Архитектура Аудит Военная наука Иностранные языки Медицина Металлургия Метрология
Образование Политология Производство Психология Стандартизация Технологии


Фиксация и окрашивание мазков пунктата костного мозга



3.2.1 Общие правила фиксации и окрашивания мазков пунктата костного мозга:

- из доставленного в лабораторию пунктата с антикоагулянтом немедленно готовят 10-12 мазков; 20 мкл пунктата смешивают с 0,4 мл 3,5% раствора уксусной кислоты;

- из полученных или приготовленных непосредственно в лаборатории 10-12 мазков для цитологического исследования отбирают 3, их фиксируют, окрашивают и исследуют.

П р и м е ч а н и е ¾ Оставшиеся препараты предназначены для консультации у профильного специалиста в случае диагностических затруднений или, при наличии более 10% бластов, - для проведения цитохимических исследований в гематологической лаборатории. Эти препараты, нефиксированные и некрашеные, хранят при комнатной температуре не более 1.5 мес. При отсутствии необходимости в консультации или в цитохимическом исследовании, а особенно у первичных пациентов или при низкой клеточности пунктата, дополнительно обрабатывают и изучают все оставшиеся мазки.

- фиксация и окрашивание мазков пунктата костного мозга может выполняться вручную или автоматически с помощью специальных устройств, в которые загружаются нефиксированные мазки. Последующее автоматическое дозирование фиксатора-красителя и буферных растворов обеспечивает стандартную и равномерную окраску;

- вручную фиксация и окрашивание мазков пунктата костного мозга проводится аналогично фиксации и окрашиванию препаратов периферической крови.

- применение любой методики фиксации и окрашивания мазков требует точного соблюдения последовательности процедур при приготовлении растворов и временных промежутков в течение процесса фиксации и окрашивания.

Фиксация мазков выполняется либо как предварительный этап перед окрашиванием, либо одновременно с окрашиванием, если по технологии используются растворы готовых панхромных красителей.

 Подготовительная работа для выполнения фиксации и окрашивания мазков состоит: в приготовлении буферного раствора, основных и рабочих растворов красителей, подготовке оборудования.

 3.2.2 Методика фиксации и окрашивания мазков пунктата костного мозга по Нохту[3]

 Для фиксации и окрашивания мазков необходимо приготовить следующие реактивы:

    а) приготовление фосфатного буфера (рН 7,0). Для приготовления основного раствора фосфатного буфера необходимо приготовить навески следующих солей:

КН2РО4 (однозамещенного, безводного)  - 0,49 г;

2 НРО4 (двузамещенного, безводного) - 0,909 г;

Навески солей растворяют в дистиллированной воде, в объеме до 1000 мл.

П р и м е ч а н и е ¾ Для приготовления буферного раствора (рН 7,0) допустимо использование готовых форм (смеси фосфатных солей в виде таблеток, навесок).

б) приготовление основных и рабочего растворов красителей:

1) основной раствор азура ІІ: 1г краски растворяют в 1л дистиллированной воды. Оставляют в посуде из темного стекла на 12 -14 дней при комнатной температуре или в термостате при 37о С на 6-8 дней;

2) основной раствор эозина калия: 1г краски растворяют в 1л дистиллированной воды. Оставляют в посуде из темного стекла на 12 -14 дней при комнатной температуре или в термостате при 37о С на 6-8 дней;

3) рабочий раствор азур-эозина: перед окрашиванием мазков смешивают с 25 мл основного раствора азура ІІ, 20 мл основного раствора эозина калия и 55 мл буферного раствора. Пропорции красителей могут варьировать, их устанавливают опытным путем при приготовлении свежих основных растворов.

в) приготовление смеси Никифорова:

- смесь Никифорова готовится из этилового спирта (40 мл) и диэтилового эфира (40 мл) в пропорции 1:1. Смесь используется: для хранения чистых предметных стекол.

Фиксация мазков[4]

Реактив (краситель-фиксатор):  раствор эозин-метиленового синего по Май-Грюнвальду или по Лейшману.

Оборудование: кювета для фиксации и окраски мазков со штативом-контейнером (или широкогорлая посуда с притертой пробкой).

Последовательность процедур:

- мазки помещают в штатив-контейнер и опускают его в кювету с фиксатором на 5мин.;

- вынимают контейнер из фиксирующего раствора.

       Окрашивание мазков.

Оборудование:

- кювета для окраски мазков со штативом-контейнером (или лотки со специальными «рельсами» для окраски мазков);

- химические стаканы низкие (для разведения красителей).

Реактивы:

- рабочий раствор азур–эозина;

Последовательность процедур:

- контейнер с фиксированными мазками переносят в кювету с рабочим раствором красителя (или фиксированные мазки располагают горизонтально на специальные рельсы и наливают по 3-4 мл красителя на каждый из препаратов), на 20 - 45 минут [5];

- смывают краску водопроводной водой;

- окрашенные и промытые мазки высушивают на воздухе в течение 15 –20 минут.

4.2.3 Методика окрашивания мазков пунктата костного мозга по Паппенгейму[6] [6].

Реактивы:

- раствор фиксатора-красителя по Май–Грюнвальду;

-раствор азур-эозина по Нохту или готовый краситель Романовского–Гимзы, разведенный фосфатным буфером в 10 - 20 раз;

Последовательность процедур:

- сухие нефиксированные мазки аккуратно помещают в штатив-контейнер для окраски мазков или располагают горизонтально на специальные рельсы; 

- штатив-контейнер опускают в кювету с раствором фиксатора-красителя на 3 - 5 минут, или наливают по 3 - 4 мл фиксатора-красителя на каждый из препаратов, находящихся на рельсах;

- контейнер с мазками ополаскивают в кювете с дистиллированной водой в течение 1 минуты или на мазок, не сливая фиксатор-краситель, добавляют дистиллированную воду на 1 мин;

- помещают контейнер с мазками в кювету с рабочим раствором азур-эозиновой краски по Нохту (или по Романовскому-Гимзе) на 8 -10 минут или наливают краситель на мазки, находящиеся на рельсах;

- смывают краску водопроводной водой, мазки высушивают.


Поделиться:



Последнее изменение этой страницы: 2019-03-30; Просмотров: 324; Нарушение авторского права страницы


lektsia.com 2007 - 2024 год. Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав! (0.011 с.)
Главная | Случайная страница | Обратная связь