Оттаивание криоконсервированной спермы

     Оптимизация режима оттаивания спермы имеет большое значение для сохранения биологических свойств спермиев (подвижность, оплодотворяющая способность).

     В основу применяемых в настоящее время способов оттаивания спермы положен принцип: температурный режим при оттаивании должен соответствовать режиму замораживания. Поскольку  сперму замораживают в сверхбыстром режиме, то и оттаивать ее следует столь же быстро. Особенно важно преодолеть с максимальной скоростью интервал температуры от - 150 до - 51^оС, чтобы избежать рекристаллизации.

     Доказано экспериментальным путем и подтверждено практикой, что при оттаивании спермы в пайетах наилучшие результаты по восстановлению подвижности спермиев достигаются при температуре теплоносителя 37-40^оС, в открытых гранулах — 40-42⁰С. Как выяснилось, идеальным теплоносителем является обычная вода.

     Имеет значение температура спермы в момент завершения оттаивания, а также в промежутке между оттаиванием и введением в половые пути коровы или телки. Для правильного подхода к этому вопросу следует исходить из следующего: после оттаивания сперма некоторое время находится в контакте с воздухом помещения пункта искусственного осеменения, т.е. при комнатной температуре. Из этого следует, что конечная температура в момент завершения оттаивания должна быть идентична этим значениям. Такая же температура должна сохраняться и во время доставки замороженно-оттаянной спермы к местам осеменения животных, вплоть до введения в половые пути самки. Это позволяет избежать двойного перепада температур, что должно благоприятно отразиться на результатах осеменения.

     После оттаивания спермии быка сохраняют жизнеспособность от 2 до 12 ч, однако их оплодотворяющая способность быстро снижается. Для подтверждения приводим результаты эксперимента (В.Енин). Коров осеменяли спермой, хранившейся после оттаивания 0-10, 10-20, 21-30, 31-40, 41-50 и 61-120 мин. Стельность после осеменения такой спермой наступила у 52, 4; 50, 2; 53, 1; 42, 7; 42, 9; 28, 7% коров соответственно. Отсюда следует, что сперма должна быть использована как можно быстрее – в первые 10-15 мин после оттаивания.

    Для оттаивания спермы быка, замороженной в открытых гранулах, необходимо иметь термостат биологический ТБ-2 или Термо. Прибор включают в сеть за 20-30 мин до начала работы. Перед этим проверяют уровень воды в термостате — он должен быть вровень с верхней кромкой штатива.

     Температура воды контролируется с помощью термометра или автоматически. После того как она достигнет оптимального значения (40-41⁰С), загружают в гнезда термостата ампулы с буферной физиологической средой – 2, 9%-ным стабилизированным раствором цитрата натрия. Чтобы температура содержимого ампулы уравнялась с таковой термостата, требуется экспозиция 3, 5-4 мин. По истечении этого срока ампулу достают из термостата, насухо протирают стерильной марлевой салфеткой, вскрывают, делая кольцевой надпил по шейке, затем переносят в гнездо термоштатива (изготовляется на месте из куска пенопласта).

    Открыв сосуд Дьюара, поворачивают крючок штанги на 180⁰ и поднимают канистру, но не выше верхнего края горловины.

    Анатомическим пинцетом (предварительно простерилизованным) снимают крышку штанги-подъемника; кончик пинцета охлаждают погружением на несколько секунд в жидкий азот канистры, захватывают им гранулу и опускают ее в ампулу с подогретым цитратом натрия, а канистру возвращают в исходное положение. Нахождение канистры в горловине сосуда должно занимать не более  5 с.

    Удерживая ампулу пальцами за верхнюю часть, перемешивают ее содержимое вращательными движениями до полного оттаивания гранулы. Этот прием позволяет избежать попадания возобновивших движение спермиев в гибельную для них зону минусовых температур. Ампулу с оттаянной спермой помещают в гнездо термоштатива.

   Подготавливать к использованию сперму, замороженную в пайетах, очень просто. Пайету вынимают пинцетом из канистры, энергично стряхивают с нее остатки жидкого азота и быстро переносят в емкость с водой, имеющей температуру +38⁰С.                  Через 10-15с пайету вынимают из воды, бумажной салфеткой удаляют с ее поверхности влагу, затем переносят в широкогорлый пищевой термос, заполненный на 2/3 гигроскопической ватой; в этом же термосе сперму доставляют к месту осеменения.

     В.П.Кононов, Н.П.Зыкунов предложили водоструйный оттаиватель спермы, замороженной в пайетах (рис.31). Он представляет собой трубку (1) с расширением в виде воронки (2) на одном конце и запирающим приспособлением (3), не препятствующим току воды, на другом конце. Внутренний диаметр трубки превышает наружный диаметр пайеты на 5-6 мм. Длина трубки равна примерно 400 мм. Расширенная ее часть вмещает 200-250 мл воды. Устройство крепится на штативе (4), расширенной частью вверх.

    При использовании водоструйного оттаивателя пайету со спермой быстро извлекают из канистры, помещают в расширенную часть и одновременно вливают 200-250 мл воды комнатной температуры. Вода увлекает пайету в канал трубки и создает вокруг нее быстрый поток, отдавая тепло. Благодаря высокой скорости воды сперма быстро оттаивает, при этом нагревается лишь до температуры воды, то есть до температуры окружающей среды.

         

 

Рис. 31.  Водоструйный оттаиватель спермы,

          замороженной  в пайетах

 

    Импортное устройство аналогичного назначения изготовлено на основе пищевого широкогорлого термоса объемом 1, 0 л. Внутрь его помещен оттаиватель, он состоит из лифта для пайет и термометра. Лифт  сообщается с термосом через прорези в его стенке. Термос заполняется нагретой водой; при необходимости доливают холодную или горячую воду, пока стрелка термометра не остановится на цифре «38». Специальным пинцетом извлекают минипайету из сосуда Дьюара и погружают на 10 с в лифт, заполненный до краев водой. Этим же пинцетом пайету достают из лифта и кладут на салфетку для удаления влаги.

Гранулированную сперму барана оттаивают гидростатическим или гидродинамическим способом; основное условие — немедленное отделение жидкой фазы от твердой.

 

 

Рис. 32. Оттаиватель спермы барана

Простейший гидростатический оттаватель состоит из внешнего сосуда 1 и внутренней кюветы 2 (рис.32 ), изготовленной из металла или стекла. Перед началом работы в межстенную полость 3 заливают горячую воду и после стабилизации её температуры на уровне 60⁰С в кювету засыпают 15-20 гранул; в нижней её части имеется отверстие 4 для стока оттаявшей спермы во флакон 5.

Оттаянная сперма барана должна быть использована в течение 15 мин.

Замороженную сперму хряка оттаивают с помощью специального устройства. Оттаянную сперму разливают во флаконы по 100 мл и погружают на 30-35 с в водяной термостат.

 

⇐ Предыдущая14151617181920212223Следующая ⇒

Поделиться: