Методы культивирования анаэробов.

Методы культивирования анаэробов.

Механические методы:

1. Посев уколом в столбик сахарного агара.

2. Метод Виньял-Вейона: в расплавленный и остуженный до 50° С агар вносят исследуемую анаэробную культуру, перемешивают и засасывают в пастеровскую пипетку, конец которой запаивают. Через 24 — 48 часов столбике агара вырастают ясно видимые колонии микробов — анаэробов.

3. Метод Перетца. Исследуемый материал вносят в 3 пробирки с физиологическим раствором, а затем в 3 пробирки с остуженным до 50° С МПА. Содержимое пробирок перемешивают и выливают в 3 стерильные чашки Петри, на дно которых предварительно кладут стерильное предметное стекло, через 18-20 часов инкубации в термостате под пластинками стекла вырастают анаэробы.

Физические методы:

1. Анаэростат — создание вакуумных условий.

2. Аппарат Киппа — замена воздуха индифферентным газом (водородом).

3. Среда Китт-Тароцци — содержит кусочки печени, обладающие высокой адсорбционной способностью, 0.5% глюкозы. Перед посевом среду кипятят на водяной бане не менее 15 минут, сверху заливают слоем вазелиного масла, чтобы предохранить посев от проникновения кислорода,

Химические методы

1. Прибор Омелянского — для поглощения кислорода используется пирогаллол.

2. Среда Вильсон — Блера. Содержит глюкозу, сернисто-кислый натрий, хлорид железа. Анаэробы образуют черные колонии за счет восстановления сернисто-кислого натрия в сернистый натрий, который, соединяясь с хлоридом железа, образуют осадок черного цвета -сернистое железо.

Биологический метод Фортнера

Чашку Петри с толстым слоем агара делят на 2 половины на одну половину засевают облигатный аэроб — «чудесную» палочку, на другую половину чашки засевают исследуемую анаэробную культуру. Чашку заливают растопленным парафином. Через 24 — 48 часов в чашке вырастают аэробы, затем, когда запас кислорода исчерпывается, начинают размножаться анаэробы.

Среды Кита-Тароцци. Вильсон-Блэра, Цейсслера, Виллиса-Хоббс.Состав.

-Китта-Тароцци: жидкая питательная среда для культивирования анаэробных микроорганизмов, состоящая из мясопептонного бульона, обогащенного экстрактивными продуктами печени животных и содержащего кусочки вываренной печени в качестве поглотителя свободного кислорода.

- Вильсона-Блэра: плотная селективная питательная среда для анаэробных бактерий, содержащая сернистокислый натрий и хлорное железо; анаэробные бактерии образуют колонии черного цвета в результате образования сернистого железа.

- Цейсслера: плотная питательная среда для культивирования анаэробов, содержащая мясопептонный агар, глюкозу и кровь.

- Виллиса-Хоббс: содержит кроме питательного агара, лактозу, индикатор, яичный желток и обезжиренное молоко.

К каким таксономическим группам относятся патогенные анаэробы.

1.спорообразующие(clostridium)

2.не спорообразующие ( dfcteroides.Fusobacterium.Porphyromonas.Selenomonas.Prevotella).

Грамм+, не образующие спор: Bifidobacterium. Lactobacillus.

Грамм+: Micrococaccae.Streptococaccae.

Грам-: родVeolinella класс Clostridia)

К строгим анаэробам относятся метанобразующие( Methanobacteriacae) и др.

Что входит в понятие « неклостридиальная анаэробная микрофлора»?

- оппортунистическая инфекция, вызываемая различными видами грамположительных и грамотрицательных анаэробных бактерий разных таксономических групп и хар-ся серозно-гнойным, гнойным или гнойно-некротическим воспалением тканей с тенденцией к прогрессирующему распространению и септическому течению.Представители неклостридиальной анаэробной инфекции являются возбудителями одонтогенных воспалительных процессов – пульпитов, периодонтитов, абсцессов, флегмон, остеомиелитов.

Особенности эпидемиологии и патогенеза неклостридиальной инфекции.

Эпидемиология столбняка.

Заражение от больного человека не происходит.

Естественный резервуар и источник столбняка — почва. Заражение человека – травмы, раны(анаэробиоз). Стодбняк новорожденных-при попадании через пупочный канатик С.tetani.

Эпидемиология дифтерии.

Источник заражения – человек, выздоравливающий или бактерионоситель.

Пути заражения: воздушно-капельный, возд-пылевой, конт-бытовой, алиментраный путь.

Больной заразен в течении всего периода болезн и части периода выздоровления. Средний срок бактериаоносительства-2-7 днея, но иногда продолжается до 3 месяцев.

Здоровые бактерионосители основные распространители, средняя продолжительности (2 месяца).

Патогенез дифтерии

Возбудитель проникает в орг-м через слизистые оболочки различных органом и поврежденные поверхности. При клинически выраженной форме дифтерии в месте локализации возбудителя развивается характерное фибринозное воспаление слизистой. Токсин поражает сначала эпиетелиальные клетки, затем кровеносные сосуды, повышая их проницаемость. В выходящем экссудате содержится фибриноген, свертывание которого приводит к образованию на пов-ти слизистой серовато-белого цвета пленчатых налетов, которые плотно с ней спаяны и при отрыве вызывают кровотечения.

Попадая в кровь вызывает общую глубокую интоксикацию. Поражает: сердечно-сосуд, симпатико-адреналовую, периферические вены. Леальность: 3-6%.

Эпидемиология туберкулеза

Резервуар возбудителя туберкулёза — больной человек; основной путь заражения — аэрогенный, реже через кожу и слизистые оболочки. Проникновение возбудителя не всегда вызывает развитие заболевания; огромную роль играют неблагоприятные условия жизни и трудовой деятельности.

Патогенез туберкулеза

Туберкулез является инфекционным заболеванием и, соответственно, подчиняется законам эпидемиологии. Составными звеньями эпидемического процесса являются:

· Источник инфекции

· Механизм передачи инфекции

· Восприимчивость к ней населения

Источник инфекции – больной-бактериовыделитель.

Пути проникновения:

· аэрогенный

· энтеральный

· через поврежденную кожу и слизистые

· трансплацентарный

Восприимчивость населения: заражение организма МБТ далеко не всегда приводит к заболеванию, хотя без заражения заболевание невозможно. В течение жизни подавляющее большинство людей инфицируется МБТ, но только 7-10% заболевает туберкулезом. МБТ могут в течение многих лет находиться в организме, не вызывая болезни, и в тоже время остаются высоковирулентными для организма. Исход инфекции зависит не только от вирулентности и массивности инфекции, но в более значительной мере от иммунобиологического и функционального состояния инфицированного организма. Человек обладает относительно высокой степенью устойчивости к туберкулезной инфекции, т. е. имеет врожденную естественную резистентность, которая может быть повышена за счет приобретенного иммунитета (путем естественного заражения или искусственной иммунизации).

Определенную защитную роль при аэрогенном заражении имеет система мукоцилиарного клиренса, при энтеральном заражении – всасывающая функция кишечника, а также другие факторы неспецифической защиты (естественная резистентность).

Этапы развития туберкулезного процесса:

I период – первичный туберкулез

1. Доаллергическая стадия (латентный микробизм)

2. Аллергическая стадия (вираж, возможна туберкулезная интоксикация)

3. Морфологическая (анатомическая) стадия (ПТК, ТВГЛУ)

II период – вторичный туберкулез (клинические формы вторичного туберкулеза).