КИШЕЧНЫЕ ВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ (ГЕПАТИТЫ А, Е, ПОЛИОМИЕЛИТ, РОТАВИРУСНАЯ ИНФЕКЦИЯ). ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА

Занятие № 2.3.4

КИШЕЧНЫЕ ВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ (ГЕПАТИТЫ А, Е, ПОЛИОМИЕЛИТ, РОТАВИРУСНАЯ ИНФЕКЦИЯ). ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ:

изучить основные группы энтеровирусов; биологические свойства возбудителей гепатитов А, Е, полиомиелита,ротавирусов; принципы вирусологической диагностики энтеровирусных инфекций.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:

1. Характеристику биологических свойств возбудителей.

2. Клинику, патогенез, эпидемиологию, восприимчивость, иммунитет, механизм передачи возбудителей при энтеровирусных инфекциях.

3. Принципы лабораторной диагностики гепатитов А, Е, полиомиелита, инфекций, вызванных ротавирусами.

4. Основы профилактики гепатитов А, Е, полиомиелита,

ротавирусных и других энтеровирусных инфекций.

5. Препараты для диагностики, лечения и профилактики энтеровирусных

инфекций.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:

· составлять алгоритм вирусологического обследования пациента с
энтеровирусной инфекцией;

· интерпретировать результаты вирусологических исследований с целью
диагностики энтеровирусных инфекций;

· классифицировать препараты в соответствии с их назначением.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ВЛАДЕТЬ:

· методами оценки природных и медико-социальных факторов среды в развитии инфекционных болезней; основами профилактических мероприятий по предупреждению инфекционных болезней;

· алгоритмом лабораторной диагностики кишечных вирусных инфекций; методами анализа и оценки результатов лабораторной диагностики по выявлению возбудителей;навыками изучения научно-медицинской информации, отечественного и зарубежного опыта по данной теме.

Работа № 1. Принципиальная лабораторная диагностика энтеровирусных инфекции

Цель:изучить схему лабораторной диагностики энтеровирусных инфекций. Самостоятельная работа: отметить основные направления и этапы лабораторной диагностики энтеровирусных инфекций (см. теоретическую справку).Отметить необходимость и информативность используемых методов.

3 d4XMlVvsJ85VaBmVWJ9LAV0IQ865bzo00m/cgJa8mxuNDCTHlqtRLlRuNN9GUcKN7C0tdHLAY4fN VzUZAXNqsvrqVGUWf9BvqZ/0++1DiMeH9fAKLOAa/sLwi0/oUBJT7SarPNMCnrN4R1EBaQKM/Jdt QroWsEti4GXB/x8ofwAAAP//AwBQSwECLQAUAAYACAAAACEAtoM4kv4AAADhAQAAEwAAAAAAAAAA AAAAAAAAAAAAW0NvbnRlbnRfVHlwZXNdLnhtbFBLAQItABQABgAIAAAAIQA4/SH/1gAAAJQBAAAL AAAAAAAAAAAAAAAAAC8BAABfcmVscy8ucmVsc1BLAQItABQABgAIAAAAIQDmeyt1tAIAADcFAAAO AAAAAAAAAAAAAAAAAC4CAABkcnMvZTJvRG9jLnhtbFBLAQItABQABgAIAAAAIQAO4dS+3AAAAAgB AAAPAAAAAAAAAAAAAAAAAA4FAABkcnMvZG93bnJldi54bWxQSwUGAAAAAAQABADzAAAAFwYAAAAA " fillcolor="window" strokecolor="windowText" strokeweight="1pt"/>Исследуемый материал: испражнения, отделяемое носоглотки, СМЖ, кровь и др.

Заражение первичных и перевиваемых культур клеток человека и обезьян, Hela, Hep-2 и др.

Заражение однодневных мышей-сосунков

Серодиагностика: сыворотка для обнаружения антител – РН, РСК, РП, РТГА (при заболеваниях, вызываемых вирусами Коксаки и ECHO

Индикация по ЦПД Идентификация: РН по методу цветной пробы с сыворотками против полиовирусов; РН в культуре клеток с поливалентными сыворотками Коксаки и ECHO

Индикация: клинические симптомы, патоморфологические исследования Идентификация: РН, РТГА

Работа № 2. Строение энтеровирусов

Цель: изучить морфологию энтеровирусов.

