Компоненты синтетических сред

Применяемые в настоящее время разбавители спермы сельскохозяйственных животных относятся к синтетическим средам.

Синтетическая среда обычно состоит из трех и более компонентов. В состав большинства из них вхо­дят:

Сахара (глюкоза, лактоза) — служат источником энергии для спермиев. Помимо этого,  уча­ствуют в поддержании осмотического давления, понижают электропроводность среды, предохра­няют спермии от потерь электрического заряда. С желтком куриного яйца образуют биокомплек­сы, защищающие мембрану спермиев от повреж­дений при охлаждении.

Цитрат натрия. Создает буферность среды, нейтра­лизует конечные продукты жизнедеятельности спермиев; связывая ионы кальция и тяжелых металлов, обеспечивает снижение их уровня до оптимального.

Трис-буфер (2-амино-2-гидроксиметил-1, 3 пропандиол). Устойчиво удерживает первоначаль­ную рН среды, обладает осмотические действи­ем, устраняет явления дыхательного ацидоза в
спермиях.            

Трилон Б (двунатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты). Образуя временные связи с ионами кальция, тормозит активность протеаз, АТФаз и других ферментов, участвующих в ме­таболических процессах в спермиях.

Э ДТА (тринатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты). Подобно трилону Б, образует хелатные комплексы с ионами кальция, тем са­мым блокирует активность ферментных систем спермиев.

Сульфат аммония. Предохраняет от разрушения сульфгидрильные группы в мембранах спермиев, задерживает выход электролитов в окружающую среду

Глицерин. Обладает криопротекторными свойства­ми: легко проникая внутрь спермия, он понижает температуру замерзания и препятствует обра­зованию кристаллов связанной воды, что позво­ляет избежать повреждений клеточных струк­тур. Благодаря высокой гидрофильности пре­пятствует дегидратации цитоплазмы. Как раство­ритель электролитов и вещество не обладающее собственным осмотическим давлением, предуп­реждает опасное для клетки возрастание осмоти­ческого давления в процессе замораживания. Помимо глицерина, для защиты спермиев от криогенных повреждений могут использоваться полиэтиленоксид, диметилсульфоксид, поливинилпирролидон.

Желток куриных яиц. Содержит лецитин и липопротеины. Они создают на поверхности спермия адсорбционный слой, предохраняющий спермии от холодового шока.

Помимо защитного действия, желток вносит в среду питательные и биологически активные ве­щества (аминокислоты, холестерин, жиро- и во­дорастворимые витамины и др.).

Спермосан ППК. Комплексный антибактериаль­ный препарат, состоящий из пенициллина, полимиксина, канамицина. Такая комбинация эф­фективно тормозит размножение микроорганиз­мов в сперме.

В практике искусственного осеменения исполь­зуются и другие санирующие препараты: комбиспермосан, состоящий из левомицетина, ампициллина и полимиксина, ГАМП (гентамицин + ампициллин).

В состав некоторых разбавителей входят антиок­сиданты (токоферол, пигмент морских ежей), загусти­тели (гуммиарабик), свободные аминокислоты (гликокол, аргинин) и другие компоненты.

Методика приготовления синтетических сред, техника разбавления спермы

Для приготовления сред и разбавления спермы отводится специально оборудованное лабораторное по­мещение со средствами стерилизации воздуха и пред­метов (бактерицидные лампы).

Колбы, мерные цилиндры, пипетки, бумажные фильтры и другие принадлежности накануне взятия спермы стерилизуют в сушильном шкафу при темпе­ратуре 130…150°С; перед использованием их перено­сят в термостат с постоянной температурой 37-38°С.

Для приготовления сред используют дистиллиро­ванную (лучше бидистиллированную) воду, имеющую рН 6, 8-7, 0. Сухие компоненты пригодны только химически чистые и проверенные на безвредность для спермиев. Их хранят в герметически закрытых стеклянных банках в темном месте. Яйца используют только свежие (со сроком хранения не более 7 суток), полученные от здоровых кур, при выгульном их содер­жании.   

Среду готовят непосредственно перед употребле­нием в такой последовательности. В плоскодонную колбу отмеривают нужный объем воды и закрыв гор­ловину колпаком из полупергаментной бумаги или по­лиэтиленовой пленки, ставят на огонь. Воду доводят до кипения и кипятят 1-2 мин. Сняв с огня, охлаж­дают до 35°С, после чего вносят в определенной пос­ледовательности сухие компоненты.

После их раство­рения вносят желток куриных яиц. Яйцо моют, насу­хо вытирают, его поверхность стерилизуют спиртовым тампоном; затем раскалывают скорлупу по экватору на две половины и, осторожно перекладывая желток из одной половины в другую, удаляют белок в под­ставленную чашку. Желток переносят на стерильный бумажный фильтр. Проколов скальпелем желточную оболочку, дают вытечь желтку в колбу. Остатки жел­тка выдавливают через сложенные концы фильтро­вальной бумаги, пока на ней останется лишь одна пленка. При дозировании желтка исходят из того, что он имеет объем около 10 мл.

Содержимое колбы взбалтывают для равномерно­го распределения желтка, после чего в среду добавля­ют санирующий препарат.

Приготовление каждого разбавителя имеет свою специфику, которая отражена в прилагаемом к упа­ковке листке-вкладыше.

Свежеполученную сперму переливают в колбу или дозатор, подогретые до 35 °С.

Перед разбавлением сперма и среда должны иметь одинаковую температуру, для чего их помеща­ют в термостат, установленный на 35°С.

Сперму обычно разбавляют в два этапа. Вначале к сперме (но не наоборот) приливают небольшими пор­циями такой же объем среды; после 5-10-минутной выдержки производят окончательное разбавление.

Разбавитель приливают к сперме небольшими порциями, чтобы избежать резкого изменения ее хи­мического состава.

Кратность разбавления определяют, основываясь на результатах оценки эякулята по концентрации и подвижности спермиев, а также объема спермодозы. Сперму быка и хряка разбавляют в 2-6 раз, барана и жеребца — в 2-4 раза.

 

Биоконтроль сред

Любой из компонентов сред для разбавления спермы может оказаться в той или иной мере токсич­ным для спермиев. В связи с этим каждая вновь поступившая на племпредприятие партия компонента подлежит контролю на безвредность для спермиев. На крупных современных племпредприятиях эта за­дача возлагается на отделы биологического контроля (ОБК).

Биоконтроль осуществляется в следующем по­рядке. Готовят 2 варианта одной и той же среды: с включением испытуемого и эталонного компонентов. Свежеполученный эякулят делят на две равные пор­ции, причем одну разбавляют средой с включением испытуемого, другую — эталонного компонента. Пос­ле разбавления опытные и контрольное образцы спер­мы расфасовывают во флаконы из-под антибиотика, маркируют и после оценки по подвижности помеща­ют в холодильник на полку с температурой 2-4°С. В дальнейшем оценку по подвижности проводят через каждые 24 ч до прекращения поступательного движе­ния спермиев. Сопоставив показатели относительной и абсолютной выживаемости спермиев, делают заключе­ние о безвредности испытуемого компонента. Он счи­тается безвредным для спермиев, если в опытных об­разцах выживаемость будет одинаковая с эталоном либо несколько ниже, но не более чем на 10%.

⇐ Предыдущая9101112131415161718Следующая ⇒

Поделиться: