Питательные среды Раппопорта, Эндо, Левина, Рессела, Клиглера: тип среды, состав, назначение, принцип действия.

Среда Раппопорта является средой обогащения и дифференциально-диагностической средой. В ее состав входит: желчный бульон 10%, 2% глюкоза, индикатор (кислый фуксин, обесцвеченный щелочью; в щелочной среде бесцветный, в кислой – красный). Назначение: для накопления тифо-паратифозных бактерий при посеве крови больного, а также для ориентировочной дифференциации тифо-паратифозных бактерий. Принцип д-я: при росте тифо-паратифозных бактерий из-за ферментации глюкозы происходит диффузное помутнение и покраснение среды. Для паратифозных бактерий, в отличие от брюшно-тифозных, наличие в поплавке газа.

Среда Эндо – дифференциально-диагностическая. Состав: МПА, лактоза, индикатор – основной фуксин, обесцвеченный сульфитом натрия. Назначение: для рассева исследуемого материала с целью получения изолированных колоний. Принцип д-я основан на способности некоторых микроорганизмов разлагать или не разлагать лактозу (сальмонеллы не разлагают и образуют бесцветные колонии).

Среда Левина является слабо селективной и дифференциально-диагностической. В ее составе МПА, тактоза, индикаторы: эозин и метиленовый синий, калий гидрофосфат. Назначение и принцип д-я см. среду Эндо.

Среда Рессела – комбинированная, дифференциально-диагностическая. Состав: МПА, лактоза 1%, глюкоза 0, 1%, индикатор (водный голубой и розоловая к-та; в щелочной среде розовая, в кислой – синяя). Назначение: для отсева «подозрительных» колоний с целью выделения чистых культур и определения их ферментативной активности по отношению к глюкозе и лактозе. Принцип д-я:

Среда Клиглера – комбинированная, дифференциально-диагностическая. Состав: МПА, лактоза 1%, глюкоза 0, 1%, натрий тиосульфат, железо II сульфат, индикатор – феноловый красный (в щелочной среде – красный, в кислой – желтый). Назначение: для отсева «подозрительных» колоний с целью выявления чистых культур и определения их ферментативной активности по отношению к глюкозе, лактозе и образования Н2S. Принцип д-я: энтеробактерии, имеющие фермент тиосульфат-редуктазу, восстанавливают тиосульфат в сульфит, при этом выделяется сероводород, который реагирует с железо-сульфатом – в рез-те образуется сульфид железа черного цвета.

Серологическая идентификация выделенной чистой культуры с помощью адсорбированных монорецепторных О- и Н- агглю­тинирующих сальмонеллезных сывороток. Серологическая идентификация проводится в реакции агглютинации на стеке с агглютинирующими адсорбированными сальмонеллезными О- и Н-сыворотками, эти сыворотки м.б. 2-х видов: монорецепторными и поливалентными, их получают из видовых иммунных сывороток методом адсорбции антител по Кастеллани.

Серологическая идентификация протекает последовательно в 3 этапа:

1) Установление принадлежности культуры к серогруппам А, В, С, D, Е, рода Salmonella. При этом используют поливалентную О-сыворотку, содержащую антитела против антигенных рецепторов 2, 3, 4, 7, 9, 10. Монорецепторные О-сыворотки применяют против редких серогрупп. При диагностике паратифа А и В, брюшного тифа можно использовать смесь О-сывороток, сорержащих антитела к рецепторам 2, 4, 9.

2) При положительном рез-те для определения принадлежности испытуемой культуры к определенной серогруппе ставят р-цию агглютинации раздельно с каждой монорецепторной О-сывороткой, входившей в состав поливалентной: рецептор 2 относится к серогруппе А, рецептор 4 – к серогруппе В, рецептор 7 – к серогруппе С и т.д.

3) После определения серогруппы, определяем ее видовую принадлежность при помощи р-ции агглютинации с адсорбированными монорецепторными Н-сыворотками против Н-антигенов 1-й фазы сальмонелл, входящих в состав данной серогруппы. Затем проводят р-цию агглютинации с адсорбированными Н-сыворотками против Н-антигенов 2-й фазы и окончательно устанавливают антигенную формулу испытуемой культуры.

Бактерионосительство при брюшном тифе. Какими серологи­ческими реакциями можно подтвердить хроническое бактерио­носительство? Диагностикумы, используемые для этой цели. Единственным доказательством бактерионосительства является выделение от носителя культур S. typhi, S. paratyphi A, S. paratyphi B, с помощью вспомогательных методов: серологическая р-ция и алергическая кожная проба с Vi-тифином (он содержит Vi-антиген, который при взаимодействии с Vi-антителами дает местную аллергическую р-цию в виде покраснения и припухлости в течении 20-30 минут). Положительная р-ция с Vi-тифином говорит о том, что в орг-ме есть Vi-антитела и возможно S. typhi.

Хр. бактерионосительство подтверждается РНГА. При этом используются Vi-диагностикум, т.к. при формировании брюшнотифозного бактерионосительства хар-но проявление Vi-антител; диагностический титр р-ции 1: 40.

