Оценка пригодности свежеполученной спермы

Свежеполученная сперма подлежит оценке по показателям, характеризующим ее пригодность для разбавления и последующего использования.

На методы оценки спермы сельскохозяйственных животных существуют государственные стандарты.

Работа по оценке спермы проводится в специаль­но оборудованной лаборатории племпредприятия или станции искусственного осеменения обученным персо­налом

Эякулят сразу после получения оценивается по внешним признакам: объему, цвету, запаху, консис­тенции, однородности, наличию посторонних приме­сей. Цель предварительной оценки — отбраковать эякуляты, явно непригодные для использования.

При отсутствии отклонений во внешних призна­ках от требований ГОСТа эякулят проходит следую­щие этапы оценки.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПОДВИЖНОСТИ СПЕРМИЕВ. Подвижность спермиев — это способность их к поступательному движению (ПД). Оценку на подвижность проводят в раздавленной капле, для чего на чистое, подогретое предметное стекло наносят каплю свежеполученной спермы, на­крывают ее покровным стеклом. Стекло помещают на электрообогревательный столик, установленный на предметном столике микроскопа. Визуальную микроскопическую оценку проводят в затемненном поле зрения при увеличении в 140 или 280 раз. При этом определяют не подвижность отдельных спермиев, а процент спермиев с поступательным движением во всем поле зрения микро­скопа. Результаты оценки выражают в баллах. При­нята 10-балльная оценка, причем каждый балл соот­ветствует 10% спермиев с ПД.

Определение концентрации спермиев. Концентрация спермиев определяется в каждом эякуляте. Эти данные необходимы для расчета крат­ности разбавления спермы. Кратность разбавления ус­танавливается с таким расчетом, чтобы в каждой дозе разбавленной спермы было предусмотренное ГОСТом число спермиев.

Концентрацию спермиев можно определить не­сколькими методами: подсчетом в камере Горяева; по оптическому стандарту, при помощи фотоэлектроколориметра, электронным счетчиком частиц.

Достаточно точным методом определения кон­центрации спермиев является подсчет в камере Горяе­ва. Однако он утомителен и требует много времени — 15-20 мин на оценку каждого эякулята. Поэтому в настоящее время используется лишь как вспомога­тельный.

Для определения концентрации спермиев этим методом цельную сперму разбавляют в меланжере 3%-ным раствором натрия хлорида: быка — в 100 раз, барана — в 200 раз, хряка и жеребца — в 20 раз. Камеру Горяева с притертым покровным стеклом заря­жают разбавленной спермой, кладут на предметный столик микроскопа, отыскивают сетку и, отрегулиро­вав освещенность поля зрения, производят подсчет спермиев в пяти больших квадратах, расположенных по диагонали. Для пересчета на 1 см³ пользуются уп­рощенными формулами:

 

Н С = ——— (баран)          100	Н С = ——— (бык)         200
Н С = ——— (хряк, жеребец)          1000

 

где   С — концентрация спермиев в млрд /мл;

   Н - число сосчитанных спермиев в пяти больших квадратах..  Применение оптического стандарта основано на том, что чем больше мутность исследуемой спермы, тем выше концентрация спермиев. Этот метод легко и быстро выполним, но по точности значительно уступа­ет прямому подсчету спермиев.

Оптический стандарт для определения концент­рации спермиев в сперме хряка (автор С. И. Сердюк) представляет собой запаянную пробирку из прозрач­ного стекла диаметром 12-14 мм; в ней содержится жидкость, имитирующая по степени мутности спер­му хряка с концентрацией спермиев 5 млн/мл. При определении концентрации в другую пробирку того же диаметра наливают 1-2 мл 1%-ного раствора на­трия хлорида и вносят микропипеткой как можно точнее 0, 1 мл профильтрованной спермы. Снова до­бавляют раствор натрия хлорида, пока степень мут­ности не сравняется с таковой стандарта. Затем вы­числяют концентрацию спермиев. Если, например, на 0, 1 мл спермы пошло 2, 9 раствора натрия хлори­да (степень разведения 30 раз), концентрация спермиев в исследуемом эякуляте равна      150 млн /мл.

 Применение фотоэлектроколориметра (ФЭК-56 или КФК-2) позволяет оценить эякулят по концентра­ции спермиев за 1-2 мин.

 Принцип работы ФЭК заключается в том, что пу­чок света от специальной лампы проходит через све­тофильтр, затем через кювету с исследуемой спермой попадает на селеновый фотоэлемент (ФЭК-56) или фо­тодиод (КФК-2), преобразующий световую энергию в электрическую. Электрическая энергия подводится к миллиамперметру, стрелка которого отклоняется в сторону от нуля. Степень отклонения стрелки зависит от величины электрического тока, а она обратно про­порциональна оптической плотности спермы. Для пе­ревода найденной величины оптической плотности в соответствующую ей концентрацию спермиев необхо­димо заранее подготовить калибровочную шкалу или найти коэффициент-множитель.

Для построения калибровочной шкалы использу­ют разведения спермы с различной концентрацией спермиев. Разбавление спермы проводят путем добав­ления плазмы спермы, которую получают центрифу­гированием спермы при 5-8 тыс. об./мин в течение    15-20 мин.

Сперму разбавляют спермальной плазмой из рас­чета получения разведения с интервалом концентра­ции спермиев 0, 1-0, 15 млрд/мл.

Концентрацию спермиев в каждом разведении уточняют путем подсчета в камере Горяева. Приготов­ленные разведения колориметрируют и находят соот­ветствующие величины оптической плотности.

При построении калибровочной шкалы в опреде­ленном масштабе на миллиметровой бумаге по гори­зонтальной оси откладывают значения оптической плотности, а по вертикальной — соответствующие ве­личины концентрации спермиев. Точки пересечения восстановленных от указанных величин перпендику­ляров соединяют диагональной линией.

Калибровочную шкалу строят для каждого ФЭК и для каждого вида животных отдельно. В связи с тем, что по мере износа фотоэлементов показания на ФЭК могут изменяться, калибровочную кривую еже­месячно сверяют с показаниями счетной камеры Го­ряева.

Для получения коэффициента-множителя необ­ходимо провести исследование 15-20 эякулятов. Кон­центрация спермиев в каждом эякуляте определяется с помощью фотоэлектроколориметра и подсчетом в ка­мере Горяева. Полученные данные суммируют отдель­но по каждому способу, а затем сумму концентрации (С) делят на сумму оптической плотности (Д):

С                                                    

— =  коэффициент- множитель.

 Д

Полу­ченные на ФЭК показатели оптической плотности ум­ножают на коэффициент-множитель и получают иско­мую концентрацию спермиев в млрд/мл.

Электронные счетчики частиц позволяют наибо­лее точно определить число спермиев в эякуляте. В этих приборах разбавленную пробу спермы пропуска­ют через капилляр такого диаметра, чтобы только один спермий мог одновременно пройти между двумя электродами; это прохождение регистрируется элект­ронным лучом и подается на монитор.

Оценке по объему, подвижности, концентрации спермиев подлежит каждый эякулят. Без этих данных невозможно контролировать спермопродукцию произ­водителей, дозировать ее по числу спермиев с прямо­линейно-поступательным движением.

На предприятиях и станциях искусственного осеменения прибегают и к другим методам оценки спермы, преимущественно в тех случаях, когда возни­кает необходимость иметь более полные сведения об эякуляте или дать заключение о состоянии половой системы производителя.

МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА СПЕРМИЕВ. Проводится ежемесячно, а также при подозре­нии на тот или иной патологический процесс в поло­вых органах.

Для оценки цельную сперму разбавляют 2, 9%-ным раствором натрия цитрата: барана — в 20-30 раз, быка — в 10-15, хряка — в  2-3 раза. Каплю раз­бавленной спермы помещают на край обезжиренного предметного стекла, делают тонкий мазок; его высу­шивают на воздухе, фиксируют 2-3 мин в 96° спирте-ректификате, окрашивают раствором красителя (эозин). Оценку спермиев в приготовленном мазке проводят под микроскопом при увеличении в 400 раз; в каждом поле зрения подсчитывают общее количе­ство спермиев и отдельно — с анормальной морфоло­гией. Всего сосчитывают 200-300 спермиев и вычис­ляют процент анормальных.

Повышенное содержание спермиев с анормаль­ной морфологией может быть обусловлено воспали­тельными процессами в семенниках и придатках, при­даточных половых железах, нарушением терморегулирующей функции мошонки, авитаминозом А.

ВЫЖИВАЕМОСТЬ СПЕРМИЕВ ВНЕ ОРГАНИЗМА. Является одним из объективных показателей оп­лодотворяющей способности спермиев.

Свежеполученную сперму оцениваемого произво­дителя разбавляют стандартной средой, после чего от­бирают в чистые сухие флаконы из-под антибиотиков три пробы разбавленной спермы; после оценки по под­вижности их ставят в холодильник (температура         2…4⁰ С). В дальнейшем через каждые 24 ч до полной гибели спермиев пробы спермы проверяют на подвиж­ность. Результаты последовательной оценки заносят в бланк. На основании записей определяют относитель­ную и абсолютную выживаемость спермиев.

Относительная выживаемость — промежуток времени в часах между началом опыта и гибелью всех спермиев. При вычислении абсолютной выживаемос­ти интервал времени между последовательными оцен­ками умножают на промежуточные показатели балль­ной оценки; полученные произведения суммируют.

САНИТАРНАЯ ОЦЕНКА СВЕЖЕПОЛУЧЕННОЙ СПЕРМЫ.  Включает определение общего количества aпатогенных бактерий в 1 мл, колититр, индикацию пато­генных грибов, возбудителей инфекционных болезней (в случае подозрения на то или иное инфекционное за­болевание). При проведении этих исследований пользуются методами, принятыми в бактериологии.

 Согласно действующим в настоящее время ГОСТам, свежеполученная сперма сельскохозяйствен­ных животных считается пригодной для разбавления и последующего хранения при ее соответствии следу­ющим требованиям (табл. 5).

Таблица 5

⇐ Предыдущая891011121314151617Следующая ⇒

Поделиться: