|
Архитектура Аудит Военная наука Иностранные языки Медицина Металлургия Метрология Образование Политология Производство Психология Стандартизация Технологии |
|
|
Архитектура Аудит Военная наука Иностранные языки Медицина Металлургия Метрология Образование Политология Производство Психология Стандартизация Технологии |
Анализ диализата на наличие солей азотистой кислоты (нитриты)
Качественное обнаружение нитритов. 1. Реакция с сульфаниловой кислотой и β -нафтолом. К 3 каплям предварительно нейтрализованного диализата добавляют 3 капли 0, 5% раствора сульфаниловой кислоты в 2 % растворе хлористоводородной кислоты. Через 3 - 5 минут к смеси прибавляют 1- 2 капли свежеприготовленного щелочного раствора β -нафтола. Появляется оранжево-красное окрашивание или осадок (интенсивность окраски зависит от содержания нитритов в пробе). 2. Реакция с реактивом Грисса. В пробирку с 5 каплями нейтрализованного диализата вносят 3 капли реактива Грисса. Появляется темно-красное, красное или розовое окрашивание с образованием осадка. 3. Реакция с феназоном. К 1 мл диализата добавляют 1 мл 10% раствора серной кислоты и несколько капель 1% раствора феназона. В случае слабоинтенсивной окраски реакций с реактивом Грисса и сульфаниловой кислотой и β -нафтолом, проводиться отгонка нитритов из диализатов в токе оксида углерода (IV) и проведение исследования содержимого приемника на наличие нитритов. Часть диализата вносят в колбу, подкисляют уксусной кислотой, которая из нитритов вытесняет азотистую кислоту, и не вытесняет азотную из нитратов, из аппарата Киппа пропускают оксид углерода (IV), который переносит азотистую кислоту в приемник с 1% раствором натрия гидроксида. После отгонки содержимое приемника нейтрализуют 10% раствором уксусной кислоты. В нейтрализованном дистилляте определяют наличие нитритов с помощью описанных выше реакций, а также с помощью окрашивания йодкрахмальной бумажки. Реакция с йодкрахмальной бумажкой. На йодкрахмальную бумажку наносят каплю 1 М раствора хлористоводородной кислоты и 3 капли нейтрализованного диализата. При наличии нитритов йодкрахмальная бумажка синеет. Количественное определение нитритов. К 25 мл диализата добавляют 0, 5 мл раствора сульфаниловой кислоты и тщательно перемешивают. Через 5 – 10 мин, приливают 0, 5 мл раствора α – нафтиламина, 1, 0 мл раствора ацетата натрия. Содержимое колбы перемешивают и через 15 мин определяют оптическую плотность полученного раствора при длине волны 540 нм в кювете с толщиной слоя 1 см. В качестве раствора сравнения используют дистиллированную воду. По калибровочного графику определяют содержание нитритов в диализате. Построение калибровочного графика. В мерные колбы на 25 мл вносят соответственно 1, 0; 2, 0; 3, 0; 5, 0; 7, 0 мл рабочего стандартного раствора нитрита натрия и доводят до метки дистиллированной водой. Растворы перемешивают и переливают в конические плоскодонные колбы на 50 мл. Затем в каждый раствор добавляют 0, 5 мл раствора сульфаниловой кислоты и тщательно перемешивают. Значение pH полученной смеси должно быть около 1, 4. Дают раствору постоять 3 – 10 мин, затем приливают 0, 5 мл раствора α – нафтиламина, 1, 0 мл раствора ацетата натрия и хорошо перемешивают. Полученный окрашенный раствор должен иметь pH в границах 2, 0 до 2, 5. Через 10 – 30 мин определяют его оптическую плотность при λ = 540 нм в кюветах с толщиной поглощающего слоя 1 см. В качестве раствора сравнения используют дистиллированную воду. Полученные данные заносят в таблицу. Таблица 1. Данные для построения калибровочного графика.
Строят калибровочный график зависимости оптической плотности (А) от концентрации нитрит-ионов (С (NO2-)) Приготовление стандартного раствора нитрита натрия. Для приготовления основного стандартного раствора нитрита натрия 0, 4927 г дважды перекристаллизованного и высушенного до постоянной массы при 110 0С нитрита натрия помещают в мерной колбу на 1000 мл, растворяют в дистиллированной воде и доводят до метки. Для консервации добавляют 2 мл хлороформа с таким расчетом, чтобы общий объем раствора был 1000 мл. Раствор устойчив в течении шесть месяцев при хранении в холодильнике при 4 – 5 °С. Концентрация нитритного азота составляет 100 мкг/мл. Рабочий стандартный раствор нитрита натрия готовят разбавлением в 100 раз основного раствора в день проведения анализа. Для этого 1 мл основного раствора помещают в мерную колбу на 100 мл и доводят дистиллированной водой до метки. Раствор используют свежеприготовленным. Концентрация нитритного азота в рабочем растворе составляет 1 мкг/мл.
Лабораторно-практическое занятие «Определение содержания нитратов в биологическом объекте»
Метод определения нитритов и нитратов (после восстановления в нитриты) основан на фотометрическом измерении интенсивности окраски водного извлечения их из исследуемых проб азосоединения розово-малинового цвета, образующегося при реакции нитритов с α -нафтиламином и сульфаниловой кислотой (реактив Грисса) в кислой среде после водного извлечения их из исследуемых проб. Реакция специфична для нитритов. Предел определения нитритов составляет 0, 05 мг/кг (мг/л), степень определения нитритов 90 ± 10%. Предел определения нитратов составляет 0, 5 мг/кг (мг/л), степень определения нитратов 83 ± 17%. Задание 1. Провести выделение токсических веществ из биологического объекта. Измельченный растительный материал (картофель, лук, капуста, зелень и др.) в количестве 2-10 г помещают в диализационный цилиндр (стеклянную трубку с мембраной). Отмеривают 100 мл дистиллированной воды в стакан и помещают туда диализационный цилиндр с биоматериалом, предварительно смочив его несколькими миллилитрами дистиллированной воды из первоначального объема воды в стакане. Воды приливают столько, чтобы она хорошо смочила пробу. Проводят диализ в течение 1, 5 - 2 часов. Не вынимая диализационного цилиндра из стакана, пипеткой отбирают 10 мл диализата для анализа на нитриты и 5 мл для анализа на нитраты. Количественное определение нитритов. К 10 мл диализата, помещенного в пробирку добавляют 1 мл реактива Грисса, встряхивают содержимое пробирки. Через 15 мин. определяют оптическую плотность полученного раствора при λ = 540 нм в кюветах с толщиной поглощающего слоя 1 см. В качестве раствора сравнения используют дистиллированную воду. Количественное определение нитратов. К 5 мл диализата, помещенным в пробирку с притертой пробкой, в которую предварительно помещают 0, 3 г сухого восстановителя, приливают 5 мл 12% уксусной кислоты, закрывают пробирку пробкой и энергично встряхивают ее в течение точно 2 мин. В параллельную пробирку помещают 0, 3 г сухого восстановителя и приливают 10 мл 12% уксусной кислоты, закрывают ее пробкой и встряхивают в течение 2 мин. (" холостой" раствор). Через 10 мин. переливают содержимое пробирок в центрифужные пробирки и центрифугируют при 5 - 6 тыс. об./мин. в течение 5 мин. После этого определяют оптическую плотность исследуемого раствора при λ = 540 нм в кюветах с толщиной поглощающего слоя 1 см. В качестве раствора сравнения используют " холостой" раствор - раствор уксусной кислоты, обработанный сухим восстановителем. По калибровочным графикам находят содержание нитратов (нитрат - иона) и нитритов (нитрит – иона) и рассчитывают их концентрацию в исходном биологическом материале по формуле:
Где: Cкалиб – концентрация нитрит-иона (нитрат-иона), найденная по калибровочному графику, мкг; Vдиал – объем диализата, мл; Vаликв – объем аликвоты, взятой для анализа, мл; m – масса навески биоматериала, г. В том случае, если в пробах устанавливается наличие большого содержания нитритов - свыше 20 мкг (интенсивная окраска в пробирке), их следует удалять, так как они несколько завышают результаты определения нитратов. Для удаления нитритов к диализату в стакане, соответственно 50 или 100 мл, прибавляют 2 - 4 мл 1-процентного раствора сульфаминовой кислоты, перемешивают раствор стеклянной палочкой и оставляют на 5 мин. После этого отбирают 5 мл диализата для анализа на нитраты и проводят анализ, как описано выше. При расчетах учитывают увеличение общего объема пробы. Построение калибровочных кривых 1. Построение калибровочной кривой для определения нитритов. В 11 химических пробирок помещают рабочий раствор нитрита натрия в количествах, указанных в таблице. Объем в пробирках доводят дистиллированной водой до 10 мл. Приливают по 1 мл реактива Грисса и энергично встряхивают. Таблица: Данные для приготовления стандартных растворов для определения нитритов.
Для построения калибровочной кривой через 15 мин. определяют оптическую плотность полученных растворов при λ = 540 нм в кюветах с толщиной слоя 1 см. В качестве раствора сравнения используют дистиллированную воду.
2. Построение калибровочной кривой для определения нитратов. В 7 пробирок с притертыми пробками или в 7 центрифужных пробирок с притертыми пробками последовательно прибавляют по 0, 3 г реактива для восстановления нитратов, затем приливают рабочий раствор и 12% уксусную кислоту в количествах, указанных в таблице (общий объем составляет 10 мл). Таблица: Данные для приготовления стандартных растворов для определения нитратов.
Затем пробирки или центрифужные пробирки закрывают пробками и энергично встряхивают в течение ровно 2 мин. Через 10 мин. пробы центрифугируют в центрифужных пробирках при 5 - 6 тыс. об./мин. в течение 5 мин. После этого определяют оптическую плотность исследуемого раствора при λ = 540 нм в кюветах с толщиной поглощающего слоя 1 см. В качестве раствора сравнения используют " холостой" раствор - раствор уксусной кислоты, обработанный сухим восстановителем
Вопросы для самоконтроля.
1. Каковы особенности исследования на наличие минеральных кислот в биоматериале и биожидкости? 2. Какие предварительные испытания на вещества, изолируемые настаиванием с водой, вы знаете? 3. Какие объекты следует направлять на исследования при остром отравлении минеральными кислотами? 4. Какие объекты следует направлять на исследования при остром отравлении едкими щелочами? 5. Какие существуют методы изолирования и очистки извлечений при отравлениях минеральными кислотами, едкими щелочами? 6. Как проводится химико-токсикологический анализ на наличие серной кислоты? 7. Как проводится химико-токсикологический анализ на присутствие азотной кислоты? 8. Каковы особенности проведения исследования на наличие хлористоводородной кислоты? 9. Токсикологическое значение минеральных кислот, симптомы отравления, первая помощь при отравлении ими. 10. В чем заключается особенность обнаружения аммиака в биологическом материале? Интерпретация результатов исследования на наличие аммиака. 11. Как проводится химико-токсикологический анализ на наличие натрия гидроксида? 12. Химико-токсикологический анализ на присутствие солей азотной и азотистой кислот (нитритов и нитратов). 13. Как отличить едкую щелочь от растворов карбонатов (гидрокарбонатов)? 14. Как отличить минеральные кислоты от органических? Примеры заданий входного теста.
1. ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ АЗОТНОЙ КИСЛОТЫ ИСПОЛЬЗУЮТ а) серебра нитрат б) дифениламин и. серную кислоту концентрированную в) бария хлорид г) свинца нитрат д) пикриновую кислоту 2. ПРИ АЛКАЛИМЕТРИЧЕСКОМ ОПРЕДЕЛЕНИИ СЕРНОЙ КИСЛОТЫ, в качестве ИНДИКАТОРа, ИСПОЛЬЗУют а) метиловый оранжевый б) метиловый красный в) фенолфталеин г) бромтимоловый синий д) тропеолин 00 3. К компонентам РЕАКТИВА ГРИССА относятся: а) N-(α -нафтил)-этилендиамин б) сульфаниловая кислота в) сульфаминовая кислота г) сульфаниловая кислота и (α -нафтиламин) в уксусной кислоте. д) сульфаниловая кислота и (α -нафтиламин) в серной кислоте. 4. ПРИ ИЗОЛИРОВАНИИ НЕОРГАНИЧЕСКИХ КИСЛОТ, ЩЕЛОЧЕЙ, СОЛЕЙ ДЛЯ ОТДЕЛЕНИЯ БЕЛКОВЫХ ВЕЩЕСТВ ИСПОЛЬЗУЮТ: а) водоструйный насос б) диализ в) электродиализ г) хроматографические методы д) фильтрование через фильтр 5. ИЗ БИОМАТЕРИАЛА путем НАСТАИВАНИя С ВОДОЙ ИЗОЛИРуют ВЕЩЕСТВА: а) соли металлов б) минеральные кислоты в) летучие яды г) алкалоиды д) пестициды 6. Использование ДИАЛИЗа В ХИМИКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОМ АНАЛИЗЕ проводят С ЦЕЛЬЮ а) концентрирования б) изолирования в) очистки г) выделения д) разведения 7. ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЯ НА ГРУППУ КИСЛОТ, ЩЕЛОЧЕЙ В СУДЕБНО-ХИМИЧЕСКОЕ ОТДЕЛЕНИЕ НАПРАВЛЯЮТ а) печень и почки б) рвотные массы в) кишечник г) кровь д) мочу 8. ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ СЕРНОЙ КИСЛОТЫ В ХИМИКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОМ АНАЛИЗЕ используют а) марганца хлорид б) свинца хлорид в) цинка хлорид г) бария хлорид д) дифениламин 9. ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ АЗОТНОЙ КИСЛОТЫ В ХИМИКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОМ АНАЛИЗЕ используют а) свинца ацетат б) анилин в) натрия родизонат г) дифениламин д) бария хлорид 10. ИЗОЛИРОВАНИЕ АЗОТНОЙ КИСЛОТЫ ИЗ БИОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА ПРОВОДИТСЯ МЕТОДОМ а) диализа б) перегонки с водяным паром в) изолирования из щелочной среды г) изолирования из кислой среды д) экстракцией органическим растворителем 11. ДИАЛИЗАТ ПЕРЕД ОПРЕДЕЛЕНИЕМ ХЛОРОВОДОРОДНОЙ КИСЛОТЫ СЛЕДУЕТ ПРОВЕРЯТЬ НА НАЛИЧИЕ а) уксусной кислоты б) азотной кислоты в) фосфорной кислоты г) серной кислоты д) азотистой кислоты 12. РЕАГЕНТ ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ ХЛОРОВОДОРОДНОЙ КИСЛОТЫ В ХИМИКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОМ АНАЛИЗЕ а) серебра нитрат б) дифениламин в) калия гидроксид г) натрия гидроксид д) бария хлорид
Список литературы 1. Токсикологическая химия: учебник для вузов/под ред. Т.В. Плетеневой. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2008. - 512 с. 2. Токсикологическая химия. Метаболизм и анализ токсикантов: учебное пособие для вузов / под ред. Н.И. Калетиной. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2008. – 1016 с.
Приложение 1. Популярное:
|
Последнее изменение этой страницы: 2016-08-31; Просмотров: 1859; Нарушение авторского права страницы
,