Архитектура Аудит Военная наука Иностранные языки Медицина Металлургия Метрология Образование Политология Производство Психология Стандартизация Технологии |
Критерии современной классификации вирусов.
1.Нуклеиновая кислота: тип, число нитей, процентное содержание, молекулярный вес, содержание гуанина и цитозина. 2.Морфология: тип симметрии или псевдосимметрия, число капсомеров для вирусов с кубической симметрией, наличие внешней липопротеидной оболочки, форма, размеры вирионов. 3.Биофизические свойства: константа седиментации, плавучая плотность. 4.Белки: количество структурных белков и их локализация, аминокислотный состав. 5.Липиды 6.Размножение в тканевых культурах: особенности репликации. 7.Круг поражаемых хозяев: особенности патогенеза инфекционного процесса; онкогенные свойства. 8.Устойчивость к физическим и химическим факторам (гамма-лучи, термоинактивация при 370и 560, действие жирорастворителей и отдельных катионов). 9.Антигенные свойства.
4. Типы вирусных геномов РНК-геномы 1.Одноцепочечная единая РНК, обладающая матричной активностью (позитивная РНК) - вирус полиомиелита и др. 2.Одноцепочечная единая РНК, не обладащая матричной активностью (негативная РНК). Вирион имеет транскриптазу - парамиксовирусы, рабдовирусы и др. 3.Одноцепочечная фрагментированная РНК, не обладающая матричной активностью (негативная РНК). Вирион имеет транскриптазу - ортомиксовирусы. 4.Двухцепочечная фрагментированная РНК. Вирион имеет транскриитазу - реовирусы. 5.Вирусы, геном которых представлен двумя идентичными нитями позитивной РНК (диплоидный геном). Вирионы имеют обратную транскриптазу- ретровирусы. ДНК-геномы 6.Одноцепочечная линейная ДНК - парвовирусы. 7.Одноцепочечная кольцевая ДНК - фаги М13, Ø X174. 8.Двухцепочечная линейная ДНК - вирус герпеса и др. 9.Двухцепочечная кольцевая ДНК - паповавирусы, вирус гепатита В и др. 10.Двухцепочечная ДНК с ковалентносвязанным терминальным гидрофобным белком - аденовирусы. 11.Двухцепочечная ДНК, замкнутая на каждом конце ковалентной связью - вирус оспы.
5. Методы культивирования вирусов. Вирусы размножаются только в живых клетках. Культивирование вируса происходит на уровне орг-ма подопытного животного и на уровне культуры клеток (то есть вне орг-ма). Вирусы имеют тканевую и типовую специфичность. Поэтому при выделении неизвестного вируса одномоментно заражают 3-4 культуры клеток. Чаще используют эмбриональные ткани (куриный эмбрион). Вирусы оспы хорошо размножаются в хорион-аллантоисной оболочке, вирус паротита – в амнионе, вирус гриппа – в амнионе и аллантоисе, вирус бешенства – в желточном мешке. Берут 12-дневные эмбрионы. При невозможности выделить и идентифицировать вирус стандартными методами (на культуре клеток и куриных эмбрионах) инфекционный материал вводят лабораторным животным (мыши, кролики, обезьяны), после развития инфекционного процесса проводят повторное заражение чувствительных клеточных культур.
Заражение лабораторных животных. Методы заражения животных разнообразны: внутрибрюшинный, внутривенный, внутримышечный, интраназальный, заражение в мозг и другие. Заражение в мозг. (Метод применяют при работе с нейротропными вирусами). Для заражения чаще используют белых мышей. Левой рукой плотно прижимают мышь к столу, большим и указательным пальцами оттягивают кожу головы назад. Туберкулиновым шприцем с предохранительной муфтой на игле прокалывают лобную кость несколько латеральнее средней линии и вводят 0, 02-0, 03 мл материала. Игла вводится на глубину 1, 5-2 мм, при этом отчетливо ощущается " провал" в полость черепа. При заражении новорожденных мышей (2-3-дневного возраста) их лучше брать руками в перчатках, чтобы после заражения мышата не имели постороннего запаха (пота, дезинфицирующих веществ, антибиотиков и т.д.), так как самка съедает мышат, имеющих посторонний запах. Материал вводят в количестве 0, 01 мл. Вытекающую жидкость удаляют сухим стерильным ватным тампоном без дезинфицирующих веществ. После заражения мышат помещают в отдельную банку (в свое гнездо), а через 20-30 минут подсаживают к ним самку. Больных мышат самка также съедает. Поэтому надо уловить момент извлечения зараженных животных для завершения опыта. Первые два дня просматривают мышат 1-2 раза в день, а затем чаще. Через 3-4 дня здоровый мышонок в два раза больше зараженного.
Заражение куриных эмбрионов. Существует несколько методов заражения куриных эмбрионов; на хорионаллантоиснух) оболочку, в аллантоисную полость, амниотическую полость, в желточный мешок. Для заражения используют эмбрионы 5-11 дневного возраста. Перед заражением эмбрионы просматривают в темной комнате при помощи овоскопа для проверки их жизнеспособности (живые эмбрионы подвижны с хорошо развитыми сосудами) и опревоздушной камеры и места расположения эмбриона. Место на столе, где производят манипуляции покрывают салфеткой, смоченной в растворе хлорамина. Заражение на хорионаллантоисную оболочку. Яйцо устанавливают в штативе в вертикальном положении тупым концом вверх. Скорлупу над воздушной камерой обрабатывают спиртом, йодом, повторно спиртом, обжигают, прокалывают ножницами небольшое отверстие, через которое в полость воздушного мешка вводят одну браншу и срезают скорлупу над ним. Затем анатомическим пинцетом захватывают в склада- и осторожко снимают внутренний листок подскорлуповой оболочки. Под ней находится хорионаллантоисная оболочка, на которую пастеровской пипеткой наносят исследуемый материал в количестве 0, 2-0, 5 мл. Отверстие скорлупы закрывают стерильным стеклянным колпачком, который закрепляют на яйце расплавленным парафином. Зараженное яйцо помещают в термостат при 370 на 48 часов. 3аражение в аллантоисную полость. После подготовительной работы скорлупу прокалывают над воздушной камерой и через небольшое отверстие вводят иглой шприца на глубину 1-1, 5 см материал в объеме 0, 1-0, 2 мл. Отверстие заливают парафином. Заражение в амниотическую полость. После удаления скорлупы над воздушной камерой бранши пинцета вводят в аллантоисную полость в направлении эмбриона на глубину 2-2, 5 см, захватывают амниотическую оболочку, выводят ее на глубину прокалывают иглой шприца и в амниотическую полость вводят материал в количестве 0, 1 мл. Отверстие в скорлупе закрывают колпачком и парафинируют. Заражение в желточный мешок. (Этим методом пользуются для выделения риккетсий). Исследуемый материал вводат 5-8-дневным эмбрионам длинной иглой (4-5 см) через небольшое отверстие в скорлупе над воздушной камерой на глубину 2-3 см. При этом надо не повредить зародыш. Во время манипуляции он должен находиться ниже желточного мешка. Просмотреть с помощью овоскопа, отметить границу воздушной камеры и место расположения эмбриона. Ввести эмбриону на хорионаллантоисную оболочку вирус осповакцины или в аллантоисную полость вирус гриппа.
Культуры клеток (тканей). Культуры ткани - это клетки ткани выращенные вне организма на специальной питательной. среде. Клетки ткани в искусственных условиях сохраняю? присущи им обмен и восприимчивость к определенным вирусам. Для культивирования вирусов особенно пригодны клетки с быстрым ростом. По этой причине широко применяют эмбриональные ткани (фибробласты куриных эмбриовов, клетки человека к др., а также культуры тканей опухолей (клетки-Неla, Нер-2 и др.). Кулътивирование клеток может призойти в специальных флаконах (колбы-матрацы, флаконы Карреля) и в пробирках. Культура клеток для роста должна иметь какую-либо опору, например, стенку пробирки. В выросшую культуру ткани, которая покрывает стенку сосуда в виде однослойного клеточного пласта, засевают материал, содержащий вирус. Работу производят в стерильных условиях. Для подавления роста микрофлоры вируссодержащий материал предварительно обрабатывают антибиотиками, чаще пенициллином и стрептомицином. Питательной средой для культуры ткани могут быть различные растворы, сослав которых приближается к составу жидкости организма (синтетическая среда 199, солевой раствор Хенкса с сывороткой, гидролизат лактальбумина с сывороткой и другие). 9. Признаки размножения вирусов в курином эбрионе. " эффект карликовости" (замедление роста), мумификация, шарообразная форма зародыша и гибель на 3—6-й день после заражения. |
Последнее изменение этой страницы: 2017-05-04; Просмотров: 891; Нарушение авторского права страницы