Изучение свойств фосфолипидов

Цель работы - при изучении некоторых свойств лецитина разобрать вопрос о химической природе, биологической роли и содержании в организме сложных липидов.

 

Фосфолипиды представляют собой сложные эфиры, в состав которых входят спирты (глицерин, сфингозин, инозит), предельные и непредельные жирные кислоты, фосфорная кислота и азотистые основания. Фосфолипиды в организме представлены в основном соединениями: холинфосфолипиды (лецитин), коламинфосфолипиды (кефалин), серинфосфолипиды, ацетальфосфолипиды, сфингомиелины, инозитфосфолипиды. Болшинство фосфолипидов образовано на основе спирта глицерина. Фосфолипиды наряду с белками являются главными компонентами клеточных мембран (клеточной оболочки органелл) и принимают участие в обмене веществ и энергии в клетке.

 

Реактивы и оборудование:

1) сухой порошок яичного желтка;

2) этиловый спирт;

3) 10%-ный раствор гидроксида натрия;

4) 10%-ный раствор соляной кислоты;

5) ) штатив с калиброванными пробирками на 10 мл;

6) пипетки;

7) стеклянная палочка;

 

Опыт 2.1 Выделение лецитинов из яичного желтка. Для опыта используется сухой порошок яичного желтка. В пробирку взять 3-4 мл (по объему) сухого яичного желтка, залить 10-12 мл горячего спирта и тщательно перемешать стеклянной палочкой. Смесь охладить и отфильтровать в сухую пробирку.

Опыт 2.2 Качественные реакции на лецитины

1) В сухую пробирку налить 3 мл ацетона и по каплям добавить фильтрат. Появление мути свидетельствует об осаждении лецитина.

2) В сухую пробирку налить 3 мл фильтрата и добавить к нему каплями воду. Образование стойкой эмульсии свидетельствует о наличии в ней лецитина.

Опыт 2.3 Гидролиз лецитина и определение продуктов гидролиза

В пробирку налить 5 мл спиртового раствора лецитина, 3 мл 10% раствора гидроокиси натрия и кипятить смесь в течение 5 минут. Азотистое основание «холин», отщепившись при гидролизе, распадается до триметиламина, который обладает запахом селедочного рассола.

Полученный гидролизат разбавить 2 мл воды и по каплям добавить 10%-ный раствор соляной кислоты до появления на поверхности раствора маслянистого слоя (свободных жирных кислот).

 

Вопросы для контроля

1. Что такое липиды?

2. На каких характерных свойствах триглицеридов основано их качественное обнаружение?

3. В чем особенность гидролиза жира в растворе едкого калия?

4. Как можно доказать полноту омыления жира?

5. На каких характерных свойствах жирных кислот основано их обнаружение?

6. Как доказать присутствие глицерина в жирах?

7. Какие виды растительного сырья имеют высокое содержание липидов?

8. Назовите основные представители фосфолипидов и укажите их роль в деятельности растительных организмов.

9. Какие полярные группы входят в состав молекулы фосфолипидов?

 

 

Упражнения по теме «Липиды»

1. Что называется реакцией гидрогенизации? Напишите схему гидрогенизации триолеата глицерина. Назовите полученный продукт реакцию

2. Напишите схему получения трилиноленоата глицерина.

3. Как можно получить натриевую соль стеариновой кислоты (мыло) из жира?

4. Какие соединения называются лецитинами? Напишите их общую формулу.

5. Какие соединения называются кефалингами? Напишите их общую формулу.

6. Переэтирификация жиров. Какое практическое значение имеет этот процесс?

7. Напишите структурную формулу L-фосфатидовой кислоты, в состав которой входят стеариновая и линолевая кислоты. Сколько сложноэфирных связей содержится в данном соединении?

8. Напишите структурную формулу 2-олеолил-1-пальмитоилфосфатидилсерина. Укажите в молекуле этого фосфолипида сложноэфирные связи.

9. Напишите структурную формулу фосфатидилхолина, в состав которого входят остатки пальмитиновой и линоленовой кислот, и приведите схемы его гидролиза в кислой и щелочной средах.

10. Напишите структурную формулу соединения, если известно, что в результате реакции гидролиза в кислой среде образуются глицерин, холин (в виде соли), линоленовая, пальмитиновая и фосфорная кислоты. Назовите это соединение.

11. Напишите структурную формулу 2-линолеоил-1-среароилфосфатидилэтаноламина. Какие продукты получаются в результате реакции гидролиза в кислой среде?

12. Какие продукты получаются в результате щелочного гидролиза 2-линоленоил-1-стеароилфосфатидилсерина? Напишите схему реакции.

13. Напишите схему реакции гидролиза 2-олеил-1-пальмитоилфосфатидилэтаноламина.

14. Приведите строение 1-олеоил-2-пальмитоил-3-среароилглицерина. Обозначьте сложноэфирные группы. Обладает ли данное соединение эмульгирующей способностью?

15. Объясните причину эмульгирующей способности 2-олеоил-1-стеароилфосфатидилэтаноламина.

16. Напишите схему реакции щелочного гидролиза 2-линолеоил-1-пальмитоилфосфатидилэтаноламина. Обладают ли эмульгирующей способностью начальное соединение и продукты реакции гидролиза? Ответ обоснуйте.

17. Напишите схему реакции щелочного гидролиза 2-линолеоил-1-пальмитоилфосфатидилэтаноламина. Обладают ли эмульгирующей способностью начальное соединение и продукты реакции гидролиза? Ответ обоснуйте.

18. Напишите схему реакции щелочного гидролиза 2-линолеоил-1-олеолил-3-стеароилглицерина. Обладают ли эмульгирующей способностью исходное соединение и продукты реакции гидролиза? Ответ обоснуйте.

19. Какая кислота получится в результате β -окисления пальмитиновой кислоты?

20. Приведите схему реакции β -окисления олеиновой кислоты.

21. Приведите строение и название кислоты, получающейся в результате двух циклов β -окисления стеариновой кислоты.

22. Установите строение высшей жирной кислоты, в результате β -окисления которой была получена пальмитиновая кислота.

23. Приведите схему реакции пероксидного окисления линоленовой кислоты.

24. Какая из высших жирных кислот - олеиновая или линоленовая- более подвержена пероксидному окислению? Приведите схему реакции пероксидного окисления на примере олеиновой кислоты.

25. Напишите схему кислотного гидролиза дипальмитоолеина (дипальмитиновоолеиновый эфир глицерина).

26. Напишите схему щелочного гидролиза тристеарина.

27. Напишите схему гидрирования триолеина (триолеат глицерина) и укажите катализатор, применяемый в промышленности.

28. Напишите схему реакции бромирования олеиновой кислоты.

 

Тема №2 «Углеводы»

 

В зависимости от числа молекул моносахаридов, образующихся при гидролизе полисахаридов, последние подразделяются на дисахариды, трисахариды и т.д.

Наибольшее практическое значение имеют дисахариды.

Связь между двумя молекулами моносахаридов устанавливается с помощью двух гидроксильных групп – по одной от каждой молекулы монозы. Однако характер этой связи может быть различным. Если одна из молекул моносахарида всегда предоставляет свой полуацетальный (гликозидный) гидроксил, то вторая молекула участвует в этом либо полуацетальным гидроксилом (образуется гликозид – гликозидная связь), либо спиртовым гидроксилом (образуется гликозид – гликозная связь).

Отсутствие или наличие в молекуле дисахарида полуацетального гидроксила отражается на свойствах дисахаридов. Если при образовании дисахарида обе молекулы участвовали своими полуацетальными гидроксилами (гликозид – гликозидная связь), то у обоих остатков моноз циклические формы являются закрепленными, альдегидная группа такого дисахарида образоваться не может. Такой дисахарид не обладает восстанавливающими свойствами и называется невосстанавливающим дисахаридом.

В случае гликозид – гликозной связи циклическая форма одного остатка моносахарида не является закрепленной, она может перейти в альдегидную форму, и тогда дисахарид будет обладать восстанавливающими свойствами. Такой дисахарид называется восстанавливающим. Восстанавливающие дисахариды проявляют реакции, характерные для соответствующих моносахаридов.

Полисахариды являются высокомолекулярными веществами. В полисахаридах остатки моносахаридов связываются гликозид – гликозными связями. Поэтому их можно рассматривать как полигликозиды. Остатки моносахаридов, входящие в состав молекулы полисахарида могут быть одинаковыми, но могут и различаться; в первом случае это гомополисахариды, во втором – гетерополисахариды.

Важнейшими гомополисахаридами, состоящими из остатков глюкозы, являются крахмал, гликоген и клетчатка (или целлюлоза).

 

Лабораторная работа № 3

Дисахариды и полисхариды

 

Цель работы: изучение химических свойств сложных сахаров

Реактивы и оборудование:

1) 1% - ный раствор сахарозы;

2) 1% - ный раствор лактозаы;

3) 2 н раствор NaOH;

4) 0, 2 н раствор CuSO₄;

5) резорцин сухой;

6) пробирки;

7) спиртовки.

 

Опыт 3.1 Доказательство наличия гидроксильных групп в сахарозе

(тростниковом сахаре)

Поместить в пробирку 1 каплю 1%-ного раствора сахарозы и 6 капель 2н. NaOH. Добавить для разбавления 5-6 капель воды, чтобы высота слоя жидкости была 18-20 мм. Прибавить одну каплю 0, 2н. CuSO₄. Вместо ожидаемого осадка гидрата окиси меди Cu(OH)₂ получается раствор сахарата меди светло-синего цвета. Сохраните раствор до следующего опыта.

В присутствии сахарозы, так же как и в присутствии глюкозы и других веществ, содержащих несколько гидроксильных групп, гидрат окиси меди растворяется, образуя раствор синего цвета.

Опыт 3.2 Отсутствие восстанавливающей способности в сахарозе

Раствор сахарата меди, полученный в опыте, осторожно нагреть над пламенем спиртовки так, чтобы нагревалась только верхняя часть раствора, а нижняя оставалась холодной для контроля. Нагреть только до кипения. Как можно было ранее убедиться, глюкоза при этих условиях давала отчетливую реакцию восстановления (проба Троммера положительная). Сахароза же в этих условиях не дает реакции восстановления, что указывает на отсутствие свободной альдегидной группы. Формула строении сахарозы согласуется с этим фактом, доказывающим, что эфирная связь между глюкозой и фруктозой образована действительно за счет полуацетальных гидроксилов глюкозы и фруктозы.

Опыт 3.3 Доказательство гидролиза сахара

Взять 2 пробирки. В первую пробирку поместить 1 каплю 1%-го раствора сахарозы, добавить 1 каплю 2н. HCl и 6 капель воды. Нагреть над пламенем спиртовки в течение 30 секунд, наблюдая за продолжительностью нагревания с помощью часов. Держа пробирку как можно более наклонно и встряхивая ее, чтобы раствор не выбросило. Отлить половину раствора во вторую пробирку и добавить в нее 6 капель 2н. NaOH, чтобы высота слоя жидкости была 18-20 мм. Едкую щелочь добавить с избытком, чтобы нейтрализовать кислоту, взятую для гидролиза, а также создать необходимую для реакции восстановления щелочную среду. Затем добавить 1 каплю 0, 2н. CuSO₄ и нагреть верхнюю часть синего раствора до кипения. Моментально в нагретой части появится оранжево-желтое окрашивание (положительная проба Троммера), что указывает на наличие глюкозы. Во второй части гидролизата, оставшейся в первой пробирке, определить наличие фруктозы с помощью реакции Селиванова. Для этого в пробирку поместить крупинку резорцина и 2 капли концентрированной соляной кислоты и нагреть до начала кипения (не кипятить! ). Моментально появится отчетливое красноватое окрашивание, указывающее на наличие фруктозы. Надо иметь в виду, что сахароза и без гидролиза дает слабую реакцию Селиванова, так как в процессе выполнения реакции в кислой среде сахароза успевает частично гидролизоваться. Проделанные опыты подтверждают, что сахароза легко расщепляется на простые сахара - глюкозу и фруктозу. Это говорит о том, что в молекуле сахарозы глюкоза и фруктоза связаны между собой по типу эфирной глюкозидной связи, характерной особенностью которой является легкость разрыва при гидролизе по месту кислородного мостика.

Полученная, в результате гидролиза сахарозы, эквимолекулярная смесь глюкозы и фруктозы называется инвертным сахаром. Сам процесс гидролиза сахарозы называют инверсией, так как раствор сахарозы, имевший до гидролиза правое вращение [α ]_D = +66, 5⁰, после гидролиза меняет вращение на левое (глюкоза [α ]_D = +52, 5⁰, а фруктоза [α ]_D = -92, 4⁰).

Опыт 3.4 Восстанавливающая способность лактозы

Налить в пробирку 4 капли 1%-го раствора лактозы, 4 капли 2н. NaOH и 1 каплю 0, 2н CuSO₄. Голубой осадок гидрата окиси меди при встряхивании пробирки растворяется, образуя синеватый раствор (доказательство наличия гидроксильных групп). Остатки медного купороса со стенок пробирки, если имеются, смыть 5 каплями воды. Для того, чтобы реакция прошла, высота жидкости в пробирке должна быть 18-20 мм, в противном случае добавить еще несколько капель воды. Затем нагреть верхнюю часть раствора до кипения. Через несколько секунд в нагретой части появится желто-оранжевое окрашивание. (доказательство наличия свободной альдегидной группы у лактозы).

Лактоза является дисахаридом, который при гидролизе дает глюкозу и галактозу. В отличие от сахарозы лактоза имеет в остатке глюкозы свободный полуацетальный гидроксил, который образует свободную альдегидную группу. В силу этого лактоза или молочный сахар, относятся к группе дисахаридов, обладающих восстановительной способностью (дающих положительную пробу Троммера).

Опыт 3.5 Открытие крахмала (качественная реакция)

Крахмал имеет общую формулу (С₆Н₁₀О₅)_n, где n = 1000 и более и является полиглюкозидом, содержащим α -1, 4-глюкозидные связи в амилозе и α -1, 4- и α -1, 6-глюкозидные связи в амилопектине. Амилоза и амилопектин – две фракции крахмала.

Крахмал нерастворим в воде, но образует коллоидный раствор - крахмальный клейстер

В пробирку прилить 5 капель крахмального клейстера и 1 каплю сильно разбавленного раствора иода. Раствор окрашивается в синий цвет вследствие образования комплексных соединений и адсорбции, который при легком нагревании исчезает, а при охлаждении вновь появляется.

Опыт 3.6 Отсутствие восстанавливающей способности у крахмала

В пробирку к 1 мл крахмального клейстера добавить 2-3 капли 2н. NaOH и 1 каплю раствора сульфата меди. Раствор перемешать, при этом выпадает осадок гидроксида меди (II), затем нагреть. Восстановления гидроксида меди не происходит. Осадок может почернеть, так как при нагревании гидроксид меди теряет воду и превращается в черный оксид меди (II). Это объясняется тем, что крахмал обладает очень слабой восстанавливающей способностью. Почему?

 

Опыт 3.7 Растворение клетчатки в аммиачном растворе оксида меди (Ι Ι ) (реактив Швейцера)

Поместите в пробирку с помощью пинцета небольшой кусочек гигроскопической ваты и добавьте 6-8 капель насыщенного аммиачного раствора оксида меди - реактив Швейцера (см.ниже). Энергично встряхивайте до полного растворения ваты, которое происходит постепенно, причем вязкость раствора резко повышается. Не следует брать слишком большой кусочек, так как это удлиняет продолжительность растворения. К полученному вязкому раствору добавьте 4 капли воды и взболтайте. Затем добавьте одну, а в случае необходимости две капли концентрированной соляной кислоты до выделения клетчатки. Обратите внимание на то, что выделившаяся клетчатка потеряла волокнистое строение и имеет вид гомогенного студня.

Реактив Швейцера - насыщенный раствороксида меди в концентрированном аммиаке. К 100 мл 10%-ного раствора медного купороса проливают 30-40 мл 10%-ного раствора едкого натра и нагревают до кипения. Образовавшийся коричнево-черный осадок оксида меди отсасывают на воронке Бюхнера, промывают водой и растворяют в 25%-ном растворе аммиака так, чтобы на дне, остался небольшой осадок. Полученный раствор фильтровать нельзя, а нужно декантировать.

 

Опыт 3.8. Кислотный гидролиз клетчатки (целлюлоза).

Целлюлоза или клетчатка (С₆Н₁₀О₅)_n (где n=6-12 тыс.)- полисахарид клеточных стенок растений. Она состоит из остатков b-глюкопиранозы и имеет b-1, 4-глюкозидные связи. При гидролизе она образует глюкозу. Это промышленный процесс, однако выделять и очищать глюкозу трудно, продукт гидролиза нейтрализуют, подвергают сбраживанию и отгоняют этиловый («гидролизный») спирт.

Напишите структурную формулу фрагмента молекулы клетчатки и схему ее гидролиза (глюкозу изобразите в виде b- глюкопиранозы).

Поместите в пробирку маленький кусочек фильтровальной бумаги (0, 5´ 1 см), добавьте 3 капли концентрированной серной кислоты (в вытяжном шкафу) и размешайте стеклянной палочкой до полного растворения клетчатки. Можно слегка подогреть (осторожно), чтобы ускорить растворение. В результате растворения должна получиться слабо окрашенная жидкость, которая после добавления 10 капель воды становится бесцветной. Поставьте пробирку в кипящую водяную баню, заметив номер гнезда, чтобы отыскать свою пробирку. Через 20 мин произведите пробу Троммера на глюкозу. Для этого с помощью пипетки поместите 8 капель 2 н. NaOH с расчетом не только нейтрализовать взятую для гидролиза кислоту, но и создать избыток щелочи, необходимый для реакций восстановления. Прибавьте 1 каплю 0, 2 н. CuSO₄. Образующийся гидроксид меди (Ι Ι ) растворяется с синим окрашиванием. Нагрейте верхнюю часть раствора до кипения. В нагретой части раствора немедленно выделяется желтый осадок гидроксида меди (Ι ). Положительная проба Троммера указывает на появление глюкозы в результате гидролиза клетчатки.

Схематически это можно выразить следующим уравнением:

 

 

Целлюлоза или клетчатка (С₆Н₁₀О₅)_n (где n=6-12 тыс.)- полисахарид клеточных стенок растений. Она состоит из остатков b-глюкопиранозы и имеет b-1, 4-глюкозидные связи. При гидролизе она образует глюкозу. Это промышленный процесс, однако выделять и очищать глюкозу трудно, продукт гидролиза нейтрализуют, подвергают сбраживанию и отгоняют этиловый спирт.

Напишите структурную формулу фрагмента молекулы клетчатки и схему ее гидролиза (глюкозу изобразите в виде b-глюкопиранозы).

 

Лабораторная работа № 4

⇐ Предыдущая12345Следующая ⇒

Поделиться: