные заводы получают ацетонированные гипофизы с заранее определенной гонадотропной активностью. Однако она не всегда остается постоянной. При хранении гипофизов более года их гонадотропная активность снижается. Процесс ухудшения качества гипофизов замедляется при их хранении в герметически закрытой посуде в сухом помещении при низкой температуре.
Гипофизарная инъекция
Высушенный гипофиз в чистой стеклянной или фарфоровой ступке растирают пестиком в порошок, затем взвешивают необходимую дозу на аналитических или торзионных весах для каждой партии инъецируемых производителей раздельно для самок и самцов. Взвешенную дозу вносят в физиологический раствор (6, 5 г химически чистой поваренной соли, растворенной в 1 л дистиллированной воды) и еще немного растирают. Затем к этой массе добавляют еще одну порцию физиологического раствора в таком количестве, чтобы на одного производителя приходилось 2 см3 суспензии. Затем ее несколько раз тщательно взбалтывают с помощью шприца и переносят в склянку с широким горлышком и притертой пробкой. Перед началом инъецирования содержимое склянки еще несколько раз тщательно перемешивают. Суспензию шприцем вводят в мышцы спины. После инъекции иглу осторожно вынимают. Место прокола кожи прижимают пальцем, а затем немного массируют. Это нужно делать во избежание вытекания введенного препарата. Необходимое количество ацетонированного порошка гипофиза, взятого от осетровых, которое следует впрыскивать одной особи при нерестовой температуре, определяется согласно данным, приведенным ниже (Таблица 5). Таблица 5 Необходимое количество гипофиза для инъекции
При температуре воды ниже нерестовой на 2–3°С дозу гипофиза увеличивают на 30 – 50%. Гипофизарные инъекции дают положительные результаты лишь при завершении у производителей IV стадии зрелости половых продуктов. Показателем такого состояния яйцеклеток служит смещение имеющихся у них ядер к каналу (микропиле), через который сперматозоид проникает в икринку. Четвертая стадия у самцов характеризуется завершенностью процесса образования спермиев. У таких самцов преобладают зрелые, вполне сформированные сперматозоиды. Хорошие результаты дают однократные инъекции ацетонированного препарата. Вместе с тем иногда они оказываются недостаточно результативными. Такое положение наблюдается, когда общее состояние производителей ухудшено или развитие икры полностью не завершено. При такой ситуации иногда целесообразно производить повторные инъекции небольших доз препарата. Однако всегда надо помнить, что увеличенные, по сравнению с научно обоснованными, дозы препарата гипофиза приводят к снижению качества получаемых зрелых половых клеток. Объясняется это тем, что в порошке ацетонированного гипофиза содержатся и такие гормоны, которые не нужны непосредственно для созревания половых клеток. В результате создаются побочные эффекты, организм приходит в состояние большого напряжения (стресса). Успешное проведение гипофизарных инъекций во многом зависит от того, как содержатся производители. На всех этапах этой операции – перед, во время и после введения в тело рыбы препарата гипофиза – с самками и самцами следует обращаться очень бережно, не допускать их травмирования. В водоемах, предназначенных для производителей, должен быть хороший кислородный режим, самок и самцов следует содержать раздельно. Перед инъецированием их переводят в небольшие бетонированные бассейны или садки, в которых создают оптимальные условия для того, чтобы гарантировать созревание половых продуктов после введения в тело гормонального препарата.
Контрольные вопросы:
1. Как устроен гипофиз? 2. Когда и как заготавливают гипофизы? 3. Как определяют качество гипофизов? 4. Как осуществляется гипофизарная инъекция? 5. Как заготавливают производителей? 6. В какой последовательности работают с производителями при получении половых продуктов?
|
Последнее изменение этой страницы: 2017-04-13; Просмотров: 331; Нарушение авторского права страницы
Трепан устанавливают посередине головы рыбы, позади глаз (Рис. 21). Для точной установки трепана цилиндр поднимают вверх до отказа, вследствие чего нижний заостренный конец стержня выдвигается за край цилиндра.