Тема занятия: «Физиология микробов. Питание и его обеспечение в лабораторных условиях: питательные среды. Стерилизация, дезинфекция, контроль их качества»

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ДЛЯ ПРЕПОДАВАТЕЛЕЙ

к практическому занятию № 5

на тему: « Физиология микробов. Питание и его обеспечение в лабораторных условиях: питательные среды. Стерилизация, дезинфекция, контроль их качества»

 

 

по программе дисциплины «Микробиология, вирусология»

по специальности - 31.05.01. «Лечебное дело» (уровень специалитета)

 

курс 2, семестр 4

 

Составитель:  Зайцева Е.А., д.м.н., профессор кафедры   Рецензент:  Шаркова В.А., д.м.н., профессор, заведующая кафедрой

 

 

Владивосток - 2016             

Тема занятия: «Физиология микробов. Питание и его обеспечение в лабораторных условиях: питательные среды. Стерилизация, дезинфекция, контроль их качества»

2. Мотивация изучения темы. Обнаружение возбудителя в материале от больного, в объектах внешней среды, пищевых продуктах – один из прямых и доказательных методов диагностики. Осуществить его, не зная культуральных свойств микроба невозможно. Учитывая это, студент должен ознакомиться с каждым слагаемым термина «культуральные свойства». Особое внимание уделено конструированию питательных сред, на котором выращивают, выделяют чистые культуры возбудителей, методам их приготовления, стерилизации. Методы стерилизации необходимо знать врачу любой специальности. Навыки проверки её эффективности нужны врачам хирургам, акушерам-гинекологам, отоларингологам, стоматологам, окулистам (всем специальностям, которым необходимы стерильный перевязочный и другой материал).

 

3. Цели занятия:

3.1. Общая цель: изучение темы направлено на формирование компетенций по ФГОС-03 по специальности 31.05.01 Лечебное дело: формировать способность и готовность использовать на практике методы гуманитарных, естественнонаучных, медико-биологических и клинических наук в различных видах профессиональной и социальной деятельности (ОПК-9), формировать умение работать с научной литературой, анализировать информацию, вести поиск, выделять основные положения, делать выводы, развивать личностные качества (ОПК-9). Активно использовать современные достижения науки, особенно подчеркивая роль отечественных ученых в разработке данной темы (ОПК-9).

Конкретные цели и задачи.

В результате изучения темы студенты должны:

I уровень - «иметь представление» - обучающиеся способны сформулировать этапы подготовительной работой, предшествующей посевам и выделению чистой культуры возбудителей; научиться работать со справочной литературой, посвященной способам приготовления питательных сред и их контролю; обучиться методам стерилизации, дезинфекции, проверки их качества.

________________________________________________________________________

II уровень - «знать» - обучающиеся способны воспроизвести учебный материал с требуемой степенью точности: сформулировать понятия о стерилизации и дезинфекции, о асептике и антисептике, рассказать о способах контроля стерильности инструментария, лабораторной посуды, мягкого инвентаря, питательных сред, охарактеризовать физиологию бактерий, основные методы санитарно-микробиологических исследований, регламентирующих уровни и характер микробного загрязнения.

________________________________________________________________________

III уровень - «уметь» - проводить медицинские манипуляции в асептических условиях, расшифровать результаты контроля стерильности; организовать и осуществить профилактические мероприятия по предупреждению инфекционных заболеваний.

________________________________________________________________________

IV уровень - «владеть» - методами посева исследуемого материала тампоном, петлёй и пипеткой на плотные, полужидкие и жидкие среды; методами обеззараживания отработанного инфицированного материала и контаминированных патогенными микробами объектов внешней среды; способами антисептической обработки рук, контаминированных исследуемым материалом и культурами патогенных микробов.

 

 

4. Этапы проведения практического занятия:

№ п/п	Название этапа	Цель этапа	Время (минуты)
1	2	3	4
I. Вводная часть занятия			5-10 %
1.	Организация занятия	Мобилизовать внимание студентов на данное занятие	5
2.	Определение темы, мотивации, цели, задач занятия	Раскрыть практическую значимость занятия в системе подготовки к профессиональной деятельности, сформировать мотив и, как следствие, активизировать познавательную деятельность студентов	5-10
II. Основная часть занятия			80-90%
1	2	3	4
3.	Контроль исходных знаний, умений и навыков	Проверка готовности студентов к занятию, выявление исходного уровня знаний, умений и навыков	15-20
4.	Общие и индивидуальные задания на СРС в учебное время	Дифференцированное ориентирование студентов к предстоящей самостоятельной их работе	20-30
5.	Демонстрация методики	Показать ориентировочную основу действия (ООД)	20-30
6.	Управляемая СРС в учебное время	Овладение необходимыми общекультурными, профессиональными компетенциями, исходя из конкретных целей занятия	20-30
7.	Реализация планируемой формы занятия (семинар, практическая работа)	Контроль результатов обучения и оценка с помощью дескрипторов	45
8.	Итоговый контроль	Оценивание индивидуальных достижений студента, выявление индивидуальных и типичных ошибок и их корректировка	10-15
III. Заключительная часть занятия			5-10 %
9.	Подведение итогов занятия	Оценка деятельности студентов, определение достижения цели занятия	5 -10
10.	Общие и индивидуальные задания на СРС во внеучебное время	Указание на самоподготовку студентов, ее содержание и характер	5

5. Задания для самостоятельной подготовки к практическому занятию:

1. Конечная цель микробиологического исследования.

2. Суть терминов: «культуральные свойства микробов».

3. Особенности питании бактерии и его формы.

4. Ферменты микробной клетки, классификация.

5. Процесс усвоения углеводов, белков, жиров.

6. Дыхание как акт биологического окисления у микробов.

7. Энергетический и конструктивный обмен у микробов, особенности метаболизма.

8. Питательные среды: простые, сложные, элективные, дифференциально-диагностические. Требования к ним и контроль качества.

9. Способы стерилизации (аппаратура, режим для определения объектов, назначение).

10. Проверка качества стерилизации.

11. Условия культивирования: температурный оптимум, аэрация, рН, скорость и характер роста.

12. Понятие об асептике и антисептике (дезинфекция), контроль.

5.1.  При подготовке к практическому занятию студенту необходимо в рабочей тетради заполнить протокол практического занятия по теме (зарисовать препараты, составить комплексные таблицы, развернутые схемы, заключения и т.д.):

ЕГО ОФОРМЛЕНИЕМ

№ п/п	Наименование учебного элемента (задания)	Методическое решение	Регламент протокола
1.	Основные механизмы питания, их этапы: - диосмотический процесс (питание, освобождение от метаболитов) - электрокинетический механизм (4 этапа) - ферменты микробов: экзо- и эндоферменты - классификация типов питания (основные группы и виды)	Поздеев О.И. Медицинская микробиология. Под редакцией Покровского В.И. М., 2006. Борисов Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. М., 2005	Зарисовать при подготовке дома
2.	Классификация и основа питательных сред	Приложение 1, 2	Заполнить таблицу, составить кроссворд по вопросам при самоподготовке дома
3.	Общие требования к качеству питательных сред	Справочник по микробиологическим, вирусологическим методам исследования под ред. М.О. Биргера. М., 1982	Составить перечень при самоподготовке дома
4.	Микроорганизмы, по-разному относящиеся к температуре, температурный оптимум	Медицинская микробиология. Под ред. В.И. Покровского. М., 1999	Дать определение и примеры, вписать в протокол
5.	Методы стерилизации, аппаратура, их назначение - физический метод - химические метод	Приложение 3 - 4 Приложение 5	Составить обоб- щающую таблицу при самоподготовке дома. Составить кросс-ворд по вопросам при самоподготовке дома с коррекцией на занятии
6.	Способы контроля стерилизации и стерильности	Приложение 6	Составить перечень способов при самоподготовке дома
7.	Стерилизация стеклянной посуды, пипеток.	Подготовить к стерилизации пипетки, чашки Петри, пробирки под руководством ассистента	На занятии
8.	Техника посева культуры на питательную среду: плотную, жидкую, учесть готовые	Борисов Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. М., 2005. Приложение 7	Пересеять культуру с МПА на чашку Петри, на скошенный агар (МПА), в МПБ

 

5.2. Работа с контрольно-обучающими тестами

Выбрать правильный ответ:

Исходный уровень

 

1. К простым средам относят:

       а) МПА

       б) физиологический раствор

       в) среду Эндо

       г) среду Левина

 

2. По характеру питания микробы делятся:

а) аэробы

б) анаэробы

в) спириллы

г) гетеротрофы

 

3. К сложным средам относят:

       а) МПА

       б) МПБ

       в) среду Эндо

       г) физиологический раствор

 

4. К методам стерилизации относятся:
а) тиндализация
б) заражение лабораторных животных
в) инкубация в термостате
г) бактериологическое исследование

 

5. Стерилизация сухим паром проводится:
а) в автоклаве
б) на водяной бане
в) в печи Пастера
г) в аппарате Коха
д) с помощью УФО

 

6. Для обеззараживания воздуха используется:
а) водяная баня
б) бактерицидная лампа
в) фильтр Зейтца
г) фильтровальные свечи

 

7. Температура размножения мезофилов:
а) 0 - 20⁰
б) 20 - 45⁰
в) 45 - 60⁰
г) 60 - 80⁰

 

8. Для стерилизации лабораторной посуды используют:
а) термостат
б) прокаливание
в) сухожаровой шкаф
г) водяную баню

 

9. К методам стерилизации относятся:
а) микробный антагонизм
б) пастеризация
в) бактериофагия
г) дезинсекция

 

10. Назовите аппаратуру для стерилизации паром под давлением:
а) спиртовка
б) водяная баня
в) печь Пастера
г) аппарат Коха
д) автоклав

 

Итоговый уровень

 

1. Консервирующей средой является:

       а) МПА

       б) МПБ

       в) глицериновая смесь

       г) пептонная вода

 

2. По типу питания бактерии делятся на:

       а) лофотрихи

       б) сапрофиты

       в) анаэробы

       г) аэробы

 

3. Стерилизация сухим жаром проводится:
а) в автоклаве
б) на водяной бане
в) в печи Пастера
г) с помощью УФО

 

4. В сухожаровом шкафу применяют температуру:
а) 170 ⁰С
б) 37⁰С
в) 75⁰С
г) 120⁰С

 

5. Пастеризацию используют для стерилизации:
а) бактериальных петель
б) молочных продуктов
в) питательных сред
г) стеклянной посуды
д) материала, содержащего споры

 

6. Для стерилизации лабораторной и аптечной посуды используют:
а) сухой пар
б) пастеризацию
в) тиндализацию
г) дератизацию
д) бактериальные фильтры

 

7. Для стерилизации жидкостей, портящихся при нагревании, используют:
а) прокаливание
б) автоклавирование
в) сухой жар
г) бактериальные фильтры

 

8. Основные требования, предъявляемы к питательным средам, кроме:
а) изотоничность
б) стерильность
в) достаточное содержание веществ, необходимых для роста и размножения данного микроба
г) оптимальная рН среды

 

9. Практическое значение ферментов микробов:
а) участвуют в процессах питания
б) участвуют в процессах дыхания
в) участвуют в процессах деления клетки
г) используются для идентификации бактерий

 

10. У большинства патогенных микроорганизмов температурный оптимум роста составляет 37⁰ С и они относятся к:

       а) психрофилам

       б) термофилам

       в) мезофилам

       г) галофилам

6. Ориентировочная основа действия (ООД) для проведения самостоятельной работы студентов (СРС) в учебное время:

1. Подготовить к проверке материалы по СРС (письменные ответы на вопросы домашнего задания, лекции по теме занятия).

2. Охарактеризовать и определить мотивацию, цель и задачи занятия.

3. Входной контроль уровня знаний.

4. Обсуждение выполнения техники посева микроорганизмов на питательную среду.

5. Выполнить самостоятельно посев микроорганизмов на питательную среду (МПА, МПБ).

6. Тестовый контроль итогового уровня знаний.

7. Источники информации:

7.1. Список рекомендуемой литературы:

Основная:

1. Лекция по теме.

2. Методическая разработка по теме.

3. Микробиология и иммунология / Под ред. академика РАМН, проф. А.А. Воробьева //М.: Медицина, 2008.464с.

4. Поздеев О.К. Медицинская микробиология /М.: ГЭОТАР-МЕД, 2008. 768 с.

5. Борисов Л. Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология /М., 2008. 736 с.

6. Борисов Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. М., 2005. С. 46 – 66.

7. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. Под ред. Воробьева А.А. М., 2006. С. С. 51 - 67.

8. Шаркова В.А., Забелина Н.Р., Воропаева Н.М., Диго Р.Н., Коршукова О.А., Карпенко Н.В. Учебно-методическое пособие к практическим занятиям по общей микробиологии, вирусологии и иммунологии для студентов медицинских вузов /Учебно-методическое пособие. 2011. Владивосток: Медицина ДВ. 179 с.

