Цель – изучение биологических свойств чистой культуры бактерий

                                              

Биохимическая активность

                                          Визуально   ТАВК

 

                                          По Граму

                                                                  Ориентиров

                                                                             РА

                                          Подвижность

Чистая культура                                                             гл лак мн мл сах

на МПА или                                                                   а) углеводолитическая актив-ть

ср.Ресселя

 

                              МПБ МПБ МПБ МПС

                        индо сероводород лак желатин

                       а)протеолитическая

Серологические свойства

ТАВК

 

Ориентировочная реакция

агглютинации на стекле

Антитела Т, А, В.                 1/50 1/100 1/120 1/400 1/800 1/1600… КК  КС

К – контроль                         Развернутая (пробирочная) реакция агглютинация

Фагодиагностика

 

а) Типирование бактериофагами

 

К

В

А

Т

             К

 

 

 

В                             Т

 

                                                                       В жидком МПБ

              

    

А

На плотном МПА Т, А, В – б/фаги

К – физ.раствор

 

б) Чувствительность к поливалентному (Т, А, В) на плотной или жидкой среде

Выполняются также, но со смесью б/фагов, без их разделения.

Дополнение к 3 а

       Свежевыделенные (идентифицированные) брюшнотифозные бактерии содержат Vi – антигены, к ним обнаружены 24 типа Vi – фага. Соответственно существует 24 типа брюшнотифозных Vi – штаммов. Кроме того, существует Vi – фаг I типа – универсальный для всех брюшнотифозных бактерий.

       Методика фаготипирования по Vi - специфичности

1. Чистую культуру отсеять на МПБ. Выращивать 4 дня при + 37^оС.

2. 25 капель 4-х суточной культуры раздельно раскапать на чашки с МПА. Подсушить.

3. К каждой подсушенной капле добавить один из 24-х Vi –бактериофагов, а к 25-й обязательно Vi – фаг универсального типа. Подсушить.

4. Поместить в термостат при + 37^оС на 2 часа, затем на 8-10 часов на холод (+ 4^оС) и опять в термостат на 4 часа при + 37^оС.

5. Учет результатов. Лизис культуры Vi – фагом I типа свидетельствует о её принадлежности к брюшнотифозным микробам.

Лизис одним из 24 типов фага указывает на принадлежность штамма к этому типу моно- Vi – фага.

 

 

Чувствительность к лекарственным веществам антибиотикам

 

 

 

 

 

                                  

Метод лекарственных 1/5  1/10 1/20 1/40 1/80 Контроль Контроль

дисков (диффузионный         Метод серийных разведений культуры антибиотика

на МПА)

Зона отсутствия роста -       Среда без помутнения говорит о чувствительности, с ним – 

у чувствительных к-р,    об её отсутствии.

наличие его – у устойчивых.

 

5. Заключение об идентификации микробного вида

 

На основании изученных свойств: морфологических, структурных,

тинкторальных, подвижности, биохимических (углеводо- и протеолитических) серологических (антигенный состав), чувствительности к бактериофагу – делаем заключение о виде возбудителя – идентифицируем микробный вид фаготип культур.

       На основании чувствительности к лекарственным веществам и бактериофагам, даем заключение, чем надо лечить больного.

 

 

Приложение № 2

Бактериологический метод. Выделение чистой культуры при брюшном тифе из кала (копрокультура)

 

       Метод отличается от предыдущего (гемокультура) только начальным этапом – подготовкой и характером материала и исключением накопления культуры.

       Цель – получение изолированной колонии.

                                          Посев (рассев) на ДДС                                          

                              По Граму Т А В К                                              + 37^оС

                                                                                                            18-24 часа

                               

 

                   Подвижность

Исследуемый                                 Ориентировочная РА         Висмут – сульфит агар,

Материал                            с АТ Т, А, В                       среды Левина, Плоскирева,

(кал в физ.р-ре)                   К – контроль                       Эндо и т.д.

                                           

       Дальнейшее изучение изолированных колоний, накопление чистой культуры и её исследование идёт по типу гемокультуры. Приложение № 5.

Приложение № 3

Ускоренный бактериологический метод исследования крови при тифо-паратифозных инфекциях (Метод профессора Блинкина)

 

       Метод основан на применении 2-х комплексов комбинированных питательных сред для выделения и идентификации культур, за счет чего этапы анализа сокращаются.

I комплекс

С 3-х сторон от пробирки индикаторные

полоски на индол, аммиак, H₂S

 

 

                       

 

МПА с глюкозой                       МПА с лактозой

                           и индикатором                            и индикатором

 

                                          МПБ с газоулавливающим поплавком

 

II комплекс

 

                   МПА с мальтозой                             МПА с сахарозой

                       и индикатором                    и индикатором

 

                   Среда Раппопорт с маннитом и поплавком-газоулавливателем

 

Изучение свойств культуры:

 

Визуальный контроль По Граму         Подвижность       Т А В К

 

 

       Биохимическая, серологическая (ориентировочная реакция агглютинации), чувствительность к бактериофагу совмещены.

 

 

Приложение № 4

Схемы различных вариантов реакции агглютинации Видаля

Варианты РА	«Инфекционная» (разгар заболевания)				«Анамнестическая»				«Прививочная»

Разведения сыворотки