Самостоятельная работа: используя атлас, теоретическую справку, зарисовать строение вирусов полиомиелита, ECHO, Коксаки, гепатитов АиЕ, ротавирусов; описать, сделать вывод.

пикорнавирусыкалицивирусы (вирус ГЕ)реовирусы (ротавирус)

Вывод:________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Работа № 3. Вирусологическая диагностика энтеровирусов

Методические указания

Идентификацию вирусов проводят в различных серологических реакциях, используя известные специфические антитела. Например, вирусы полиомиелита можно дифференцировать от вирусов Коксаки А и В, ECHO в РСК, используя антитела к общему антигену (VP-4) для всех типов вирусов полиомиелита.

В реакции использована диагностическая сыворотка, содержащая антитела к общему (внутреннему) антигену вируса полиомиелита VP-4 и исследуемый вируссодержащий материал.

Тип вируса полиомиелита определяют в реакции нейтрализации по цветной пробе, используя антитела к поверхностным антигенам вирусов полиомиелита 3-х типов (VP-1, VP-2 и VP-3).

Самостоятельная работа

А) Цель: определить наличие вируса полиомиелитависследуемом материале от больногос помощью РСК, поставленной с диагностической сывороткой, содержащей антитела к общему (внутреннему) антигену вируса полиомиелита VP-4.

Самостоятельная работа: учесть результат реакции связывания комплемента, сделать вывод. Описать реакцию по схеме.

Направление:___________________________________________________________________

Ингредиенты:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Механизм:

Постановка:

Опыт КС КД КГС

Результат:_____________________________________________________________________

Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

Б) Цель: определить тип вируса полиомиелита в реакции нейтрализации по результату постановки цветной пробы, используя антитела к поверхностным антигенам вирусов полиомиелита 3-х типов (VP-1, VР-2 и VP-3).

Самостоятельная работа: учесть результат реакции нейтрализации, сделать вывод. Описать реакцию по схеме.

Методические указания

Цветная проба для обнаружения вируса полиомиелита в культуре тканиприменяется наряду с изучением цитопатогенного эффекта, вызываемого вирусом в культуре тканей. В пробирки с культурами тканей и питательной средой вносят исследуемый материал и индикатор феноловый красный, пробирки ставят в термостат. В этом случае, если вирус не размножается в культуре ткани, кислые продукты метаболизма клеток поступают в среду, которая приобретает желтую окраску. Если же полиовирусы размножаются в клетках тканей и пораженные клетки гибнут, то среда сохраняет первоначальный красный цвет, так как в неё не поступают кислые продукты метаболизма клеток и не изменяют её окраску. При рН 7,4-7,8 цвет среды красный, при рН 7,2 — оранжевый, при рН 7,0 и ниже — жёлтый. Таким образом, по изменению цвета среды с культурой тканей, куда внесён исследуемый материал и индикатор, можно судить о поражении клеток вирусами.

Направление:___________________________________________________________________

Механизм:

Постановка:

	Диагностические сыворотки, содержащие антитела к поверхностным антигенам вируса полиомиелита			Контроль среды	Контроль культуры клеток	Контроль вируса
	VP-1(тип1)	VP-2 (тип2)	VP-3 (типЗ)
Результат реакции

Вакцина «ИмоваксПолио»

2._____________________________________________________________________________

3._____________________________________________________________________________

4._____________________________________________________________________________

5._____________________________________________________________________________

6._____________________________________________________________________________

Вакцина «Аваксим»

2._____________________________________________________________________________

3._____________________________________________________________________________

4._____________________________________________________________________________

5._____________________________________________________________________________

6._____________________________________________________________________________

Вакцина ротавирусная

2._____________________________________________________________________________

3._____________________________________________________________________________

4._____________________________________________________________________________

5._____________________________________________________________________________

6._____________________________________________________________________________

Заполнить контрольные карты по предложенным нозоформам:

ПОЛИОМИЕЛИТ

Эпидемиология

Источник инфекции____________________________________________________________

Механизм передачи____________________________________________________________

Пути передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Факторы передачи_____________________________________________________________

Патогенез

Входные ворота________________________________________________________________

Инкубационный период_________________________________________________________

Основные фазы патогенеза___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Назовите основные клинические формы полиомиелита:

____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Лабораторная диагностика_____________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Неспецифическая профилактика (мероприятия)____________________________________________________________________________________________________________________________________________

Специфическая профилактика (препараты)_______________________________________________________________________________________________________________________________________________

ГЕПАТИТ А

Эпидемиология

Источник инфекции____________________________________________________________

Механизм передачи____________________________________________________________

Пути передачи________________________________________________________________

Факторы передачи_____________________________________________________________

Патогенез

Входные ворота_______________________________________________________________

Инкубационный период________________________________________________________

Основные клинические проявления в зависимости от возраста:

____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Лабораторная диагностика_____________________________________________________

_____________________________________________________________________________

ГЕПАТИТ Е

Эпидемиология

Источник инфекции___________________________________________________________

Механизм передачи____________________________________________________________

Пути передачи________________________________________________________________

Факторы передачи_____________________________________________________________

Патогенез

Входные ворота________________________________________________________________

Инкубационный период_________________________________________________________

Особенности течения гепатита Е:

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Лабораторная диагностика_____________________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Эпидемиология

Источник инфекции____________________________________________________________

Механизм передачи____________________________________________________________

Пути передачи________________________________________________________________

Факторы передачи_____________________________________________________________

Патогенез

Входные ворота_______________________________________________________________

Инкубационный период________________________________________________________

Основные клинические проявления:

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Лабораторная диагностика____________________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Специфическая профилактика (препараты)_________________________________________________________________

Эпидемиология

Источник инфекции____________________________________________________________

Механизм передачи____________________________________________________________

Пути передачи________________________________________________________________

Факторы передачи_____________________________________________________________

Патогенез

Входные ворота_______________________________________________________________

Инкубационный период________________________________________________________

Основные клинические проявления:

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Лабораторная диагностика____________________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Специфическая профилактика (препараты)__________________________________________________________________

Решить ситуационные задачи.

1. В клинику поступил больной с предварительным диагнозом «Полиомиелит?». В процессе лечения его обследовали на 5-й и 30-й дни болезни для выявления специфических антител с помощью цветной пробы. Результаты исследования: на 5-й день - положительная цветная проба в разведении сыворотки 1/10, на 30-й— 1/80. Оценить диагностическую ценность полученного результата.

2. В диагностическое отделение инфекционной больницы поступило несколько детей в возрасте 10-12 лет из пригородного спортивного лагеря. По клиническим симптомам был поставлен предварительный диагноз «Гепатит А?». Какой исследуемый материал необходимо взять для лабораторного исследования? Какие методы необходимо использовать для диагностики заболевания?

Пример решения задачи

В диагностическое отделение инфекционной больницы поступили двое больных с желтухой. Возникло подозрение на гепатит А. В целях подтверждения диагноза в лабораторию отправлена сыворотка крови больных для проведения иммуноферментного анализа с использованием диагностикума вируса гепатита А. Оценить результат, записать протокол, сделать выводы.

Выделяется для учета результатов исследования полистироловый планшет с результатами ИФА.

Вопросы 1. Какую тест-систему взяли для исследования? 2. Зарисовать схему реакции (ИФА) в данном исследовании. 3. У кого из больных подтвержден диагноз гепатита А и почему?

Решение. Студент учитывает данные ему результаты исследований, заполняет протокол и делает выводы:

1. Для исследования взята тест-система для ИФА с адсорбированными на твердой фазе антигенами (HAV-АГ) вируса гепатита А,

где 1 - твердая фаза (дно лунки планшета); 2 - адсорбированный на твердой фазе АГ вируса (HAV-антиген); 3 - сыворотка крови больного; 4 - антиглобулиновая сыворотка, меченная ферментом пероксидазой; 5, 6 - субстрат к ферменту и индикатор на продукты расщепления субстрата.

3. При проведении лабораторного исследования подтвердился диагноз гепатита А у больного А., так как результат иммуноферментного анализа у него положительный, т. е. выявлены AT против HAV-антигена вируса.

Подпись преподавателя_______________

Теоретическая справка

К работе № 1, 3, 4, 5

Ротавирусы

Лабораторная диагностика заболеваний, вызванных данным возбудителем, проводится путем выявления вируса в фекальных массах больных в первую неделю заболевания, с одной стороны, и регистрация нарастания титра специфических антител в парных сыворотках - с другой. Ротавирусы обнаруживаются в фекальных массах в 100% случаев в первые дни заболевания с помощью иммунной электронной микроскопии. Вирусный антиген выявляют в фекалиях иммуноферментным и радиоиммунным методами, в реакциях иммунофлюоресценции, а также с помощью нуклеиновых зондов. Вирусы могут быть выделены в культурах клеток в первые дни болезни. Серологическую диагностику проводят в реакциях нейтрализации вируса в культуре клеток, РСК, а также в РТГА с эритроцитами человека группы 0. В качестве диагностикума используют ротавирусы обезьян и телят.

y 9qaQuXILnvVchZZRCPpcCuhCGHLOfdNpK/3WDRrJu7rRykDn2HI1yoXCreG7KNpzK3ukD50c9KnT zVc1WQFzarP606nKLv5oXlM/mbfruxCbu/X4DCzoNfzB8FufqkNJnWo3ofLMCIizp4RQMh53wAhI 4oSEmoQoToGXBf8/ofwBAAD//wMAUEsBAi0AFAAGAAgAAAAhALaDOJL+AAAA4QEAABMAAAAAAAAA AAAAAAAAAAAAAFtDb250ZW50X1R5cGVzXS54bWxQSwECLQAUAAYACAAAACEAOP0h/9YAAACUAQAA CwAAAAAAAAAAAAAAAAAvAQAAX3JlbHMvLnJlbHNQSwECLQAUAAYACAAAACEA/R67ALQCAAA3BQAA DgAAAAAAAAAAAAAAAAAuAgAAZHJzL2Uyb0RvYy54bWxQSwECLQAUAAYACAAAACEAHWtfat0AAAAK AQAADwAAAAAAAAAAAAAAAAAOBQAAZHJzL2Rvd25yZXYueG1sUEsFBgAAAAAEAAQA8wAAABgGAAAA AA== " fillcolor="window" strokecolor="windowText" strokeweight="1pt"/>Испражнения, рвотные массы

ИЭМ, ИФА, РИА, РИФ, РН, ПЦР – для выявления специфических антигенов

Серодиагностика: сыворотка для обнаружения антител – ИФА, РСК, РПГА, РН, РИФ.

Маркеры гепатитов А и Е

Возбуди-тель	Маркеры	Диагностическое значение
Вирус HA	Антиген HAV Ag анти-HAVIgM анти-HAVIgG	Определяется в фекалиях уже через 10–20 дней после заражения и обычно сохраняется там короткое время (не более 1–2 недель). Появляются в сыворотке в начале желтушного периода и сохраняются до 6 месяцев. Таким образом, выявление антител анти-НAV IgM указывает на острое заболевание вирусным гепатитом А. Появляются в начальной стадии инфекции и сохраняются в крови всю жизнь.Обнаружение в крови антител анти-HAV IgG при отсутствии анти-HAV IgM указывает на перенесенный в прошлом вирусный гепатит А.
Вирус HE	антигеныВГЕ анти-HEVIgM анти-HEVIgG	Определяют методом иммуноэлектронной микроскопии, ПЦР,иммунофлюоресцирующих антител (МФА) в фекалиях больных определяются с высокой частотой в сыворотках больных ГЕ в острой стадии заболевания и в период ранней реконвалесценции; свидетельствуют о перенесенной в прошлом ГЕ - инфекции.

Занятие № 2.3.4

КИШЕЧНЫЕ ВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ (ГЕПАТИТЫ А, Е, ПОЛИОМИЕЛИТ, РОТАВИРУСНАЯ ИНФЕКЦИЯ). ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ:

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:

1. Характеристику биологических свойств возбудителей.

3. Принципы лабораторной диагностики гепатитов А, Е, полиомиелита, инфекций, вызванных ротавирусами.

4. Основы профилактики гепатитов А, Е, полиомиелита,

ротавирусных и других энтеровирусных инфекций.

5. Препараты для диагностики, лечения и профилактики энтеровирусных

инфекций.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:

· составлять алгоритм вирусологического обследования пациента с
энтеровирусной инфекцией;

· интерпретировать результаты вирусологических исследований с целью
диагностики энтеровирусных инфекций;

· классифицировать препараты в соответствии с их назначением.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ВЛАДЕТЬ:

12 3 4 Следующая ⇒

Последнее изменение этой страницы: 2019-04-10; Просмотров: 301; Нарушение авторского права страницы