 

Дополнительная:

1. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. С-Пб, 2002. С. 746-783.

2. Медицинская микробиология. Под ред. Королюка А.М., Сбойчакова В.Б. С-Пб, 2002. С. 30-50.

3. Медицинская микробиология. Под редакцией В.И. Покровского, О.И. Поздеева. М., 1999. С. 26-35.

4. Биргер М.О. (под ред.) Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. М., 1982. С. 93-98.

5. Санитарно-эпидемиологические правила «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней» (СП 1.3.2322-08) от 01.05.2008 г.

Приложение 1

Приложение 2

ВОПРОСЫ К СОСТАВЛЕНИЮ КРОССВОРДА (СКАНВОРДА)

ПО ТЕМЕ «ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ»

1. Сокращенное название мясо-пептонный агар.

2. Сокращенное название мясо-пептонный бульон.

3. Жидкая среда для определения углеводолитической активности (автор).

4. Полужидкая среда для тех же целей (автор).

5. Питательная основа в средах Левина, Плоскирева, Эндо.

6. Общее дифференцирующее вещество в средах Левина, Плоскирева, Эндо.

 7. Почему среда Плоскирева называется еще «бактоагаром Ж»? Какой дополнительный дифференцирующий компонент в нее входит?

8. Как называется по типу питания микроб, самостоятельно синтезирующий из свободных химических элементов сложные соединения и обеспечивающий себя всем необходимым?

9. Дайте синоним слову «паратроф».

10. Как называются микробы, хорошо растущих и в условиях живого организма и на мертвом органическом субстрате.

11. Стеклянное дополнение к средам Гисса и Раппопорт.

Примечание. Кроссворд составить и зарисовать дома. Последовательность вопросов можно не соблюдать.

Приложение 3

 

Приложение 5

Вопросы к кроссворду «Дезинфекция, дезинсекция, дератизация»

1. Способ химического уничтожения микробов вне живого организма.

2. Способ химического уничтожения насекомых-распространителей или переносчиков инфекций.

3. Общедоступное средство для дезинфекции.

4. Физический фактор отпугивания насекомых.

5. Физические способы защиты человека от насекомых.

6. Какой способ для защиты человека от грозящих нападением животных (собак, кошек) является наиболее эффективным в неблагоприятной эпидемической обстановке.

7. Способ уничтожения грызунов - источников инфекции.

Примечание: цифру правильного ответа округлить.

 

Приложение 6

Контроль стерильности

1. Физические методы:

- максимальные контактные термометры;

- манометры на автоклавах (соответствие шкалы давления шкале температуры: 0,5 атм  - 112-115⁰С, 1 атм - 119-120⁰С); - изменение физических свойств бумаги, ваты (+163⁰С - бумага желтеет, +175⁰С и выше - бумага и вата обугливаются, сгорают).

2. Химические методы:

- регистрация плавления порошка S, кристаллизация, карамелизация углеводов, изменение цвета различных веществ: бензонафтол – 110⁰С, сера – 119⁰С, бензольная кислота - 120⁰С и пр.

3. Бактериологические методы:

- среды с тест-объектами бактерий помещают с объектами стерилизации, а после - в термостат (при качественной стерилизации роста микробов не будет, при плохой - рост);

- «посев» простерилизованного объекта (пипетки, стекла, шприцы и пр.) на МПА, затем в термостат на 18 часов, при появлении роста - стерилизация некачественная.

Приложение 7

Техника посева на косой мясо-пептонный агар (МПА)

Простерилизовать бактериологическую петлю. Приподнять крышку чашки Петри с ростом бактерий. Стерильной петлей прикоснуться к колонии. Чашку закрыть, поставить. В левую руку взять пробирку со скошенным МПА. Пробирку открыть под пламенем спиртовки, обжечь края. Ввести петлю в пробирку до ее дна оставляя пробирку закрепленной мизинцем правой руки. Плоской поверхностью петли прикоснуться к поверхности МПА и провести посев штрихообразными движениями, постепенно подвигаясь снизу вверх. Легким движением обжечь под пламенем спиртовки края пробирки и пробку, закрыть пробирку. Пробирку с посевом поместить в термостат на 18 - 24 часа при температуре +37⁰С.

Приложение 4

Методы стерилизации