Способы заражения брюшным тифом. Источник инфекции. Заражение брюшным тифом происходит только оральным путем. Источником инфекции являются больные люди и бактерионосители (представляют опасность для окружающих в течении нескольких лет после перенесенной болезни).

Биопрепараты, применяемые для диагностики, специфической профилактики и лечения тифо-паратифозных заболеваний.

1) Вакцина брюшно-тифозная спиртовая сухая содержит инактивированные этиловым спиртом лиофилизированные брюшно-тифозные бактерии, применяется для профилактики брюшного тифа у взрослых.

2) Вакцина брюшно-тифозная Vi-полисахаридная жидкая – раствор капсульного полисахарида, выделенного из культуры брюшно-тифозных бактерий, очищенного ферментативными и физико-химическими методами. После введения вакцины начинается интенсивное образование Ат и формирование резистентности через 1-2 недели. Для профилактики брюшного тифа у взрослых.

3) Вакцина брюшно-тифозная спиртовая, обогащенная Vi-антигеном, состоит из 1+2, которые соединяют непосредственно перед применением. Вакцина стимулирует клеточных иммунитет и образование антител к О- и Vi-антигенам возбудителя брюшного тифа. Для профилактики брюшного тифа у детей 7-14 лет.

4) Бактериофаг брюшно-тифозный в таблетках с кислотоустойчивым покрытием – таблетки из концентрированного лиофилизированного фаголизата сальмонелл брюшного тифа, покрытые слоем АЦФ или содержащие пектин. Для профилактики брюшного тифа по эпидпоказаниям в семейном очаге, больнице, населенном пункте и т.д.

5) Бактериофаг сальмонеллезный групп АВСDЕ – фильтрат фаголизатов, наиболее распространенных сальмонеллезных бактерий (более 10 видов), выпускают в жидком виде и в таблетках с кислотоустойчивым покрытием. Для профилактики и лечения сальмонеллезов.

Сальмонеллез.

Особенности антигенного строения сальмонелл ( О -, Н -, Vi –антигены), их химическая природа, локализация. Классификация сальмонелл по Кауфману-Уайту. Серогруппы, серовары. О-антиген (соматический) – термостабильный, располагается в клеточной стенке, по своей природе явл-ся полисахаридно-белково-липидным комплексом. Специфичность этого антигена зависит от того, с каким полисахаридом он связан (он разный у сальмонелл различных групп). Антигенные рецепторы обозначаются цифрами – 1, 2, 3 и т.д.

К-антиген (футлярный) – термолабильный, находится в клеточной стенке более поверхностно, чем О-антиген. У сальмонелл есть М-Аг и Vi-Аг, которые относятся к К-антигенам.

Н-антиген (жгутиковый) – термолабильный, по своей природе это белок (флагеллин), располагается в жгутиках. У бактерий одного и того же вида он может состоять из двух комплексов, которые отличаются по серологической специфичности. Это двухфазные бактерии, для каждой из фаз хар-ны соответствующие антигенные комплексы: антигены 1-й фазы (специфической), обозначаются буквами a, b, c и т.д.; а антигены 2-й фазы (неспецифической) – 1, 2, 3 и т.д.

Кауфман и Уайт на основе антигенной структуры разделили всех представителей рода сальмонеллы на серологические группы, основанные на признаке общности О-антигенов, где каждая группа имеет определенного антигенного рецептора, которого нет у представителей других групп. Внутри группы сальмонеллы делятся на виды (серовары) по различию строения Н-антигенов 1 или 2 фазы.

Основные источники сальмонеллезной инфекции. Возбудители, их морфологические свойства и биохимические тесты, применя­емые для дифференциации сальмонелл. ПТИ чаще всего вызываются саальмонеллами, входящими в серогруппы В, С, D, Е, т.е. заб-ния являются зооантропонозными. Источником инфекции S. typhimurium (серогруппа В) м.б. мыши, голуби, домашние птицы и их яйца, вторичным м.б. заражены другие продукты. Источником инфекции S.choleraesuis (серогруппа С) – свиньи; источник инфекции S. enteritidis (серогруппа D) – крупный рогатый скот.

Факторы патогенности сальмонелл, вызы­вающие пищевые токсикоинфекций. Обладают факторами адгезии и колонизации, факторами инвазии. У них есть эндотоксин с широким спектром д-я, многие из них обладают энтеротоксинами (LT и/или ST-токсины), которые нарушают ф-ции аденилат- и гуанилатциклазной систем энтероцитов --- нарушение водно-солевого обмена --- диарея. У некоторых сальмонелл есть цитотоксин, который нарушает синтез белка в эритроцитах --- гиперсекреция и нарушение энтеросорбции жидкости в тонком кишечнике --- диарея.

В патогенезе большую роль играет попадание с пищей большого кол-ва возбудителей. Попав в кишечник сальмонеллы прикрепляются к его эпителию и начинают размножаться --- в подслизистое пространство и лимфатические образования стенки киш-ка (далее там размножаются и погибают, высвобождая эндотоксин), т.к. попадает также эндотоксин извне, то происходит его массивное накопление --- интоксикация (тяжелая, с лихорадкой, нарушениями со стороны НС и ССС) и диарея. Если сальмонелл в орг-м с пищей попало малое кол-во, то заб-е протекает по типу гастроэнтерита с диареей, но без интоксикации и повышения температуры.

Перечислите исследуемые материалы и этапы бактериологичес­кой диагностики пищевой сальмонеллезной инфекции. Материалами являются испражнения, моча, рвотные массы, промывные воды желудка, пищевые продукты.

На предварительном этапе посев материала на селенитовую среду или среду Мюллера – рост культуры вызовет помутнение среды. На 1-м этапе посев на чашке со средами Эндо, Плоскирева, висмульт-сульфит агар (на средах Эндо и Плоскирева выросли полупрозрачные бесцветные lac- колонии, на висмульт-сульфит агаре коричневые и черные). На 2-м этапе - пересев подозрительных колоний уколом и штрихом на комбинированные среды Клиглера или Рессела. На среде Клиглера столбик желтый, скошенная часть розового цвета, почернение в нижней части среды, в среде пузырьки газа. На среде Рессела – столбик синего цвета, скошенная часть розовая, пузырьки газа. На 3-м этапе – идентификация: а) морфологические св-ва – в мазке, окрашенном по Граму (при микроскопии видны грамотрицательные палочки с закругленными концами); б) б/хим св-ва – в тест-системе АPI-20Е; в) серологическая идентификация. На 4-м этапе производится учет полученных рез-тов и заключение.

Среда Мюллера – среда обогащения. Состав: МПБ, мел, р-р Люголя, натрий тиосульфат. Назначение: для накопления сальмонелл при посеве материала с малым кол-вом возбудителя и/или сильно загрязненного сопутствующей флорой. П/д: тетратионат натрия, который образуется в среде, подавляет рост сопутствующей флоры --- способствует росту сальмонелл; среда мутнеет.

Селенитовая среда – среда обогащения. Состав: пептонная вода, лактоза, фосфатный буфер, натрий гидроселенит. Назначение: для накопления сальмонелл и шигелл. П/д: натрий гидроселенит подавляет рост сопутствующей флоры --- способствует росту сальмонелл и шигелл; среда мутнеет.

Висмут-сульфит агар – селективная среда. Состав: МПА, сульфит висмута, сульфат железа, фосфат натрия, бриллиантовый зеленый. Назначение: для рассева исследуемого материала с целью получения изолированных колоний сальмонелл и протея. П/д: сальмонелла образует из сульфата железа сероводород, который взаимодействует с бесцветным сульфитом висмута и переводит его в сульвит висмута черного цвета (поэтому колонии сальмонелл черного цвета). Рост гр+ флоры и многих энтеробактерий подавляется.

Среда Гисса – дифференциально-диагностическая. Состав: МПА (0, 4%), углеводы, индикатор: бромкрезол пурпурный. Назначение: определение спектра сахаролитической активности с целью идентификации выделенной культуры энтеробактерий, а также и др. бактерий. П/д: при ферментации углевода до кислых продуктов цвет среды переходит в желтый, при газообразовании – пузырьки.

Серологическая идентификация выделенной культуры сальмо­нелл.

Последовательность серологической идентификации:

1) культуры испытывают в р-ции агглютинации с адсорбированной поливалентной О-сывороткой, содержащей антитела против антигенных рецепторов 2, 4, 7, 9, 3, 10.

2) При положительном рез-те ставят р-цию агглютинации раздельно с каждой монорецепторной О-сывороткой, которая входила в состав поливалентной: рецептор 2 (серогруппа А), рецептор 4 (серогруппа В), рецептор 7 (серогруппа С) и т.д.

3) После того, как установят серогруппу, к которой относится культура определяют ее видовую принадлежность (серовариант) с помощью р-ции агглютинации с адсорбированными монорецепторными Н-сыворотками против Н-антигенов первой фазы сальмонелл, входящих в состав данной серогруппы. Далее р-ция агглютинации с адсорбированными Н-сыворотками против Н-антигенов 2 фазы и окончательно устанавливают антигенную формулу испытуемой культуры.

Генерализованный сальмонеллез. Наиболее часто выделяемый возбудитель - госпитальные штаммы S. typhimurium, которые адаптировались к орг-му чел-ка. Возникает в условиях стационара как внутрибольничной инфекции. Источником явл-ся не только пищевые продукты, но и бактерионосители. Контактно-бытовой путь распространения. Это ОКИ с длительным тяжелым течением по типу тифоидной или токсикосептической инф-ии. Им присущи все факторы патогенности, характерные для S. typhimurium, а также отличаются повышенной вирулентностью, длительным сохранением на объектах внешней среды и обладают резистентностью ко многим а/б.

⇐ Предыдущая12345678Следующая ⇒

Поделиться: