Оценка и интерпретация результатов

Подклейте стрипы и храните в защищенном от света месте. Эталон для оценки поставляется в наборе. При использовании этого эталона оценки, наклейте окрашенные стрипы в предназначенные для этого поля, причем полоски СС и AC должны совпадать с соответствующми линиями на эталоне. Определите степень устойчивости и сделайте пометку в соответствующей колонке; некоторые примеры интерпретации полученных результатов приведены в следующей главе. Поставляемый шаблон так же предназначен для оценки результатов и должен совпадать с полосками стрипов СС и АС. На каждом стрипе всего 27 зон реакции

 

 

Не все полоски на стрипе могут показывать одинаковую силу сигнала.

Контроль коньюгата (CC)

Линия в этой зоне должна быть хорошо проявлена, подтверждая эффективность связывания коньюгата и правильность субстратной реакции

Зона Контроля Амплификации (AC)

Если тест выполнен правильно, контроль ампликонов, свяжется с Зоной Контроля Амплификации на стрипе. Таким образом, если эта полоска развилась, то можно исключить ошибку во время выделения и проведения амплификации или воздействие ингибиторов амплификации. В случае положительного результата тестирования, сигнал в зоне Контроля Амплификации может быть слабым или совсем невидимым. Это может быть вызвано конкурентными реакциями во время амплификации. Тем не менее, в этом случае, реакция амплификации считается выполненной успешно и не требует повторения. Отсутствие полоски АС в случае отрицательного результата, указывает на ошибку во время проведения амплификации или влияние ингибиторов амплификации. В этом случае результаты тестирования недействительны и необходимо повторное тестирование соответствующего образца.

Комплекс M. tuberculosis (TUB)

Эта зона реакции гибридизируется с ампликонами, полученными от всех представителей комплекса Mycobacterium tuberculosis. Если зона TUB отрицательная, это означает, что выделенные бактерии не принадлежат к комплексу M. tuberculosis и не могу быть диагностированы данной тест- системой.

Контроли локусов (rpoB, katG, and inhA)

Зоны Контроля Локусов улавливают специфичные для каждого локуса участки генов и должны всегда показывать положительный сигнал.

Пробы дикого типа

Пробы дикого типа охватывают важнейшие участки устойчивости каждого гена. Если все пробы дикого типа одного гена показывают положительный сигнал, значит, не зафиксировано ни одной мутации в нуклеотидной последовательности. Следовательно, штамм чувствителен к соответствующим антибиотикам. В случае мутации, определённые ампликоны не могут связаться с соответствующими пробами диких типов. Отсутствие сигнала хотя бы в одной пробе дикого типа указывает на устойчивость тестируемого штамма к соответствующему антибиотику. Во внимание должны приниматься только полоски с интенсивностью равносильной или большей, чем полоска Контроля амплификации (АС). Каждый образец полоски, отличный от образца полоски дикого типа указывает на устойчивость тестируемого штамма. Полоска, проявившаяся в зоне гена rpoB говорит об устойчивости к рифампицину, полоска в зоне гена katG позволяет сделать выводы о высоком уровне устойчивости к изониазиду. И полоска в пробе inhA соответственно свидетельствует о низком уровне устойчивости исследуемого штамма к изониазиду.

Мутантные пробы

Мутантные пробы выявляют наиболее часто встречаемые мутации, вызывающие устойчивость. (см. Таб. 1, 2 и 3). В сравнении с другими пробами, положительные сигналы в мутантных пробах rpoB MUT2A и MUT2B могут проявлять сигнал меньшей интенсивности. Только полоски с интенсивностью сигнала такой же или более интенсивной, чем в зоне Контроля Амплификации (АС), могут приниматься во внимание. Каждая полоска, отличающаяся от полосок дикого типа, указывает на устойчивость тестируемого штамма. Образцовая полоска появившаяся в пробе rpoB, позволяет сделать вывод об устойчивости исследуемого штамма к рифампицину, появление полоски katG -о высоком уровне устойчивости и полоска inhA - соответственно о низкой устойчивости к изониазиду.

 

Глава 5. Материалы и методы исследования

Работа проводилась на базе бактериологической лаборатории Гомельской областной туберкулёзной клинической больницы (ГОТКБ).

 

Материалы исследования Термоциклер

Термошейкер

Методы исследования

Предварительная обработка мокроты

Обработка мокроты 10% раствором трехзамещенного фосфорнокислого натрия

Трехзамещенный фосфорнокислый натрий (Na₃PO₄) хорошо подавляет сопутствующую флору и даже при 2-3-х-дневном хранении материала при +4°С не повреждает микобактерии и мало влияет на их способность к росту на питательных средах.

Обработку материала 10% раствором трехзамещенного фосфорнокислого натрия производят следующим образом:

Исследуемый материал, находящийся в стерильном флаконе, заливают равным объемом 10% трехзамещенного фосфата натрия и помещают на 10 мин во встряхиватель, затем на 18-20 часов - в термостат при 37°C. После этого материал центрифугируют при 3000g в течение 15 минут. При указанном режиме происходит осаждение 95% присутствующих в материале микобактерий.

Надосадочную жидкость отбирают, осадок отмывают 10-15 мл изотонического раствора NaCl или дистиллированной воды.

Супернатант удаляют, а осадок в объеме 0, 8-1, 0 мл засевают на питательную среду с параллельным приготовлением мазка.

⇐ Предыдущая12345Следующая ⇒

Поделиться: