наличия возбудителей Высокая скорость

                                       получения результата анализа

 

                                                   20

 Положительные:

– Прямое определение наличия возбудителей (выявление специфического участка ДНК возбудителя методом ПЦР дает прямое указание на присутствие возбудителя инфекции)

– Высокая специфичность (высокая специфичность метода ПЦР обусловлена тем, что в исследуемом материале выявляется уникальный, характерный только для данного возбудителя фрагмент ДНК. Специфичность задается нуклеотидной последовательностью праймеров, что исключает возможность получения ложных результатов, в отличие от метода иммуноферментного анализа, где нередки ошибки в связи с перекрестно-реагирующими антигенами.

– Высокая чувствительность (метод ПЦР позволяет выявлять даже единичные клетки бактерий или вирусов. Теоретически для осуществления реакции достаточно всего одной копии искомой ДНК (РНК) -последовательности в исследуемом материале, что позволяет использовать ее даже в тех случаях, когда серологические и бактериологические исследования не дают положительного результата вследствие крайне низкого микробного титра (например при контроле инфекционной безопасности донорской крови и органов, диагностике хронических и латентных инфекций).

– Универсальность процедуры выявления различных возбудителей (материалом для исследования методом ПЦР служит ДНК возбудителя. Метод основан на выявлении фрагмента ДНК или РНК, являющегося специфичным для конкретного организма. Сходство химического состава всех нуклеиновых кислот позволяет применять унифицированные методы проведения лабораторных исследований. Это дает возможность диагностировать несколько возбудителей из одной биопробы. В качестве исследуемого материала могут использоваться различные биологические выделения (слизь, моча, мокрота), соскобы эпителиальных клеток, кровь, сыворотка

– Высокая скорость получения результата анализа (для проведения ПЦР-анализа не требуется выделение и выращивание культуры возбудителя, что занимает большое количество времени. Это особенно заметно при исследовании медленно растущих микроорганизмов.

Однако даже в случае быстрорастущих культур оперативность ПЦР     может быть полезной. Например, выделение, идентификация и определение лекарственной устойчивости 

 

 

                                                         

 

                                                   21

          штаммов метициллинрезистентного золотистого стафилококка

–  (MRSA) с помощью традиционных микробиологических методов требуют не менее 3-5 дней, в то время как ПЦР-анализ позволяет выявить MRSA менее чем за сутки.

Отрицательные:

– Контаминация (экстремальная чувствительность реакции ферментативной амплификации ДНК является одновременно ахиллесовой пятой технологии ПЦР. Этот парадокс известен также как проблема чувствительности ПЦР к загрязнению (контаминированию) посторонними молекулами ДНК, которые могут служить мишенью для используемого набора праймеров. Даже единичные молекулы загрязняющей ДНК могут быть многократно копированы в процессе ПЦР, приводя к образованию целевого ДНК-продукта, а следовательно, к ложноположительному результату. )

– Ингибирование (связано с снижением чувствительности ПЦР, следствием которого являются ложноотрицательные результаты.

– Дорогостоящее исследование (Для ее реализации необходимо комплексное оснащение лаборатории, включая не только термоциклер и устройство для ДНК-электрофореза, но и отдельные центрифуги, холодильники, дозаторы и другое оборудование. Затраты на ПЦР включают высокую стоимость реактивов и расходуемых материалов. Поэтому только в случае выявления и исследования труднокультивируемых возбудителей ПЦР может быть сопоставима по стоимости с традиционными микробиологическими методами.  

 

                                                Вывод:

Как видно по диаграмме, что этот метод имеет больше положительных качеств, и поэтому более широкое внедрение этого метода в лабораторную диагностику, позволит в разы увеличить качество и уменьшить время на проведение анализа.

 

                              ЗАКЛЮЧЕНИЕ

 

    В настоящее время метод ПЦР-диагностика развивается семинальными шагами. Во всем мире совершенствуются, модифицируются и разрабатываются всевозможные модификации ПЦР-анализа. Каждый год на медицинский рынок поступает десятки новых разработок и тест-систем ПЦР-диагностики, предназначенных для выявления нуклеотидных последовательностей различных микроорганизмов-возбудителей инфекционных заболеваний. Новые разработки для проведения ДНК-

 

                                                    22                       

исследований с каждым разом снижают себестоимость ПЦР-анализа, делая его

доступным для широкого использования в диагностических и лечебных целях. Диагностика инфекционных заболеваний является наиболее частым приложением ПЦР в многопрофильных медицинских учреждениях. Необходимо помнить, что, во-первых, метод ПЦР должен применяться клиницистами осмысленно, и врач, решивший использовать ПЦР в своей работе, должен обладать определенными знаниями об особенностях и возможностях данного метода. Во-вторых, между клиницистом и ПЦР-лабораторией должна существовать тесная обратная связь, необходимая для анализа сложных случаев и выработки правильной диагностической стратегии. В-третьих, ПЦР-анализ не является панацеей в диагностике и не заменяет существующие методы исследований, а лишь дополняет их. И главное – ПЦР не может заменить интуицию и аналитическое мышление, которыми должен обладать врач, рассчитывающий на успех. ПЦР позволяет выявить этиологию инфекции даже если в пробе, взятой на анализ, содержится всего несколько молекул ДНК возбудителя. ПЦР широко используется в ранней диагностики ВИЧ-инфекций, вирусных гепатитов и т.д. На сегодняшний день почти нет инфекционного агента, которого нельзя было бы выявить с помощью ПЦР.

 

 

                                                 23

           СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

 

1. Гинцбург А.Л. Микробиология, иммунология и вирусология. – 2009.

 

2. Глик Б., Пастренак Дж. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение – Москва: Мир, 2009.

 

3. Меньшиков В.В. (под ред.). Методики клинических лабораторных исследований. Том 3 // Справочное пособие. – изд. Лабора, Москва, 2009. – с.729-731

 

4. Падутов В.Е., Баранов О.Ю., Воропаев В.Е. Методы молекулярно-генетического анализа. – Мн.: Юнипол, 2010. – с.176

 

5. Ребриков Д.В., Саматов Г.А., Трофимов Д.Ю. ПЦР в реальном времени 2009 – с.677

 

6. Херсонская А.М. Современные методы клинической диагностики: ПЦР в режиме реального времени // Справочник заведующего КДЛ 2010.No11 с.31-36

 

7. http: //www. wjtoday.ru/analiz-pcr/

 

8. http: // genitalhealtn.ru/138/ Analiz-PTSR/#4

 

                                                    

 

                                                 

 

                                                 

 

 

                                                 

 

 

⇐ Предыдущая123456

Поделиться: