Количественное определение балантидий в 1 мл материала

 

Число баланти-дий в 0, 02 мл	Объем материала, взятого для исследования, мл
0, 1	0, 2	0, 3	0, 4	0, 5	0, 6	0, 7	0, 8	0, 9	1, 0

 

ДИАГНОСТИКА ГЕЛЬМИНТОЗОВ ЖИВОТНЫХ

Диагноз на гельминтозы ставят на основании комплекса исследований — эпизоотологических, клинических, патологоанатомических и др. При этом проводят исследование крови, экстирпированных кусочков мышц, связок, сухожилий, кожи, проб фекалий, мочи, содержимого и соскобов слизистой желудка и т. д. Исследуют их с целью обнаружения яиц, личинок или взрослых гельминтов.

Необходимо знать, что по количеству яиц или личинок гельминтов в исследуемой пробе материала или по отсутствию их не всегда можно точно судить об экстенсивности и интенсивности инвазии. Например, нет четкой зависимости между количеством яиц и личинок стронгилят в пробах фекалий и взрослых нематод в желудочно-кишечном тракте и легких жвачных (J. Р. Rаunaud, 1974). Гельминтоовоскопическое исследование фекалий и послеубойный осмотр печени коров на фасциолез совпадают лишь у 50 % обследованных животных (Г. А. Котельников, 1984).

Можно привести много примеров, когда у одних животных обнаруживают мало яиц и личинок в фекалиях и много взрослых гельминтов в организме, и наоборот, что объясняется рядом причин — возрастом животных, их физиологическим состоянием, кормлением, содержанием, сезоном года и т. д.

Прижизненная диагностика гельминтозов

Прижизненную диагностику гельминтозов проводят с применением эпизоотологических, клинических, лабораторных и других методов исследований. Эпизоотологическими исследованиями определяется степень распространения паразитозов, возрастные и сезонные особенности проявления их, уровень экстенс- и интенсинвазированности животных гельминтами. Клиническим обследованием животных определяют форму течения гельминтозов (клиническое или субклиническое), острое, подострое или хроническое проявление и т. д. Лабораторные методы предполагают использование гельминтокопроскопических методов исследований, которые направлены на обнаружение в фекалиях животных яиц гельминтов (гельминтоовоскопия), их личинок (гельминтолярвоскопия), половозрелых паразитов или их фрагментов (гельминтоскопия).

 

Оборудование для гельминтокопроскопических

исследований

1. Микроскопы биологические (МБИ) или стереоскопические (МБС), лупы. 2. Чашки Петри, предметные стекла, часовые стекла, стаканчики с диаметром вверху 4— 5 см, стеклянные палочки, воронки, глазные пипетки, центрифужные пробирки, кюветы, штативы, ведра. 3. Центрифуги лабораторные (ОПн-3 и др.) с частотой вращения пробиркодержателя 1000, 1500 и 3000 об/мин. 4. Денсиметры. 5. Аппарат Бермана. 6. Фильтрационные ситечки, металлические петли с диаметром кольца 8— 10 мм. 7. Газовые горелки или спиртовки. 8. Флотационные растворы, молочная кислота, глицерин, гидрофильный целлофан.

 

Флотационные растворы и способы их применения

Раствор нитрата аммония (NH₄NO₃) — на 1 л горячей воды добавляют 1, 5 кг гранулированной или обычной аммиачной селитры. Плотность раствора нитрата аммония должна быть 1, 5.

Раствор нитрата натрия (NaNОз) готовят путем добавления на 1 л воды 1 кг азотно-кислого натрия и плотность доводят до 1, 38—1, 40.

Раствор сульфата цинка (ZnSO ₄ ·7H₂O) готовят с плотностью 1, 24 путем добавления к 1 л воды 0, 4 кг серно-кислого цинка.

Раствор гипосульфита натрия (Na₂S₂O₃ ·5H₂O) с плотностью 1, 4 готовят путем добавления к 1 л воды 1, 75 кг вещества.

Раствор хлористого натрия (NаСl) применяют с плотностью 1, 18—1, 20. Для этого в емкость с кипящей водой добавляют небольшими порциями соль из расчета 0, 4 кг ее на 1 л воды. Для приготовления насыщенного раствора на дне емкости должны оставаться кристаллы соли.

Раствор сульфата магния (МgSO₄) с плотностью 1, 26—1, 28 готовят путем добавления на 1 л воды 0, 92 кг соли.

Взятие и доставка в лабораторию проб фекалий животных

Пробы фекалий берут рукой, одетой в тонкую резиновую перчатку, из прямой кишки животных. Допускается отбор проб из только что выделившихся фекалий при испражнении животных. Однако надо следить, чтобы пробы отбирались из верхней части экскрементов, не соприкасавшихся с полом или землей. У мелких животных пробы фекалий берут указательным и средним пальцами. Масса пробы должна быть не менее 8—10 г. После этого тщательно моют руки с мылом.

При обследовании животных на гельминтозы пробы берут от 10 % поголовья, но не менее чем от 25-30 голов.

На отобранные пробы составляется опись и сопроводительное письмо по установленной форме и они отправляются в ветеринарную лабораторию для исследований. Пробы фекалий в ветеринарную лабораторию необходимо доставлять в целлофановых мешочках, в стеклянных банках или завернутыми в пергаментную бумагу. Они должны быть не более как суточной давности, а при исследовании на диктиокаулез и стронгилоидоз - не более 3-4-часовой давности.

Если нет возможности своевременно доставить пробы в лабораторию для исследований, то их консервируют. Для этой цели применяют физические и химические методы консервации.

Из физических методов наиболее простым является воздействие пониженной температуры. Для этой цели используют холодильник, в котором при температуре +2-4°С развитие личинок гельминтов задерживается.

Для консервирования с помощью химических методов применяют различные средства.

1. Жидкость Барбагалло (смесь 3%-ного формалина и физиологического раствора). Помещение проб фекалий в эту жидкость позволяет сохранить их до 2 недель.

2. Смесь формалина (5 мл), глицерина (5 мл) и воды (100 мл).

3. Смесь 0, 2%-ного азотно-кислого натрия (1900 мл), 250 мл раствора Люголя, 300 мл формалина и 25 мл глицерина.

4. Растворы различных моющих средств. Применяют 1%-ный раствор гранулированного порошка «Лотос» (соотношение с фекалиями должно быть 5: 1), 1, 5%-ный порошок «Экстра» и др. В таких растворах яйца гельминтов сохраняются до 2 недель (Г. А. Котельников, 1984).

ГЕЛЬМИНТООВОСКОПИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ

ГЕЛЬМИНТОЗОВ

Гельминтоовоскопия — это группа методов исследований, основанных на разнице удельной массы яиц гельминтов и жидкой среды. При использовании гельминтоовоскопии применяют флотационные или седиментационные способы, или их комбинации.

В процессе гельминтоовоскопии важным является соблюдение определенных стандартов. Считается, что на результаты исследования (независимо от его метода) влияют: величина массы пробы фекалий, время флотации или седиментации, размер ячеек фильтрационной сетки, диаметр кольца петли, форма, высота и объем стаканчиков и другие факторы (Г. А. Котельников, В. М. Хренов, 1984).

В связи с этим во Всероссийском институте гельминтологии им. академика К.И. Скрябина отработаны параметры, соблюдение которых позволяет получить наиболее объективные результаты. Вот перечень некоторых из них.

1. Масса пробы фекалий при применении методов флотации, седиментации или их комбинаций должна составлять 3 г.

2. Соотношение массы фекалий к раствору должно быть 3: 50.

3. Лучшие результаты исследований получают при применении раствора аммиачной селитры (плотность 1, 3) через 10—15 мин от начала флотации.

4. Более точные результаты исследований при флотации получают с использованием стеклянных мензурок объемом 50 мл, с применением проволочной петли для снятия яиц с поверхности раствора с диаметром кольца 8—10 мм при исследовании не менее 3 капель поверхности взвеси пробы.

Методы флотации

Метод Ф. Фюллеборна — один из наиболее распространенных методов диагностики гельминтозов. Он заключается в том, что в стакане емкостью 200 мл размешивают 8—10 г свежих фекалий животных с 20-кратным объемом насыщенного раствора хлорида натрия. После тщательного размешивания взвесь фильтруют через металлическое или капроновое ситечко (можно через марлю) в другой чистый стакан емкостью 100 мл и оставляют на 45—60 мин. Затем проволочной петлей с поверхности взвеси стакана берут 3—6 капель н наносят на хорошо обезжиренное предметное стекло, покрывают покровным стеклом и исследуют под микроскопом. После каждого исследования стаканы, стекла и стеклянные палочки моют, стекла обезжиривают, а металлические петли обжигают на пламени спиртовки или газовой горелки, что предупреждает перенос яиц паразитов из одной пробы в другую.

В связи с тем, что плотность насыщенного раствора поваренной соли составляет 1, 18—1, 20, этим методом выделяется только часть яиц нематод, так как плотность яиц трихоцефал составляет 1, 16—1, 22, неоплодотворенных яиц аскарид— 1, 26.

Метод флотации с аммиачной селитрой по Г. А. Котельникову и В. М. Хренову — один из наиболее эффективных методов диагностики аскаридатозов, трихоцефалезов, стронгилятозов, мониезиозов, стронгилоидозов, эймериозов и других паразитозов сельскохозяйственных и домашних животных.

Суть метода состоит в том, что пробу фекалий массой 3 г кладут в стаканчик, добавляют раствор аммиачной селитры плотностью 1, 3 и тщательно размешивают стеклянной палочкой. Затем раствор соли порциями доливают до 50 мл. Полученную взвесь фильтруют через металлическое или капроновое ситечко в другой стаканчик и дают отстояться в течение 10 мин. При диагностике стронгилятозов достаточно, чтобы взвесь отстоялась в течение 3—5 мин. После этого металлической петлей с поверхности взвеси снимают 3—6 капель с разных мест и переносят их на предметное стекло. Исследование проводят при малом увеличении микроскопа сразу же после нанесения капель на предметное стекло, так как со временем в каплях образуются кристаллы аммиачной селитры, что затрудняет просмотр препарата.

Метод флотации с аммиачной селитрой и с центрифугированием нашел широкое применение в научной и практической работе ветеринарных специалистов Беларуси. Он отличается высокой эффективностью при диагностике ряда цестодозов, аскаридатозов, стронгилятозов, эймериозов и других паразитозов животных.

Пробу фекалий массой 3 г в стаканчике размешивают с 50 мл раствора аммиачной селитры плотностью 1, 3. Полученную взвесь фильтруют через металлическое или капроновое ситечко с диаметром ячеек 0, 5х0, 5 мм в пробирку и центрифугируют 2 мин со скоростью 1500 об/мин. Затем металлической петлей с поверхности взвеси в пробирке снимают 3—6 капель и микроскопируют.

Поверхностный слой в центрифужной пробирке можно снять и таким способом. Если пробирка заполнена взвесью до краев, ее покрывают покровным стеклом, чтобы поверхность взвеси в пробирке прикоснулась к предметному стеклу. Через несколько минут предметное стекло снимают и микроскопируют.

Метод флотации с применением натриевой селитры считается высокоэффективным при применении раствора с плотностью 1, 38—1, 40 для диагностики аскаридатозов, стронгилятозов, трихоцефалезов, стронгилоидозов, эймериозов и других паразитозов.

Технически исследования проводятся так же, как и методом флотации с применением аммиачной селитры. Капли с поверхности стаканчика или центрифужной пробирки можно снимать через 8—10 мин для проведения исследований.

Метод Дарлинга состоит в том, что берут пробу свежих фекалий массой 5 г, смешивают в стакане с водой в соотношении 1: 10, через ситечко процеживают в пробирку, центрифугируют 2 мин при скорости 1500 об/мин. Надосадочную жидкость сливают, а к осадку добавляют в равных частях глицерин и насыщенный раствор хлористого натрия. Чистой стеклянной палочкой взвесь тщательно размешивают и повторно центрифугируют. При наличии в пробе фекалий яиц гельминтов они всплывают на поверхность жидкости в центрифужной пробирке. Проволочной петлей берут 3—6 капель с поверхности взвеси, наносят на предметное стекло и микроскопируют.

Метод И. А. Щербовича предполагает в качестве флотационного раствора применять насыщенный раствор сульфата магния. Пробу фекалий из 3—5 г помещают в стаканчик и размешивают в воде в соотношении 1: 10, отстаивают 5 мин, сливают, оставляя 10 мл осадка. Взвесь фильтруют в пробирку, центрифугируют в течение 2 минут со скоростью 1500 об/мин. Надосадочную жидкость сливают, а к осадку добавляют насыщенный раствор сульфата магния и повторно центрифугируют. После этого с поверхностного слоя жидкости в пробирке проволочной петлей снимают 3—6 капель, помещают на предметное стекло и микроскопируют. Диагностируют аскаридатозы, стронгилятозы, эймериозы и другие паразитозы.

Метод флотации с использованием гипосульфита натрия с плотностью 1, 4 в обычном исполнении (как и с аммиачной селитрой) применяется для диагностики ряда нематодозов жвачных и свиней, эймериозов. Время флотации 10 мин.

Метод В. Н. Трача предназначен для количественного подсчета яиц гельминтов. Для этого пробу фекалий (крупного рогатого скота и свиней — 5 г, мелких жвачных — 2, 5 г) помещают в стаканчик диаметром 5 см и емкостью 100 мл. Периодически помешивая, в стаканчик наливают раствор аммиачной селитры плотностью 1, 3. Взвесь отстаивают и через 45 мин с ее поверхности металлической петлей диаметром 5 мм берут (с центра и периферии стаканчика) 5 капель, переносят на предметное стекло и микроскопируют. Подсчитывают все яйца гельминтов в 5 каплях взвеси. Затем определяют количество яиц паразитов в одной капле. Для определения количества яиц в пробе площадь поверхности стаканчика делят на площадь петли и умножают на количество яиц в одной капле. Полученное число делят на массу фекалий в пробе и определяют количество яиц паразитов в 1 г фекалий.

Методы седиментации

Эти методы основаны на принципе осаждения взвешенных яиц гельминтов, промывания осадка и его исследования.

Метод последовательных промываний состоит в том, что 3 г свежих фекалий кладут в стаканчик (100 мл) и тщательно размешивают с водой, доводя объем до 50 мл. Полученную смесь фильтруют через металлическое или капроновое ситечко, отстаивают в течение 10 мин. Надосадочную жидкость осторожно сливают, оставляя в стакане 3—5 мл осадка и к нему добавляют опять 50— 70 мл воды, снова отстаивают и сливают надосадочную жидкость. Так повторяют несколько раз, пока надосадочная жидкость не станет прозрачной. Затем ее сливают, осадок выливают на предметное стекло (или чашку Петри) и микроскопируют.

Этим методом можно диагностировать фасциолез, парамфистоматидозы, дикроцелиоз и другие гельминтозы.

Флотационно-седиментационный метод Н. В. Демидова применяют для диагностики фасциолеза. Для этого от крупного рогатого скота берут пробу фекалий массой 5 г (от овец - 3 г), помещают ее в стакан емкостью 200 мл, при постоянном помешивании доливают 200 мл насыщенного раствора хлористого натрия и отстаивают 20 мин. Металлической сеточкой удаляют с поверхности взвеси крупные частицы. Надосадочную жидкость сливают или отсасывают спринцовкой, оставляя на дне 25-30 мл ее. Затем оставшийся осадок размешивают стеклянной палочкой, фильтруют в чистый стакан через металлическое сито или марлю и отстаивают 5 мин. После этого надосадочную жидкость отсасывают спринцовкой, оставшиеся 15-20 мл осадка переливают в конические стаканы, отстаивают 5 минут, надосадочную жидкость сливают и осадок опять промывают. Так повторяют несколько раз, потом осадок помещают на предметное стекло и микроскопируют.

Метод седиментации с целлофановыми пленками по Г. А. Котельникову и В. М. Хренову. Вначале заготовляют целлофановые пленки. Для этого из гидрофильного целлофана толщиной 22 мкм нарезают прямоугольные кусочки размером 2х3 см и помещают их на 24 ч в чашку Петри, содержащую 50%-ный раствор молочной кислоты (можно глицерина). На 500 целлофановых пленок необходимо иметь 100 мл раствора молочной кислоты.

После подготовки целлофановых пленок берут пробу фекалий массой 2 г и размешивают их в стаканчике с небольшим количеством воды. Взвесь фильтруют через металлическое ситечко в другой чистый стакан емкостью 50 мл, отстаивают в течение 5 мин, сливают надосадочную жидкость, а к осадку добавляют 35-40 мл водопроводной воды, опять отстаивают 5 мин, надосадочную жидкость сливают, осадок переносят на предметное стекло и покрывают целлофановой пленкой. Через 8-10 минут проводят микроскопирование препарата. Метод применяется для диагностики фасциолеза, парамфистоматидозов, аскаридатозов, трихоцефалезов и других паразитозов животных.

Метод А. Ю. Вишняускаса применяется для диагностики фасциолеза, парамфистоматидозов, трихоцефалезов, мониезиоза и стронгилятозов желудочно-кишечного тракта.

Суть метода состоит в том, что берут 3 г фекалий крупного рогатого скота (или 1 г фекалий мелких жвачных), помещают в ступку, добавляют 45-50 мл воды и размешивают. Полученную взвесь фильтруют через металлическое или капроновое сито в мерный стакан или мензурку емкостью 100 мл. Ступку и сито прополаскивают водой и доводят объем взвеси до 100 мл, отстаивают 5 мин. Затем верхний слой осторожно сливают (или отсасывают с помощью груши) с таким расчетом, чтобы на дне стакана осталось 20 мл взвеси с осадком. Осадок аналогичным образом еще раз промывают водой, отстаивают и надосадочную жидкость сливают, оставляя в стакане 10 мл осадка с жидкостью. Для дальнейшего исследования необходимо иметь центрифужные пробирки (10 мл) с шлифованными краями. В такую пробирку наливают оставшиеся в стакане 10 мл жидкости с осадком и центрифугируют 1-2 минуты со скоростью 1500 об/мин. Затем верхний слой жидкости сливают, а к осадку добавляют раствор сульфата цинка (ZnSO₄ ·7H₂O) с плотностью 1, 24. Мениск жидкости должен быть выше краев центрифужной пробирки. После этого центрифужную пробирку покрывают покровным стеклом таким образом, чтобы жидкость полностью с ним соприкасалась. Затем центрифугируют в течение 0, 5-1 минут со скоростью 1500 об/мин. Всплывшие при этом яйца гельминтов прилипают к покровному стеклу, которое снимают с пробирки, помещают на предметное стекло и микроскопируют.

Метод Я. Д. Никольского состоит в том, что в стаканчик емкостью 100 мл наливают 20 мл водопроводной воды и помещают туда 8—10 г фекалий овец. Если в стаканчиках свежие фекалии, их встряхивают через 5 мин, если подсохшие - через 15 минут. Вслед за этим жидкость из стаканчиков сливают в серологические пробирки, отстаивают ее в течение 2 часов, а фекалии выбрасывают. Затем жидкость из пробирок отсасывают грушей с длинным наконечником, а осадок наносят на стекло и микроскопируют. Этот метод применяют для диагностики мониезиоза овец.

Метод С. Ф. Пауликони применяют для диагностики фасциолеза. В принципе это метод последовательных промываний, при котором 5 г фекалий крупного рогатого скота помещают в конусовидной формы цилиндр объемом 250 мл и диаметром в нижней части 3 см. К пробе фекалий при постоянном помешивании добавляют 200 мл водопроводной воды и отстаивают 5 минут. Промывание повторяют еще три раза, причем второй, третий и четвертый периоды отстаивания взвеси длятся соответственно 5, 4 и 3 мин. Жидкость из цилиндра отсасывают спринцовкой, оставляя на дне 0, 5 см осадка, который после промывания помещают на предметное стекло (желательно градуированное на квадраты) и подсчитывают количество яиц фасциол для определения интенсивности

инвазии. При этом используют формулу:

 

где а - количество осадка, мл; б — количество обнаруженных яиц фасциол, шт.; в—количество взятых для исследования фекалий, мл; г — количество исследованного осадка, мл; х—число яиц фасциол в 1 мл фекалий.

Комбинированный метод с раствором аммиачной селитры по Г. А. Котельникову и В. М. Хренову состоит в том, что берут пробу фекалий массой 3 г, помещают в стаканчики емкостью 50 мл и хорошо размешивают с водой. Полученную взвесь фильтруют в стаканчик, отстаивают, сливают, а осадок в количестве 10 мл помещают в пробирки и центрифугируют 2 минуты со скоростью 1500 об/мин. После удаления надосадочной жидкости к осадку добавляют раствор аммиачной селитры, размешивают стеклянной палочкой (после каждой пробы ее надо тщательно промывать) и повторно центрифугируют в течение 2 мин при указанной скорости. После этого с поверхности жидкости пробирки металлической петлей снимают 3-6 капель взвеси, помещают их на обезжиренное предметное стекло и микроскопируют. Оставлять предметное стекло с каплями взвеси на какое-либо время не следует, так как аммиачная селитра быстро образует кристаллы, что мешает просматривать препарат.

Этот метод эффективен для диагностики аскаридатозов, трихоцефалезов, метастронгилеза, стронгилоидозов, стронгилятозов желудочно-кишечного тракта, тениидозов и эймериозов.

Овоскопия нативных препаратов по К. Като. Перед проведением диагностических исследований готовят целлофановые полоски размером 8, 2 см². Их готовят из гидрофильного целлофана путем погружения в специальную смесь следующего состава: к 500 мл 6%-ного раствора карболовой кислоты добавляют 6 мл 3%-ного водного раствора малахитовой зелени и 500 мл глицерина. На 1000 целлофановых пленок расходуется 200 мл указанной смеси. Срок подготовки полосок составляет 24 ч.

Суть метода К. Като состоит в том, что на обезжиренное предметное стекло наносят 0, 1 г свежих фекалий, покрывают целлофановой полоской и придавливают. Препарат микроскопируют в течение часа после приготовления, а в теплое время года через 30—40 минут. Методику К. Като можно применять для диагностики аскаридиоза, гетеракидоза и капилляриоза птиц. Эффективность ее при гельминтозах свиней ниже, чем метода флотации. Для диагностики гельминтозов жвачных ее применять нецелесообразно (Г. А. Котельников, В. М. Хренов, 1984).

Метод Столла. Он заключается в том, что в градуированный цилиндр наливают 0, 56 мл раствора едкого натрия, который готовят путем добавления к 1 л воды 4 г щелочи. Затем в цилиндр вносят 4 см³ свежих фекалий и 10 стеклянных дробинок диаметром 3 мм. Цилиндр закрывают пробкой, взбалтывают в течение 2 мин, а затем сразу же отбирают 0, 15 мл взвеси (в которой содержится 0, 01 см³ фекалий) и помещают на предметное стекло в виде двух капель. Их покрывают стеклами и подсчитывают под микроскопом количество яиц в обеих каплях и умножают на 100. Полученное число определяет количество яиц гельминтов в 1 см³ фекалий.

 

 

ГЕЛЬМИНТОЛЯРВОСКОПИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ

ДИАГНОСТИКИ ГЕЛЬМИНТОЗОВ

Гельминтолярвоскопические методы диагностики применяются для обнаружения в исследуемых объектах (фекалиях, почве, траве, измельченных органах и тканях и др.) личинок нематод.Их применяют для диагностики диктиокаулезов, стронгилоидозов, протостронгилидозов и других гельминтозов животных.

Метод Бермана наиболее часто используют для диагностики диктиокаулезов, стронгилоидозов и других нематодозов животных. Он прост по технике постановки и состоит в том, что пробы свежих фекалий помещают завернутыми в марлю или на металлическую сетку в воронки специально оборудованного аппарата Бермана, в которые до этого наливают воду комнатной температуры. Фекалии мелких жвачных оставляют в воронках на 4-6 ч, крупного рогатого скота и лошадей—на 10-12 ч. За этот период личинки гельминтов выходят из фекалий и оседают на дне пробирок, соединенных с воронкой резиновой трубочкой. По истечении указанного срока пробирки осторожно отделяют от резиновой трубки, жидкость в пробирке аккуратно сливают или отсасывают пипеткой, а осадок помещают на предметное стекло и микроскопируют.

Метод Вайда используется для диагностики диктиокаулеза, мюллериоза и других нематодозов мелких жвачных. Для этой цели на часовое стекло (можно в чашку Петри) помещают 3-5 шариков фекалий и увлажняют их небольшим количеством теплой (38-40°С) воды. Через 20-30 минут фекалии удаляют, а оставшуюся жидкость микроскопируют для выявления личинок гельминтов. Метод Вайда можно успешно применять в полевых условиях для диагностики диктиокаулеза непосредственно на фермах с использованием обычных предметных стекол и дорожного микроскопа.

Метод Бермана в модификации И. А. Щербовича применяется для диагностики диктиокаулеза животных. Для этого пробу фекалий массой 8—10 г помещают на кусочек марли, концы которой закручивают проволокой и подвешивают в стакан с водой при температуре 32-35°С. Пробы фекалий мелких жвачных и лошадей выдерживают в течение 3 ч, крупного рогатого скота - 12 ч. Затем пробы фекалий из стаканов извлекают, воду осторожно сливают, а осадок помещают в пробирку и центрифугируют в течение 1 минуты со скоростью 1000 об/мин. Надосадочную жидкость в пробирке сливают, а осадок кладут на предметное стекло и микроскопируют.

Экспресс-метод принудительной седиментации по Г. А. Котельникову, А. И. Корчагину и В. М. Хренову используется для диагностики диктиокаулеза и протостронгилидоза мелких жвачных. Для этого пробу фекалий овец или коз массой 3-5 г помещают в пробирку с теплой водой (26-28°С) и центрифугируют в течение 2 минут со скоростью 1500 об/мин. После этого пробы фекалий из пробирок удаляют, надосадочную жидкость осторожно сливают, а осадок после встряхивания помещают на предметное стекло и микроскопируют. Авторы сообщают о высокой (до 100 %) эффективности метода для выявления диктиокаул и мюллерий в фекалиях овец и коз.

Избирательный экспресс-метод диагностики диктиокаулеза мелких жвачных по Г. А. Котельникову и В. М. Хренову применяется для быстрого выделения из проб фекалий диктиокаул. Для этого пробу фекалий массой 5 г помещают в стаканчики с раствором сульфата цинка и в течение 2 мин их разгоняют по кругу стеклянной палочкой. Через 5—10 минут пробы удаляют из стакана пинцетом, а жидкость оставляют в покое на 10—15 минут. После этого металлической петлей диаметром 8 мм с поверхности жидкости снимают 6 капель, помещают их на предметное стекло и микроскопируют. При этом следует помнить, что личинки диктиокаул сохраняют подвижность в растворе серно-кислого цинка в течение 3 ч, личинки стронгилят желудочно-кишечного тракта, а также стронгилоиды—1-2 мин. Личинки мюллерий свертываются в клубочки и внешне напоминают пузырьки воздуха.

При отборе и отправке в ветеринарную лабораторию проб фекалий от жвачных в данном случае необходимо помнить, что исследования надо проводить в день взятия проб, так как уже при температуре свыше 20°С в фекалиях через 14-17 ч могут развиться личинки стронгилят желудочно-кишечного тракта, что затруднит диагностику.

Для дифференциации личинок диктиокаул овец предложена методика окраски, для чего к осадку добавляют 1-2 капли 0, 1%-ного водного раствора метиленового синего. Через 30 с при микроскопировании можно видеть личинок диктиокаул, окрашенных в ярко-сиреневый цвет, личинки диктиокаул крупного рогатого скота — в светло-сиреневый, а личинки других нематод не окрашиваются (Г. А. Котельников, 1984).

Культивирование личинок стронгилят заключается в том, чтобы для яиц этих гельминтов создать такие оптимальные условия, чтобы они могли вырасти до инвазионной стадии. По особенностям структуры личинок определяют родовую принадлежность их (табл. 11).

Культивирование личинок стронгилят жвачных по методу А. М. Петрова и В. Г. Гагарина (1953) состоит в том, что в стаканчики или в чашки Петри кладут по 10 г свежих фекалий жвачных, увлажняют и помещают в термостат на 7-10 дней при температуре 27-30°С. Ежедневно фекалии перемешивают (с целью аэрации) и при необходимости увлажняют. После указанного срока пробы фекалий закладывают в аппарат Бермана, получают личинки стронгилят, помещают их на предметное стекло и микроскопируют с целью дифференциальной диагностики.

В лаборатории паразитологии БелНИИЭВ им.С.Н.Вышелесского (Т.Я.Мясцова, 1980) с целью лучшей аэрации разработана методика культивирования личинок стронгилят в фекалиях с добавлением в них прокаленных древесных опилок. Соотношение фекалий к опилкам составляет 3: 1—5: 1. Остальной режим культивирования личинок стронгилят сохраняется таким же, как описано выше.

Культивирование личинок стронгилят лошадей по П. А. Величкину. В стаканы емкостью 100 мл помещают по 50 г свежих фекалий лошадей и ставят их в термостат при температуре 25-27°С. Стаканы сверху обвязывают чистым бинтом, марлей или плотной бумагой, в которой делают небольшие отверстия для аэрации. Срок культивирования личинок 6—7 дней. При культивировании личинок при комнатной температуре (20-22°С) они достигают третьего возраста через 9-10 дней. При температуре ниже 8°С развитие их не происходит. При необходимости фекалии увлажняют и периодически перемешивают.

Таблица 11 Определение инвазионных личинок стронгилят пищеварительного тракта и легких жвачных (по П. А. Полякову)

1/16 — Кишечник личинок дифференцирован на отдельные клетки — инвазионные личинки стронгилят пищеварительного тракта, кроме личинок Вunostomum.

2/3 — Клетки кишечника расположены в один ряд. Клеток 8, форма их трапециевидная. Личинки крупные (1, 2—2 мм длиной), с длинным (0, 3—0, 37 мм) нитевидно истончающимся хвостовым концом чехлика. Хвостовой конец тела короткий (0, 5 мм) и оканчивается тремя «шипиками».

3/2 — Клетки кишечника расположены в два ряда.

4/13 — Клетки кишечника имеют форму остроконечных треугольников.

5/12 — Кишечник имеет 16 клеток.

6/7 — Хвостовой конец тела личинки оканчивается «шипиком». Пищевой сравнительно длинный и составляет около 1/4 части длины личинки. Относительно малые личинки (0, 65— 0, 77 мм длины). Хвостовой конец чехлика короткий (0, 08— 0, 1 мм). Экскреторное отверстие отстоит от кишечника на расстоянии 1/3 (и более) длины пищевода— Trichostrongylus.

7/6 — Хвостовой конец тела личинки «шипика» не имеет. Пищевод составляет лишь около 1/5 части всей длины личинки.

8/9 — Две последние клетки кишечника оканчиваются в одном пункте и на одинаковом от ануса расстоянии. Относительно малые личинки (0, 7—0, 8 мм длиной) с довольно длинным (0, 15—0, 17 мм) нитевидно оканчивающимся хвостовым концом чехлика. Пищевод относительно короткий (0, 15—0, 16 мм). Две последние клетки кишечника не равной длины, не треугольной, а округло-веретенообразной формы и оканчиваются в одном пункте. Экскреторный канал лежит наискось, его отверстие отстоит от кишечника более чем на 1/3 длины пищевода—Нaemonchus.

9/8 — Кишечник заканчивается одной треугольной формы клеткой.

10/11 — Хвостовой конец чехлика относительно короткий (0, 12— 0, 14 мм), без нитевидного истончения. Личинки крупные — 0, 83—0, 95 мм. Половой зачаток расположен ближе к пищеводу, чем к анусу. Экскреторное отверстие отстоит от кишечника на расстоянии менее 1/3 длины пищевода — Ostertagia.

11/10 — Хвостовой конец чехлика относительно длинный (0, 16— 0, 18 мм). Половой зачаток расположен ближе к анусу, чем к пищеводу. Встречаются преимущественно в фекалиях крупного рогатого скота — Соoреriа.

12/5 — Кишечник имеет 20 клеток. Личинки 0, 75—0, 9 мм длиной с длинным (0, 23—0, 28 мм) нитевидно истонченным хвостовым концом чехлика. Встречаются преимущественно в фекалиях крупного рогатого скота — Оеsорhagostomun radiatum, Oe.columbianum.

13/4 — Кишечник имеет 32 клетки формы округлых кирпичиков.

14/15 — Нитевидный хвостовой конец чехлика длинный (0, 23— 0, 28 мм) и составляет около 1/3 части всей длины личинки. Личинка 0, 75—0, 9 мм длиной, 0, 024—0, 029 мм шириной. Встречаются преимущественно в фекалиях овец и коз — Oe.venulosum, Oe.asperum.

15/14 — Нитевидный хвостовой конец чехлика 0, 17—0, 27 мм длиной и составляет около 1/4 части всей длины личинки. Личинка 0, 71—0, 88 мм длиной, 0, 028—0, 032 мм шириной— Chabertia ovina.

16/1 — Кишечник личинок не дифференцирован на отдельные клетки и представлен сплошной гомогенной зернистой массой — личинки легочных стронгилят, а также инвазионные личинки — Bunostomun, Strongyloides.

17/22 — Личинки в чехликах.

18/19 — Личинки с длинным нитевидным хвостовым концом чехлика 0, 52—0, 63 мм длиной, 0, 020—0, 23 мм шириной. Хвостовой конец чехлика нитевидный, длинный (0, 13—0, 17 мм). Задняя часть пищевода имеет незначительное утолщение (бульбус) —Bunostomun.

19/18 — Личинки с коротким хвостовым концом чехлика, без нитевидного образования. Инвазионные личинки легочных стронгилят семейства Dictyocaulidae.

20/21 — На головном конце личинки пуговковидный выступ. Относительно крупные личинки — 0, 5—0, 56 мм длиной, 0, 025 мм шириной, с коротким (0, 05 мм), тупо закругленным хвостовым концом. Личинки, полученные из фекалий до 3-суточной давности, чехлика не имеют. Через 3—4 суток образуется первый чехлик, через 6 — второй. Личинки с двумя чехликами (инвазионные) значительно светлее и с более длинным пищеводом, равным около 1/3 длины личинки. Встречаются в фекалиях овец и коз —Filaria.

21/20 — Пуговкообразного выступа на головном конце нет. Мелкие личинки—0, 3—0, 35 мм длиной, 0, 016—0, 018 мм шириной. Хвостовой конец слегка заострен. Личинки, полученные из фекалий до 3-суточной давности, без чехлика, который образуется на четвертые сутки. Встречаются в фекалиях только крупного рогатого скота — Dictyocaulus viviparus.

22/17 — Личинки без чехликов.

23/24 — Личинки относительно длинные — 0, 5—0, 65 мм, но тонкие — 0, 014—0.016 мм шириной. Хвостовой конец (0, 08 мм) истончается равномерно и не имеет никаких отростков и изогнутостей. Пищевод длинный, светлый, достигает более 1/3 всей длины личинки. Филяриевидные (инвазионные) личинки —Strongyloides papillosus.

24/23 — Личинки короткие, менее 0, 5 мм длиной, с наличием на хвостовом конце (обычно круто изогнутом) или отростка волнистых искривлений. Длина пищевода достигает 1/2 всей длины личинки. Личинки первой стадии легочных стронгилят семейства Рrotostrongylidae.

25/26 — Хвостовой конец личинки волнообразно изогнут, «шипика» (отростка) не имеет. Длина личинки варьирует в пределах 0, 26—0, 45 мм — Ргоtosrongylus.

26/25 — Хвостовой конец личинки на дорзальной стороне имеет «шип» (отросток).

27/28 — Кишечник личинок светлый, непигментированный. Граница пищевода с кишечником сглажена, почти незаметна. Длина личинок колеблется в пределах 0, 27—0, 318мм—Мuellerius capillaris.

28/27 — Кишечник личинок темный, пигментированный. Граница пищевода с кишечником хорошо заметна.

29/30 — Длина личинок 0, 24—0, 28мм — Вicaulus schulzi.

⇐ Предыдущая32333435363738394041Следующая ⇒

Поделиться: