Методы микробиологического исследования при бруцеллезе

1. Материал исследования:

- кровь: берут 5-10 мл из вены в начальном периоде (до лечения антибиотиками),

- моча: 30-20 мл перед посевом центрифугируют 1-2 часа и далее работают с осадком,

- желчь: получают при дуоденальном зондировании (1, 5-2 мл), перед посевом центрифугируют 1-2 часа.

Кроме указанных материалов можно исследовать:

- пунктат из костного мозга,

- ткани плода при спонтанном аборте,

- околоплодные воды,

- кусочки некротизированной плаценты,

- молоко родильницы;

В сельской местности дополнительно:

- мясо погибших животных,

- молоко коров, коз,

- воду,

- навоз.

2. Методы исследования:

1. Микроскопический (ориентировочный, вспомогательный)
2. Бактериологический (один из основных)
3. Биологический (один из основных)
4. Иммунологический (наиболее часто используемый):

- серологические (реакции Райта, Хеддельсона, Минкевича, РИФ, РНИФ, ИФА),

- опсонофагоцитарная проба.

5. Аллергический:

- аллергическая проба Бюрне (с бруцеллином),

- РПН в присутствии аллергена.

 

 

Приложение 2

Схема бактериологического исследования на бруцеллез

I Этап: Материал исследования: Цель работы:

флаконы: накопление микробов

 

 

 

 

№ 1 № 2

МПБ + глюкоза + глицерин или необходимо 5-10% углекислого

 

печеночный бульон + 0, 2% цитрат газа (зажечь ватную пробку и

натрия горящей ввести во флакон, затем

пробку залить расплавленным

парафином)

 

В термостат при + 37^оС 30 дней (контроль каждые 4-5 дней)

 

 

II Этап: Материал исследования: Цель работы:

 

рост на жидких средах накопления получение изолированных

колоний

Рассев на плотную среду

по Граму РИФ

печеночный агар +

антифаговая сыворотка +

генцианвиолет

 

 

В термостат при + 37^оС, 25-30 дней (контроль каждые 4-5 дней)

 

III Этап: Материал исследования: Цель работы:

изолированные колонии выделение и

накопление чистой культуры

 

 

В термостат при + 37^оС,

на 20-25 дней

 

 

печеночный МПА

 

 

по Граму

(РИФ, РНИФ)

 

 

IV Этап: Материал исследования: Цель работы:

чистая культура на идентификация

печеночном МПА микробного вида

 

 

по Граму

(РИФ, РНИФ)

- дифференциация вида бруцелл по:

¨ потребности первичных генераций в СО₂;

¨ бактериостатическому действию на микробов анилиновых

красителей (основного фуксина, тионина);

¨ образованию H₂S;

¨ агглютинации монорецепторными сыворотками на стекле, в развернутой классической РА;

¨ чувствительности к фагу «Тб».

Заключение: на основе комплекса признаков.

 

Приложение 3

Таблица дифференциальных свойств видов роста бруцелл

ВИД	Потреб ность в CO2	Продук ция H2S	Рост на средах с добавлением	Агглютинация с моноспецифической сывороткой	Фагочувствительность
Тионина	Основного фуксина	А	М
Br.melitensis	-	-	+	+	-	+	2 -
Br.abortus (bovis)	+	+	-	+	+	-	+
Br.abortussuis	-	++	+	-	+	-	-

 

Дифференциация видов бруцелл по биохимической активности

ВИД	Гл	Мл	Мн	Сах	Уреазная активность	Молоко	Желатина	Индол
Br.melitensis	К +	-	-	-	Через 2 часа	Не сверты вают	-	-
Br.abortus (bovis)	К +	-	-	-	Через 20-26 час.	-	-
Br.abortussuis	К +	К +	-	-	Через 20 мин.	-	-

Приложение 4

Лабораторная диагностика при сибирской язве

1. Материал исследования:

при кожной форме:

- содержимое везикул, пустул;

- отделяемое карбункула, язвы;

при легочной форме:

- мокрота;

при кишечной форме:

- кал;

при подозрении на септическую форму (на фоне повышенной температуры):

- кровь.

2. Методы исследования:

а) микроскопический (обычный и иммунофлюоресцентный)

б) микробиологический

в) биологический

г) серологический (реакция преципитации по Асколи)

д) аллергологический (внутрикожная аллергическая проба с антраксином).

3. Окраска мокроты больного по методу Ребигера:

На нефиксированный препарат налить краску Ребигера (генцианвиолет, растворенный в 40% формалине – это и краситель, и фиксатор) на 20 секунд. Промыть водой. Капсулы – красно-фиолетовые, бактерии – темно-фиолетовые.

4. Бактериологическое исследование при сибирской язве:

(при наиболее распространенной кожной форме бактериологическое подтверждение только в 50% случаев).

Внимание: бациллы сибирской язвы - спорообразующие аэробы. Для выделения их чистой культуры используют общеизвестную схему выделения чистой культуры аэробов.

5. Биологический метод:

Материал вводится подкожно кроликам (белых мышей и морских свинок не используют потому, что некоторые штаммы слабовирулентных и даже непатогенных для человека бацилл могут вызвать их гибель).

Зараженные кролики гибнут от сибирской язвы через 2-3 суток с явлениями оцепенения, характерно отсутствие трупного окоченения, не свернувшаяся густая, темная кровь.

Дифференциация сибиреязвенного микроба от других почвенных бактерий

Признак	Сибиреязвенная бацилла	Подобные сибиреязвенной	Сенная бацилла
Подвижность	-	+	+
Капсулообразование	+	-	-
Рост на МПБ	МПБ прозрачен, хлопьевидный осадок, пленки нет	МПБ мутный, плотный осадок, на поверхности пленка	МПБ мутный, после образования пленки – прозрачный
Рост на МПА	Белые волнистые колонии	Твердые, округлые беловатые колонии	Серо-беловатые, матовые
Гемолиз	Нет	Гемолиз	Нет
Лакмусовое молоко	Покраснение	Посинение	Посинение
Среда с желтком	Коагуляция через 24 часа	Коагуляция через 6-8 часов	Коагуляция через 6 часов
Патогенность для: - белых мышей, - морских свинок,   - кроликов	Погибают через 24 часа Погибают через 24-36 часов Погибают через 36-72 часа	То же Не патогенные   Не патогенные	Не патогенные микробы Не патогенные   Не патогенные
Отношение к бактериофагу	Лизируются специфическим фагом	Нет	Нет

 

Приложение 5

Микробиологическая диагностика туляремии

I. Бактериологический метод:

Материал для исследования: содержимое бубона, отделяемое кожной язвы, конъюнктивы, зева, кровь, мокрота, ткани и органы трупа человека, грызунов, животных, объекты внешней среды.

1 день: Обработка Мазки-отпечатки Заражение

иммунолюминесцентной Окраска по Граму морской свинки

сывороткой (РИФ, РНИФ)

3-5 дни: Патанатомическое мазки-отпечатки Посев на среду Посев на МПА

исследование органов Окраска по Граму Мак-Коя (нет роста).

(желточная среда)

6-7 дни: Мазок Реакция агглютинации Изучение биохимической

Окраска с туляремийной активности проводят редко

по Граму диагностической (среды Гисса непригодны.

сывороткой Используют монометрический

метод Варбурга).

Бактерии туляремии расщепляют до кислоты гл, мл

Образуют Н₂S.

II. Биологический метод:

подкожное или внутрибрюшинное заражение мышей, морских свинок:

- патанатомическое исследование (увеличение миндалин, органов РЭС и т.д.);

- мазки – отпечатки, микроскопия;

- посев на питательные среды.

III. Серологический метод:

чаще используют для ретроспективной диагностики реакции:

- агглютинации (диагностический титр у детей 1: 100),

- гемагглютинации (титры 1: 1280 – 1: 1560),

- кровяно-капельную реакцию Минкевича,

- реакцию преципитации.

IV. Аллергологический метод:

0, 1 мл тулярина вводится строго внутрикожно.

Для контроля – 0, 1 мл 0, 9% физиологического раствора.

Учет результатов через 24-48 часов.

Приложение 6

Лабораторная диагностика чумы

Материал для исследования

Содержимое бубонов, язв, кровь, СМЖ, мокрота, испражнения, трупный материал (грызунов, людей), блохи.

 

Методы исследования

1. Микроскопический (окраска по Граму, РИФ).

2. Микробиологический с выделением культуры и её идентификацией.

3. Биологический с заражением чувствительных животных (мыши, крысы).

4. Иммунологический: РА, РНГА, РИФ, ИФА.

5. Аллергологический метод применяется in vivo, in vitro

а) Используется при ДСЛ в виде внутрикожной пробы с аллергеном, полученным из псевдотуберкулезного микроба. Это специфический аутолизат или препарат из его клеточной стенки. Положительная реакция начинает проявляться с 4-7 дня болезни и сохраняется до 5 месяцев. Это реакция in vivo на больных.

б) Аллергеном – псевдотуберкулином пользуются так же для реакции повреждаемости нейтрофилов больного in vitro.

Приложение 7

⇐ Предыдущая12

Поделиться: