Часть 1. Общая микробиология

Стр 1 из 5Следующая ⇒

Техническая микробиология

Часть 1. Общая микробиология

Методические указания

к лабораторным занятиям для студентов всех технологических

специальностей дневной и заочной формы обучения

Могилев 2006

УДК 519.2

Рассмотрены и утверждены

на заседании кафедры ТПП

Протокол №___ от «__» ______2005 г.

Рекомендованы к печати

Учебно-методическим Советом

кафедры ТПП,

Протокол № ____ от «___» _________ 2005 г.

Составители: ст. препод. Л.М.Королева

доцент Е.А.Цед

ст. препод. Н.И.Титенкова

Рецензент доцент Е.М.Моргунова

Содержание

Содержание……………………………………………………………………….3

Лабораторная работа №1

Микробиологическая лаборатория. Микроскоп и техника

микроскопирования……………………………………………………………...4

Лабораторная работа №2

Изучение морфологии бактерий, встречаемых в пищевой

промышленности. Правила работы с культурами микроорганизмов.

Техника приготовления и микроскопии микробиологических

препаратов………………………………………………………………………...10

Лабораторная работа №3

Морфология микроскопических грибов и дрожжей, встречающихся

в пищевой промышленности…………………………………………………….16

Лабораторная работа №4

Культивирование микроорганизмов на питательных средах………………….18

Лабораторная работа №5

Получение чистых культур микроорганизмов в производственных

условиях. Принципы определения вида бактерий……………………………...27

Лабораторная работа №6

Микробиологический контроль воздуха, воды и оборудования пищевых предприятий. Определение степени чистоты рук работающего персонала….34

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 1.

Микробиологическая лаборатория.

Микроскоп и техника микроскопирования

Цель: Ознакомление студентов с назначением, устройством, оборудованием и режимом работы микробиологической лаборатории; освоение техники микроскопии микробиологических препаратов.

М а т е р и а л ы и о б о р у д о в а н и е: автоклав, сушильный шкаф, термостат, фильтры Зейтца, микроскоп, микробиологические иглы и петли, пипетки, шпатель, иммерсионное масло, чашки Петри, готовые препараты, скальпели, ножницы, растворы красителей, спиртовки.

Устройство микробиологической лаборатории

Микробиологические исследования осуществляются в специальных помещениях, называемых микробиологической лабораторией. В состав микробиологической лаборатории входят несколько помещений:

1 - лабораторная комната для исследований;

2 - комната для приготовления питательных сред;

3 - комната для мойки посуды (моечная);

4 - комната для стерилизации посуды, питательных сред (стерилизацион-ная);

5 - бокс – изолированная комната для проведения работ, требующих повы-шенной степени стерильности. Для этого перед работой воздух и другие предметы, находящиеся в нем, обеззараживаются.

Оборудование микробиологической лаборатории

К оборудованию микробиологической лаборатории относятся приборы оптические (микроскопы, лупы), приборы термические (термостаты, автоклавы, аппараты Коха, сушильные шкафы, холодильники, микробиологические (бактериологические иглы, петли, шпатели) и хирургические инструменты (скальпели, пинцеты, держатели, ножницы), а также пробирки, чашки Петри, покровные и предметные стекла, стеклянные трубочки, капельницы с красителями. В лаборатории необходимо наличие питательных сред (сухой питательный агар, среда Кесслер, среда Эндо), агар-агара, желатина, аналиновых красителей (фуксин, генцианвиолет, метиленовый синий, метиленовый голубой), различные кислоты, щелочи, сода.

Каждый студент должен иметь в лаборатории постоянное место работы. Рабочее место должно быть снабжено микроскопом, штативом для пробирок, бактериологическими иглами и петлями, шпателем Дригальского, пипетками, набором покровных и предметных стекол, промывалкой с водой, спиртовкой, спичками, чашкой с мостиком, набором красителей, фильтровальной бумагой, песочными часами и сосудом с дезинфицирующим раствором.

Правила работы в микробиологической лаборатории

Работа в микробиологических лабораториях должна осуществляться в условиях стерильности, что является основным правилом техники безопасности. Выполнение микробиологических работ в условиях стерильности должно обеспечить предупреждение как загрязнения внешней среды и работающего персонала микробами из исследуемого материала, так и самих выделяемых чистых культур посторонними микроорганизмами из окружающей среды.

При работе в микробиологической лаборатории следует соблюдать следующие правила:

а) находиться в помещении лаборатории и работать в ней обязательно в халате;

б) пользоваться постоянным рабочим местом;

в) следить за порядком на рабочем месте, не держать на нем никаких посторонних предметов;

г) пинцеты, шпатели, микробиологические петли и иглы, пипетки после работы с микроорганизмами прожигать в пламени спиртовки или погружать в сосуд с дезинфицирующим раствором (хлорамин, дизол, карболовая кислота);

д) все использованные материалы с микроорганизмами – отработанные препараты из живых культур, временные препараты и др. – вначале обезвредить стерилизацией или дезинфекцией и только после этого мыть;

е) по окончании занятий привести в порядок рабочее место, снять халаты, и после этого обязательно вымыть руки.

В лаборатории запрещается:

а) находиться в головных уборах и верхней одежде;

б) работать без халатов;

в) принимать пищу, пить воду, курить;

г) класть на столы посторонние предметы;

д) касаться немытыми руками лица;

е) избегать лишнего хождения, резких движений, сквозняков, способствующих загрязнению исследуемого материала посторонней микрофлорой.

Методы микробиологических исследований

Для изучения микроорганизмов используется несколько специфических методов. Основными видами микробиологических исследований являются:

- бактериоскопическое (микроскопическое) – изучение с помощью микроскопа формы и строения микроорганизмов;

- бактериологическое – изучение культур микроорганизмов путем культивирования, т.е. выращивания на искусственных питательных средах;

- экспериментальное – определение микроорганизмов и их ядов путем заражений ими подопытных животных (мышей, белых крыс, морских свинок). Чаще всего используется для идентификации возбудителя пищевых отравлений;

- серологическое – определение микроорганизмов при помощи сыворотки крови, содержащей антитела. Этот метод широко используется в медицинской микробиологии.

При микробиологическом анализе пищевых продуктов применяются первые два вида исследований. Методом бактериологического исследования определяют культуральные признаки (размер, форму, структуру, цвет, блеск, профиль отдельной колонии) и биохимические особенности микроорганизмов (способность сбраживать вещество, входящее в состав различных питательных сред). При бактериоскопическом исследовании определяют морфологические особенности (размер, форму и т.д.) отдельных микроорганизмов и их способность окрашиваться различными красителями (тинкториальные свойства). Поскольку в природе существует много микробов-двойников, похожих по внешнему виду друг на друга, поэтому для определения вида микроорганизмов одной бактериоскопии обычно недостаточно, необходимо применение бактериологического метода исследования.

Устройство микроскопа

Величина большинства микроорганизмов измеряется микронами, или микрометрами (1 мкм = 1 × 10^-6и = 1 × 10 ^-3 мм), поэтому рассмотреть и изучить их можно только с помощью специальных оптических приборов - микроскопов.

Основной технической характеристикой микроскопа является разрешающая способность – т.е. минимальное расстояние между двумя точками рассматриваемого предмета, на котором они не сливаются в одну и предмет виден отчетливо. В лабораторной практике наиболее широко используются биологические иммерсионные микроскопы серии «Биолам», позволяющие получить увеличение объекта до 1800 раз. Их предельная разрешающая способность равна 0, 21 мкм, следовательно, пользуясь этими микроскопами, можно рассматривать объекты величиной не менее 0, 21 мкм.

Принцип работы биологического иммерсионного микроскопа заключается в получении действительного обратного изображения предмета в проходящем или искусственном свете.

В микроскопе различают три части – механическую, оптическую и осветительную (см. рис.1).

Механическая часть, или штатив, состоит из опорной части - основания микроскопа 1 и тубусодержателя 2, на котором укреплены предметный столик 3, кронштейн конденсора 4 и зеркало (или осветитель) 5, а в верхней части - головка 6, наклонный тубус 7 и револьвер 8 с объективами.

Предметный столик служит для закрепления на нем рассматриваемого предмета (препарата), он может перемещаться в горизонтальной плоскости с помощью винтов 9.

Рисунок 1 - Микроскоп «Биолам Р 1У4.2»

Фокусировка препарата достигается перемещением тубуса с помощью механизма, который приводится в движение двумя винтами – макрометрическим 10 (грубая фокусировка) и микрометрическим 11 (тонкая фокусировка). Одним оборотом микрометрического винта тубус передвигается на 0, 1 мм. При вращении винтов по часовой стрелке тубус микроскопа опускается, при вращении против часовой стрелки - поднимается.

Внимание! Микрометрический винт - одна из наиболее хрупких частей микроскопа и обращаться с ним нужно наиболее осторожно!

Оптическая часть микроскопа представлена объективами 12 и окуляром 13.

Объектив - это основная часть микроскопа. Он состоит из системы линз, заключенных в металлическую оправу. Увеличение объектива зависит от фокусного расстояния передней (фронтальной) линзы – единственной линзы, дающей увеличение. Чем больше кривизна фронтальной линзы, тем короче фокусное расстояние и тем больше увеличение объектива. Расположенные над ней корреляционные линзы предназначены для получения более четкого изображения (устранения дефектов изображения – сферической и хроматической аберраций). Увеличение, которое дают объективы, указано цифрами на их оправе.

В зависимости от степени даваемого увеличения объективы делятся на объективы малого, среднего и большого увеличений.

Объективы малого увеличения (3^х, 5^х, 8^х, 9^х, 10^х) применяют главным образом для предварительного осмотра препарата. Объективы среднего увеличения (20^х, 40^х, 60^х) – для изучения крупных клеток микроорганизмов (например, грибов). Эти объективы называют сухими, поскольку при микроскопии между фронтальной линзой и препаратом находится воздух. Вследствие различия показателей преломления воздуха (n = 1) и стекла (n = 1, 52) часть лучей, освещающих препарат, рассеивается и не попадает в объектив.

Объективы больших увеличений (85^х, 90^х) называются иммерсионными. Их применяют для изучения мелких форм микроорганизмов (например, бактерий). При работе с ними препарат должен быть максимально освещен. Светорассеивание, неизбежное при работе с объективами, в данном случае устраняется благодаря использованию иммерсионных жидкостей, показатель преломления которых близок к показателю преломления стекла. Чаще всего используют кедровое масло, у которого n=1, 515. Каплю жидкости наносят на препарат и погружают в нее объектив. Короткое фокусное расстояние объективов большого увеличения ((1, 9 - 2, 1)мм) позволяет исследовать объект, не поднимая объектив из капли, вследствие чего создается однородная среда между линзой и препаратом.

Окуляр состоит из двух линз, заключенных в общую металлическую оправу. Верхняя линза называется глазной, нижняя – собирательной. Окуляр лишь увеличивает изображение, даваемое объективом. Микроскопы системы «Биолам» снабжены окулярами, дающими увеличение 7^х, 10^х и 15^х (цифры указаны на оправе).

Общее увеличение микроскопа определяется произведением увеличения объектива на увеличение окуляра. Например, если увеличение объектива 90^х, а окуляра 15^х, то общее увеличение равно 1350^х.

Осветительное устройство расположено под предметным столиком. Его назначение – освещение поля зрения препарата. В осветительном устройстве различают зеркало, либо осветитель, и конденсор с ирисовой диафрагмой 14.

Конденсор представляет собой систему сильных линз и служит для усиления яркости освещения рассматриваемого объекта. Он собирает отраженные от зеркала лучи света в пучок и концентрирует их в плоскости препарата. Передвигается конденсор в вертикальном направлении при помощи винта 15. При опускании конденсора поле зрения микроскопа затемняется, при поднятии – освещается.

Ирисовая диафрагма расположена под конденсором. Она состоит из тонких металлических сегментов, которые при помощи рычажка можно сдвигать или раздвигать, регулируя этим поступление света в конденсор.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 2.

Морфология бактерий

Морфология микроорганизмов изучает их внешний вид, форму, строение клеток, подвижность, спорообразование и способы размножения.

Бактерии - это большая группа мельчайших одноклеточных организмов, размножающихся путем деления клетки пополам.

По своей форме бактерии подразделяются на шаровидные (кокки), палочковидные (палочки) и извитые (спириллы, спирохеты, вибрионы). Шаровидные бактерии встречаются в виде микрококков, диплококков, тетракокков, стрептококков, стафилокков, сарцин /1, с. 10 - 21; 4, с. 20 - 21; 5,

с. 32 - 34/.

Для исследования морфологии микроорганизмов на предварительно обезжиренных предметных стеклах готовят специальные препараты, которые в зависимости от задач исследования могут содержать живые или убитые клетки микроорганизмов.

Живые микроорганизмы исследуют в лабораториях весьма ограниченно. Из-за малой контрастности живых клеток этот метод пригоден для изучения морфологии только крупных микробов, например, микроскопических грибов. Микроскопию живых бактерий проводят, главным образом, для изучения их подвижности.

2.2.1Приготовление прижизненных препаратов

Существует два основных способа приготовления прижизненных препаратов микроорганизмов: «висячая капля» и «раздавленная капля».

2.2.1.1 Препарат «висячая капля». Небольшую каплю взвеси микробных клеток наносят на покровное стекло и осторожно накладывают на него предметное стекло так, чтобы капля свободно помещалась в центре углубления. Края луночек предварительно смазывают вазелином, препарат переворачивают и микроскопируют. Этот метод применяют, главным образом, для изучения подвижности микроорганизмов.

2.2.1.2 Препарат «раздавленная капля» неокрашенный (нативный). На предметное стекло наносят каплю жидкости (при работе с бактериями - водопроводную воду, при работе с микроскопическими грибами - смесь равных объемов этилового спирта и глицерина), вносят в нее немного исследуемых микроорганизмов, размешивают и накрывают покровным стеклом, осторожно накладывая его по ребру во избежание образования пузырьков. Излишек выступившей жидкости удаляют фильтровальной бумагой. Выращенные на плотной питательной среде бактерии переносят в каплю жидкости с помощью бактериологической иглы, а микроскопические грибы - двумя препаровальными иглами. Культура, выращенная в жидкой среде, например, дрожжи, помещается на предметное стекло стерильной пипеткой без предварительного нанесения капли жидкости. Микроскопируют препарат сухими объективами. Препарат позволяет установить форму клеток преимущественно крупных микроорганизмов, их размеры, расположение, подвижность.

2.2.1.3 Препарат «раздавленная капля» прижизненно окрашенных микроорганизмов. К капле микробной суспензии на предметном стекле добавляют каплю слабого раствора (1: 1000) красителя (метиленового синего или фуксина), размешивают, затем накрывают покровным стеклом.

Подобным образом рекомендуется дифференцировать живые и мертвые клетки, например, при исследовании пекарских дрожжей. Мертвые клетки обычно прокрашиваются быстрее и ярче за счет посмертного повышения проницаемости клеточной оболочки.

Внимание! Отработанные препараты живых микроорганизмов помещают в сосуд с дезинфицирующим раствором для обезвреживания.

2.2.2 Приготовление фиксированного и окрашенного препарата

Фиксированными и окрашенными препаратами называются такие препараты, в которых микроорганизмы зафиксированы, т.е. убиты, прикреплены к стеклу, а после этого окрашены. При фиксации быстро прерываются жизненные процессы микробной клетки и сохраняется неизменной их тонкая структура. Окраска препарата осуществляется специальными красителями. Она значительно повышает контрастность препаратов и позволяет изучить не только форму бактериальной клетки, но и ее строение.

Микроскопия фиксированных и окрашенных препаратов является основным методом изучения морфологии бактерий.

В приготовлении фиксированного и окрашенного препарата различают несколько этапов:

1) Приготовление мазка. На обезжиренное чистое предметное стекло наносят каплю воды, вносят в нее небольшое количество исследуемой культуры бактерий, взятой с плотной питательной среды стерильной бактериологической петлей, растирают ее тонким слоем на поверхности с двух-, трехкопеечную монету. Мазок должен быть тонким, равномерно растертым, небольшим.

В случае роста бактерий на жидкой питательной среде на стекло наносят только каплю микробной взвеси.

2) Высушивание мазка на воздухе при комнатной температуре для удаления лишней влаги.

3) Фиксация мазка. Стекло с мазком, обращенным кверху, проводят 3-4 раза в пламени спиртовки. Это термическая фиксация. При химической фиксации мазок обрабатывают этиловым, метиловым спиртом, смесью спирта с эфиром, но такая фиксация более длительна.

При фиксации микробы погибают, клетки прикрепляются к стеклу, улучшается их окрашиваемость.

4) Окрашивание препарата. Обработка различными красителями для контрастирования микроорганизмов.

В лабораторной практике существуют простые и сложные способы окрашивания.

Простая окраска позволяет быстро и хорошо ознакомиться с общей морфологией микроорганизмов. При этом употребляется только один краситель, чаще всего фуксин (красный цвет) или метиленовая синька (синий цвет). Фуксин красит быстрее (1-2 мин), интенсивнее и окрашивает все виды бактерий. Метиленовая синька красит медленнее (3-5 мин), менее ярко, но препараты получаются более четкими. Простую окраску препаратов применяют, главным образом, для обзорной микроскопии.

Сложные способы окраски заключаются в последовательном применении нескольких красителей. Они служат для дифференциации видов микроорганизмов по способности к окрашиванию (тинкториальные свойства) или для выявления отдельных клеточных структур.

Универсальным методом из сложных способов окраски является окраска по методу Грама. Она является дифференциальной и широко используется для определения видовой принадлежности бактерий. По способности окрашиваться по методу Грама все бактерии делятся на грамположительные (гр+) и грамотрицательные (гр-).

Грамположительные бактерии удерживают комплекс красителя генцианвиолетового с йодом при обработке спиртом и поэтому окрашиваются в сине-фиолетовый цвет; грамотрицательные бактерии не обладают такой способностью и обесцвечиваются спиртом. При последующей обработке фуксином они приобретают красную окраску.

Способность бактерий окрашиваться по Граму в настоящее время связывают с молекулярной организацией и химическим составом клеточной стенки бактерий.

Техника окраски состоит в следующем:

1) на фиксированный мазок кладут кусочек фильтровальной бумаги, наливают 2-3 капли генцианвиолета и окрашивают в течение 2-х минут;

2) бумагу снимают и, не промывая водой препарат, наносят на мазок 2-3 капли раствора Люголя, выдерживая реактив 1-2 мин;

3) сливают реактив Люголя и для обесцвечивания наносят на мазок 96%-й этиловый спирт на 30 с;

4) промывают препарат водой;

5) для дополнительной окраски наливают на мазок водный раствор фуксина на 1 – 2 мин;

6) промывают препарат водой, промокают фильтровальной бумагой и микроскопируют с иммерсионным объективом.

Бактерии, окрашенные в синий цвет, относятся к грамположительным, а красные – к грамотрицательным. Отношение к окраске по Граму является важным опознавательным признаком бактерий, что обязательно упоминается в их характеристике.

Внимание! При окраске по Граму возможны следующие ошибки:

- все клетки синие из-за недостаточного обесцвечивания;

- все клетки бледно-розовые вследствие недостаточного окрашивания генциановым виолетовым или чрезмерной обработки спиртом;

- редкие клетки в поле зрения – плохо выбрано поле зрения препарата;

- чрезвычайно много микробов в поле зрения - плохо приготовлен мазок.

Для получения правильной окраски рекомендуется употреблять свежие (суточные) культуры микроорганизмов, поскольку старые культуры меняют свое отношение к окраске по Граму.

Задание:

1) Приготовить препараты «висячая» и «раздавленная» капли и рассмотреть под микроскопом подвижность бактерий.

2)Приготовить фиксированные препараты стафилококков, диплококков, тетракокков, сарцин, микрококкков, спороносных и аспорогенных палочек, окрасить их по методу Грама и рассмотреть с иммерсионным объективом.

3)Оформить протокол исследования, зарисовать все рассмотренные препараты бактерий, условно обозначив поле зрения кругом. Под рисунком следует указать форму каждого вида бактерий, отношение к окрашиванию по Граму, общее увеличение микроскопа.

Например, диплококки, гр(+), ув.90 ^хх15 ^х=1350 ^х.

К о н т р о л ь н ы е в о п р о с ы:

1) Правила работы с культурами микроорганизмов.

2) Как приготовить препараты для прижизненной микроскопии микробов? Каковы преимущества и недостатки этого метода?

3) Техника приготовления фиксированного препарата.

4) Какие существуют способы фиксации и окраски бактериальных препаратов?

5) Для чего предназначена окраска по методу Грама? Опишите методику окраски.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №3.

Морфология плесневых грибов

Микроскопические грибы представляют собой обширную группу низших растительных организмов, лишенных хлорофилла. Они растут на различных пищевых и непищевых субстратах в виде пушистых кожистых, вато- и паутинообразных скоплений, налетов, пленок, вызывая плесневение материала. Поэтому микроскопические грибы иначе называют плесенями или плесневыми грибами.

По новой системе классификации грибы, используемые в промышленности или являющиеся распространенными возбудителями порчи пищевых продуктов, относятся к отделу настоящих грибов (Eumycota), который включает в себя 6 классов. Подразделение грибов на классы основано на использовании комплекса признаков, главными из которых являются морфологические – это особенности строения тела гриба и органов его размножения /1, с. 23 -38/.

Тело гриба называется мицелием или грибницей. Он состоит из множества белых, тонких, переплетенных нитей – гифов, концами которых гриб растет. Мицелий может быть одноклеточным, состоящим из одной клетки, и многоклеточным, гифы которого разделены перегородками, или септированы. Одноклеточный мицелий присущ низшим грибам, многоклеточный - высшим.

Микроскопические грибы характеризуются многообразием способов размножения, среди которых главным является спорообразование. Оно может проходить как бесполым, так и половым путем /1, с.26 - 29/. Поскольку большинство плесневых грибов, поражающих пищевые продукты, размножаются бесполым путем, то на лабораторном занятии рассматриваются только способы бесполого размножения. При этом споры (спорангиоспоры и конидии) образуются на особых гифах воздушного мицелия, внешне отличающихся от других гифов – спорангиеносцах (присущих низшим грибам) и конидиеносцах (характерным для высших грибов).

Спорангиоспоры и конидии бывают различной окраски, благодаря чему грибы в стадии спороношения имеют вид окрашенных налетов (черных, оливковых, коричневых).

Морфологические признаки грибов изучаются путем микроскопирования прижизненных неокрашенных препаратов типа «раздавленная» капля. Для этого в центр предметного стекла наносят каплю смеси спирта с глицерином (1: 1), переносят в нее небольшое количество мицелия гриба, выросшего на плотной питательной среде – сусло-агаре. Его берут микробиологической петлей в зоне, пограничной с зоной плодоношения (граница между окрашенной и бесцветной частями). Осторожно рассредоточивают материал тонким слоем в капли, накрывают покровным стеклом, избегая пузырьков воздуха. Микроскопируют с сухими объективами.

Морфология дрожжей

Дрожжи – это одноклеточные, неподвижные, бесцветные микроорганизмы, относящиеся к классу грибов, – аскомицеты. Большинство дрожжей утратило способность образовывать мицелий и существует в виде отдельных клеток (оидии).

Форма клеток дрожжей чаще округлая, овальная, яйцевидная, эллиптическая, реже – палочковидная, серповидная, лимонообразная и др.

Размеры дрожжевых клеток несколько больше бактериальных и достигают от 10 до 15 мкм по длине и 3-5 мкм в поперечнике. В клетке имеется оболочка, цитоплазма с включениями, ясно выраженное дифференцированное ядро, запасные питательные вещества – гликоген, капельки жира.

Морфологические свойства дрожжевой клетки имеют возрастные особенности: в старых клетках утолщается оболочка, увеличивается зернистость цитоплазмы, появляются вакуоли, крупные жировые включения, исчезает гликоген. Поэтому исследование морфологии дрожжей является одним из способов определения технологических свойств дрожжей – их функциональной активности и жизнеспособности. Основным способом размножения грибов является почкование. Оно выражается в том, что на дрожжевой клетке появляется бугорок – почка, увеличивающаяся в размерах. В нее переходит часть разделившегося ядра и содержимого цитоплазмы, после чего почка отшнуровывается от материнской клетки и начинает самостоятельное существование.

Многие дрожжи, называемые истинными, могут размножаться при помощи спор, которых обычно бывает от 2 до 12. Дрожжевая клетка рассматривается в этом случае как аска (сумка), а споры – как аскоспоры.

