Архитектура Аудит Военная наука Иностранные языки Медицина Металлургия Метрология Образование Политология Производство Психология Стандартизация Технологии |
Фиксация и окрашивание мазков пунктата костного мозга
3.2.1 Общие правила фиксации и окрашивания мазков пунктата костного мозга: - из доставленного в лабораторию пунктата с антикоагулянтом немедленно готовят 10-12 мазков; 20 мкл пунктата смешивают с 0,4 мл 3,5% раствора уксусной кислоты; - из полученных или приготовленных непосредственно в лаборатории 10-12 мазков для цитологического исследования отбирают 3, их фиксируют, окрашивают и исследуют. П р и м е ч а н и е ¾ Оставшиеся препараты предназначены для консультации у профильного специалиста в случае диагностических затруднений или, при наличии более 10% бластов, - для проведения цитохимических исследований в гематологической лаборатории. Эти препараты, нефиксированные и некрашеные, хранят при комнатной температуре не более 1.5 мес. При отсутствии необходимости в консультации или в цитохимическом исследовании, а особенно у первичных пациентов или при низкой клеточности пунктата, дополнительно обрабатывают и изучают все оставшиеся мазки. - фиксация и окрашивание мазков пунктата костного мозга может выполняться вручную или автоматически с помощью специальных устройств, в которые загружаются нефиксированные мазки. Последующее автоматическое дозирование фиксатора-красителя и буферных растворов обеспечивает стандартную и равномерную окраску; - вручную фиксация и окрашивание мазков пунктата костного мозга проводится аналогично фиксации и окрашиванию препаратов периферической крови. - применение любой методики фиксации и окрашивания мазков требует точного соблюдения последовательности процедур при приготовлении растворов и временных промежутков в течение процесса фиксации и окрашивания. Фиксация мазков выполняется либо как предварительный этап перед окрашиванием, либо одновременно с окрашиванием, если по технологии используются растворы готовых панхромных красителей. Подготовительная работа для выполнения фиксации и окрашивания мазков состоит: в приготовлении буферного раствора, основных и рабочих растворов красителей, подготовке оборудования. 3.2.2 Методика фиксации и окрашивания мазков пунктата костного мозга по Нохту[3] Для фиксации и окрашивания мазков необходимо приготовить следующие реактивы: а) приготовление фосфатного буфера (рН 7,0). Для приготовления основного раствора фосфатного буфера необходимо приготовить навески следующих солей: КН2РО4 (однозамещенного, безводного) - 0,49 г; Nа2 НРО4 (двузамещенного, безводного) - 0,909 г; Навески солей растворяют в дистиллированной воде, в объеме до 1000 мл. П р и м е ч а н и е ¾ Для приготовления буферного раствора (рН 7,0) допустимо использование готовых форм (смеси фосфатных солей в виде таблеток, навесок). б) приготовление основных и рабочего растворов красителей: 1) основной раствор азура ІІ: 1г краски растворяют в 1л дистиллированной воды. Оставляют в посуде из темного стекла на 12 -14 дней при комнатной температуре или в термостате при 37о С на 6-8 дней; 2) основной раствор эозина калия: 1г краски растворяют в 1л дистиллированной воды. Оставляют в посуде из темного стекла на 12 -14 дней при комнатной температуре или в термостате при 37о С на 6-8 дней; 3) рабочий раствор азур-эозина: перед окрашиванием мазков смешивают с 25 мл основного раствора азура ІІ, 20 мл основного раствора эозина калия и 55 мл буферного раствора. Пропорции красителей могут варьировать, их устанавливают опытным путем при приготовлении свежих основных растворов. в) приготовление смеси Никифорова: - смесь Никифорова готовится из этилового спирта (40 мл) и диэтилового эфира (40 мл) в пропорции 1:1. Смесь используется: для хранения чистых предметных стекол. Фиксация мазков[4] Реактив (краситель-фиксатор): раствор эозин-метиленового синего по Май-Грюнвальду или по Лейшману. Оборудование: кювета для фиксации и окраски мазков со штативом-контейнером (или широкогорлая посуда с притертой пробкой). Последовательность процедур: - мазки помещают в штатив-контейнер и опускают его в кювету с фиксатором на 5мин.; - вынимают контейнер из фиксирующего раствора. Окрашивание мазков. Оборудование: - кювета для окраски мазков со штативом-контейнером (или лотки со специальными «рельсами» для окраски мазков); - химические стаканы низкие (для разведения красителей). Реактивы: - рабочий раствор азур–эозина; Последовательность процедур: - контейнер с фиксированными мазками переносят в кювету с рабочим раствором красителя (или фиксированные мазки располагают горизонтально на специальные рельсы и наливают по 3-4 мл красителя на каждый из препаратов), на 20 - 45 минут [5]; - смывают краску водопроводной водой; - окрашенные и промытые мазки высушивают на воздухе в течение 15 –20 минут. 4.2.3 Методика окрашивания мазков пунктата костного мозга по Паппенгейму[6] [6]. Реактивы: - раствор фиксатора-красителя по Май–Грюнвальду; -раствор азур-эозина по Нохту или готовый краситель Романовского–Гимзы, разведенный фосфатным буфером в 10 - 20 раз; Последовательность процедур: - сухие нефиксированные мазки аккуратно помещают в штатив-контейнер для окраски мазков или располагают горизонтально на специальные рельсы; - штатив-контейнер опускают в кювету с раствором фиксатора-красителя на 3 - 5 минут, или наливают по 3 - 4 мл фиксатора-красителя на каждый из препаратов, находящихся на рельсах; - контейнер с мазками ополаскивают в кювете с дистиллированной водой в течение 1 минуты или на мазок, не сливая фиксатор-краситель, добавляют дистиллированную воду на 1 мин; - помещают контейнер с мазками в кювету с рабочим раствором азур-эозиновой краски по Нохту (или по Романовскому-Гимзе) на 8 -10 минут или наливают краситель на мазки, находящиеся на рельсах; - смывают краску водопроводной водой, мазки высушивают. |
Последнее изменение этой страницы: 2019-03-30; Просмотров: 324; Нарушение авторского права страницы