Дрожжи широко применяются в промышленности благодаря их способности сбраживать сахара с образованием этилового спирта и углекислого газа, некоторые вызывают порчу пищевых продуктов /1, 38 - 42/.

Изучение морфологии дрожжей проводят при микроскопии прижизненных как окрашенных, так и неокрашенных препаратов типа «раздавленная капля». Для этого каплю дрожжей наносят на предметное стекло, накрывают покровным стеклом, микроскопируют при средних и больших увеличениях в затемненном поле зрения, для чего сужают диафрагму или опускают конденсор.

Задание:

1) Рассмотреть рост мицелия гриба на питательном субстрате в чашке Петри. Увеличение объектива – малое (8^х). Зарисовать, условно обозначив поле зрения кругом. Отметить радиальное разрастание грибницы, концы гифов плесневых грибов, общее увеличение микроскопа.

2) Изучить типы строения мицелия гриба, приготовив прижизненный препарат типа «раздавленная капля» неокрашенный. Увеличение объектива вначале – малое (8^х), а затем – среднее (40^х). Зарисовать одноклеточный и многоклеточный мицелий.

3) Изучить способы бесполого спорообразования плесневых грибов на препарате «раздавленная капля». Увеличение объектива – малое (8^х) и среднее (40^х). Зарисовать спорангионосцы со спорангиями, различное строение конидиеносцев с конидиями.

4)Изучить морфологию дрожжей, приготовив препарат «раздавленная капля». Увеличение объектива вначале – среднее (40^х), а затем – большое (90^х). Зарисовать. Отметить форму дрожжевой клетки, найти почкующиеся клетки и клетки со спорами.

К о н т р о л ь н ы е в о п р о с ы:

1) Каковы особенности микроскопии плесневых грибов в сравнении с бактериями?

2) Как приготовить препарат из плесневых грибов для микроскопирования?

3) Как приготовить препарат из дрожжей для микроскопирования?

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 4.

К ультивирование микроорганизмов на питательных средах

Цель: Ознакомить студентов с основными, наиболее часто используемыми в производственных условиях питательными средами, способами их приготовления и принципами классификации; познакомить студентов с основными способами стерилизации, методами посевов и пересевов микроорганизмов, а также с условиями выращивания (культивирования) микроорганизмов на питательных средах.

М а т е р и а л ы и о б о р у д о в а н и е: автоклав, сушильный шкаф, аппарат Коха, фильтры Зейтца, прибор Арестовского, колбы, воронки, пробирки, химические стаканы, штативы для пробирок, аппарат для скашивания агара, сухой питательный агар, вата, марля, ножницы, бумага, нитки, спиртовки, среды в пробирках, скошенный агар, агар столбиком, мясо-пептонный бульон, стерильные чашки Петри, шпатель Дригальского, микробиологические петли и иглы.

Культивирование (выращивание) микроорганизмов широко применяется в лабораторных и производственных условиях для выделения, накопления и сохранения микроорганизмов. Этот метод применяется при качественном анализе микрофлоры различных объектов (сырья, полуфабрикатов, воздуха, воды, почвы и т.д.), для идентификации микроорганизмов и изучения их биологических свойств, при количественном анализе – для подсчета жизнеспособных особей, а в производственных условиях – для накопления полезных человеку микроорганизмов, продуктов их жизнедеятельности, а также для выявления посторонней микрофлоры.

Для культивирования микроорганизмов необходимы питательные среды, из которых микробы получают материал для строительных (питание) и энергетических (дыхание) функций клетки.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №5.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №6.

Микробиологический контроль воздуха, воды и оборудования

пищевых предприятий. Определение степени чистоты рук

работающего персонала

Цель: Ознакомить студентов с основными методами микробиологического исследования воздуха, воды, смывов с рук и оборудования, применяющимися в производственных условиях.

М а т е р и а л ы и о б о р у д о в а н и е: чашки Петри с посевами воздуха, воды, смывов с оборудования, микробиологические петли, стерильные пипетки на 1 и 10см³, пробирки со средой Кесслер, пробирки со стерильной водой и тампонами, красители для окрашивания бактерий по Граму, микроскопы.