По медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии

Стр 1 из 3Следующая ⇒

Им. С. И. Георгиевского

Практические задания

По медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии

«Морфология и физиология микроорганизмов.

Общая вирусология»

(учебно-методическое пособие для студентов лечебного факультета)

Ф.И.О. ________________________________________________________

Факультет ____________________________________________________

Курс __________________________________________________________

Группа ________________________________________________________

Симферополь – 2015 г.

Дата __________________

Занятие №1

Тема: Организация микробиологической лаборатории. Правила работы. Выполнение требований биологической безопасности. Методы микробиологического исследования. Методы микроскопического исследования. Техника микроскопии. Методы окраски. Морфология микробов (бактерий и грибов).

Вопросы для обсуждения:

Микробиологическая лаборатория.
Типы лабораторий: бактериологическая, паразитологическая, микологическая, вирусологическая, иммунологическая, специальная (особо-опасных инфекций).
Структура бактериологической лаборатории.
Оборудование бактериологической лаборатории.
Правила работы в микробиологической лаборатории.
Методы лабораторной диагностики инфекционных болезней.
Микроскопия и её методы:

1) световая;	4) люминесцентная;
2) в тёмном поле;	5) электронная.
3) фазовоконтрастная;

Основные формы бактерий
Методы окраски бактерий.
Морфология грибов.

Практические задания:

1. Ознакомиться с организацией и правилами работы кафедры микробиологии как микробиологической лаборатории.

2. Изучить методы микроскопии и правила работы с иммерсионным объективом.

3. Записать методы микробиологического исследования:

_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

4. Микроскопировать окрашенный препарат Sarcina flava. Зарисовать.

Рис. 1. Sarcina flava

5. Микроскопировать окрашенные препараты с бактериями различной формы:

а) кокки (Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes);

Рис. 2. Стафилококк _______________________

Рис. 3. Стрептококк _______________________

б) палочковидные (Escherichia coli, Bacillus anthracis);

Рис. 4. Кишечная палочка _______________________

Рис. 5. Возбудитель сибирской язвы __________________________

в) извитые (Treponema pallidum).

Рис. 6. Возбудитель сифилиса ___________________________

6. Микроскопировать окрашенные препараты дрожжеподобных грибов (Candida spp.) и плесневых грибов (Mucor spp.).

Рис. 7. Мукор ________________

Рис. 8. Кандида ________________

Подпись преподавателя _________________

Дата__________________

Занятие №2

Тема: Прокариоты и эукариоты. Классификация прокариот. Структура бактериальной клетки. Капсулы. Жгутики. Споры. Методы их выявления. Сложные методы окраски. Окраска по Граму.

Вопросы для обсуждения:

Отличия прокариотов от эукариотов.
Классификация прокариотов.
Ультраструктура бактериальной клетки и методы выявления элементов ультраструктуры.
Нуклеоид, его функция.
Цитоплазма, органоиды, включения.
Цитоплазматическая мембрана и мезосомы.
Клеточная стенка бактерий, ее строение.
Жгутики. Строение, функция, методы обнаружения.
Капсула, значение, методы выявления.
Споры. Методы окраски спор.
Сложные методы окраски бактерий.
Метод Грама, его практическое значение.
Окраска по Цилю-Нильсену, её практическое применение.

Практические задания:

1. Окрасить по Граму фиксированный препарат, приготовленный из смеси бактерий (Escherichia coli и Bacillus cerеus), микроскопировать.

Рис. 1. Препарат из смеси бактерий ______________________________ ______________________________ Окраска_____________________

2. Микроскопировать препарат Mycobacterium tuberculosis в мокроте больного, окрашенный по Цилю-Нильсену.

Рис. 2. Возбудитель туберкулёза ____________________________ Окраска_____________________

3. Выявить гранулы волютина в окрашенных по Нейссеру/Лёффлеру мазках из Corynebacterium diphtheriae, зарисовать.

Рис. 3. Гранулы волютина Окраска ________________________

4. Приготовить препарат-мазок из культуры Klebsiella pneumoniae, окрасить по Бурри-Гинсу, микроскопировать, зарисовать.

Рис. 4. Капсулы Окраска ________________________

5. Микроскопировать препараты, приготовленные из спорообразующих бактерий (бациллы и клостридии), окрашенных по Пешкову/Ожешко, зарисовать.

Рис. 5. Споры бацилл и клостридий Окраска ________________________

6. Наблюдать подвижность микроорганизмов в препарате «раздавленная капля» из сенного настоя.

7. Определить тип строения клеточной стенки и отметить основные её структурные компоненты.

8. Написать обязательные и непостоянные элементы бактериальной клетки:

Обязательные элементы Непостоянные элементы

__________________________ ___________________________

Подпись преподавателя _________________

Дата__________________

Занятие №3

Тема: Физиология прокариот: питание бактерий. Культивирование бактерий. Питательные среды. Методы стерилизации и дезинфекции.

Вопросы для обсуждения:

Метаболизм бактерий: конструктивный и энергетический.
Типы питания бактерий.
Ферменты бактерий и их роль в метаболизме.
Факторы, влияющие на рост и размножение бактерий.
Прототрофы и ауксотрофы.
Питательные среды, их классификация и назначение.
Требования, предъявляемые к приготовлению питательных сред.
Стерилизация. Методы стерилизации.
Дезинфекция. Методы дезинфекции.
Дезинфектанты и антисептики.

Практические задания:

1. Изучить питательные среды и их компоненты:

а) компоненты питательных сред: пептон, агар-агар, желатин, NaCl и другие;

б) питательные среды: мясо-пептонный бульон (МПБ), мясо-пептонный агар (МПА), кровяной агар, сывороточный агар, среды Эндо и Плоскирева.

2. Заполнить таблицу:

Таблица 1.

Классификация ферментов

Биохимическая	Генетическая	Биологическая
конститутивные ферменты(кодируются обычно генами хромосомы)	индуцибельные ферменты (чаще кодируются генами плазмид и транспозонов)	Экзо- ферменты	Эндо- ферменты

3. Ознакомиться с применяемой в микробиологических исследованиях лабораторной посудой (чашки Петри, пипетки, шпатели, колбы, пробирки) и правилами подготовки ее к стерилизации.

4. Ознакомиться с работой парового (автоклава) и сухожарового стерилизаторов, бактериальных фильтров.

5. Ознакомиться с наиболее часто применяемыми дезинфектантами (хлорамин, хлорная известь) и антисептиками (70% этанол, 5% спиртовый раствор йода, растворы калия перманганата, хлоргексидина, мирамистина и другие).

6. Заполнить таблицу:

Таблица 2.

№ п/п	Метод	Аппаратура	Режим стерилизации	Стерилизуемый материал
	Прокаливание
	Горячий воздух
	Пар под давлением
	Текучий пар (дробная стерилизация)
	Щадящее прогревание (тиндализация)

Стерилизация - __________________________________________________

________________________________________________________________

Дезинфекция - ___________________________________________________

________________________________________________________________

Асептика - ______________________________________________________

________________________________________________________________ Антисептика - ___________________________________________________

________________________________________________________________

Подпись преподавателя ________________

Дата__________________

Занятие №4

Тема: Дыхание, размножение и рост бактерий. Выделение чистой культуры аэробных бактерий (1-й день исследования).

Вопросы для обсуждения:

1. Дыхание бактерий, сущность процесса.

2. Типы дыхания бактерий.

3. Ферменты и структуры клетки, принимающие участие в процессе дыхания.

4. Рост и способы размножения бактерий.

5. Механизм деления бактериальной клетки.

6. Фазы размножения культуры бактерий в стационарных условиях.

7. Культивирование аэробных бактерий. Факторы, влияющие на рост и размножение бактерий.

8. Бактериологический метод исследования, его этапы.

Практические задания:

1. Заполнить таблицу:

Дыхательные ферменты	Наличие дыхательных ферментов у:
аэробов	факультативных анаэробов	облигатных анаэробов
ДегидрогиназыНАД
Флавинзависимые дегидрогиназы ФАД
Убихиноны Co Q
Цитохромы: a, b, c (гемопротеины)

2. Изучить технику посева исследуемого материала на плотные и в жидкие питательные среды.

3. Приготовить мазок из исследуемого материала (смесь бактерий), окрасить по Граму и микроскопировать.

4. Посеять исследуемый материал в чашку Петри с мясо-пептонным агаром.

5. Поставить посевы в термостат.

6. Оформить протокол исследования культуры аэробных бактерий (1-ый день).

Протокол

Занятие №5

Тема: Факторы влияющие на рост и размножение бактерий. Выделение чистой культуры аэробных бактерий (2 и 3-й дни исследования).

Вопросы для обсуждения:

1. Охарактеризивать вид, подвид, штамм, клон бактерий.

2. Культуральные свойства бактерий и способы их изучения.

3. Чистая и смешанная культура бактерий.

4. Оценка чистоты культур аэробных бактерий на 2 этапе бактериологического исследования.

Практические задания:

1. Ознакомиться с характером роста бактерий разных видов на плотных и в жидких питательных средах.

2. Изучить культуральные свойства бактерий, входящих в состав бактериальной смеси, посеянной на предыдущем занятии на чашки Петри с МПА (см. протокол, занятие № 4).

3. Выделить изолированные колонии двух типов (№1 и № 2), приготовить из них мазки, окрасить по Граму, микроскопировать.

4. Пересеять колонии культур №1 и №2 на скошенный мясо-пептонный агар (МПА).

5. Исследовать характер роста культур №1 и №2 на скошенном МПА и определить чистоту культур.

6. Пересеять чистые культуры №1 и №2 со скошенного МПА на дифференциально-диагностические среды.

7. Оформить протокол исследования культур аэробных бактерий (2 и 3 дни).

Протокол

Занятие №6

Тема: Ферменты бактерий. Идентификация чистых культур бактерий. Анаэробные бактерии. Выделение чистой культуры и идентификация анаэробных бактерий. Особенности культивирования и идентификации грибов.

Вопросы для обсуждения:

Принципы идентификации аэробных бактерий.
Способы определения ферментативных свойств бактерий.
Среды Гисса, их состав и использование.
Методы определения продукции бактериями аммиака, индола и сероводорода.
Какие свойства бактерий необходимо изучить для определения их видовой принадлежности?
Методы создания анаэробных условий для культивирования облигатных анаэробов.
Анаэростат, принцип его работы.
Среда Китта-Тароцци, ее назначение.
Среда Вильсон-Блера, ее применение.
Методы выделения чистой культуры облигатных анаэробов.
Какие свойства изучают у облигатных анаэробов для определения их видовой принадлежности?
Особенности культивирования и идентификации грибов.

Практические задания:

1. Произвести учет ферментативных свойств культур №1 и №2.

2. Определить вид выделенных бактерий с помощью дифференциально-диагностических таблиц.

3. Закончить оформление протокола бактериологического исследования аэробных бактерий.

Таблица 1.

Дифференциально-диагностические свойства некоторых видов бактерий рода Bacillus

Вид	Ферментация	Образование	Подвижность	Оксидаза	Каталаза
Глюкозы	лактозы	сахарозы	мальтозы	маниита	индола	H₂S	спор
B. cereus	К	К/-	К/-	К	-	-	+	+	+	+	+
B. subtilis	К	К/-	К/-	К	К	-	-	+	+	+	+

Таблица 2.

Характеристика некоторых свойств Escherichia сoli

Ферментация Образование Подвижность Оксидаза Каталаза Образование спор

Глюкозы лактозы сахарозы мальтозы маниита индола H₂S

КГ КГ - КГ КГ + - + - + -

Протокол

Занятие №7

Тема: Вирусы. Классификация. Морфология и строение вирионов. Взаимодействие вируса с клеткой.

Вопросы для обсуждения:

Классификация вирусов.
Общая характеристика царства вирусов.
Морфология вирионов.
Структура простых и сложных вирионов.
Капсиды вирионов, типы симметрии. Форма и размер вирионов.
Строение внешней оболочки (суперкапсида).
Вирусный геном, его структура.
Неструктурные вирусные белки.
Стадии взаимодействия вируса с клеткой: продуктивная и интегративная формы.
Последствия интеграции вирусного генома в геном клетки.
Особенности репликации ДНК- и РНК-содержащих вирусов. Вирусы с позитивной и негативной полярностью.
Синтез вирусных белков.
Мишени для действия противовирусных препаратов.
Противовирусные химиотерапевтические препараты (общие понятия).

Практические задания:

1. Изучить классификацию вирусов, морфологию и строение вирионов с помощью таблиц.

2. Зарисовать структуру простого и сложного вириона.

Рис. 1. Схема строения простого Рис. 2. Схема строения сложного

вириона. вириона.

3. Подписать типы симметрии капсидов:

5. Изучить стадии взаимодействия вируса с клеткой.

1._________________________ 2. ________________________ 3. ________________________ 4. ________________________ 5.________________________ 6.________________________

6. Заполнить таблицу:

Эклипс-фаза для следующих вирусов:
Тип вируса	+ РНК	ДНК	Ретровирус
Транскрипция вируса
Репликация вирусного генома

Пример заполнения таблицы:

Транскрипция вируса	“-” РНК	РНК зависимая РНК-полимераза ---------------->	“+” РНК	-------> R -------> рибосома	Синтез белка
Репликация вирусного генома	“-” РНК	Вирусная РНК-полимераза ---------------->	“+” РНК	Вирусная РНК-полимераза ---------------->	“-” РНК

Подпись преподавателя ________________

Дата__________________

Занятие №8

Тема: Методы культивирования вирусов. Индикация вирусов в клеточных культурах и курином эмбрионе. Вирусы бактерий (фаги). Идентификация бактерий с помощью фагов.

Вопросы для обсуждения:

1. Вирусологический метод исследования, его этапы.

2. Методы культивирования вирусов.

3. Получение и приготовление первичных, перевиваемых и полуперевиваемых культур клеток.

4. Что представляют собой однослойные, суспензионные и органные культуры клеток?

5. Способы заражения куриного эмбриона.

6. Индикация вирусов в клеточных культурах и курином эмбрионе.

7. Культивирование вирусов в организме лабораторных животных (биологический метод исследования).

8. Ультраструктура и морфологические типы вирусов бактерий.

9. Взаимодействие вирулентного фага с бактериальной клеткой.

10. Взаимодействие умеренного фага с бактериальной клеткой и результат этого процесса.

11. Отличия лизогенных бактерий от нелизогенных. Фаговая конверсия.

12. Практическое использование вирусов бактерий.

13. Тесты на фагочувствительность и фаготипирование бактерий.

Практические задания:

1. Ознакомиться с методами приготовления клеточных культур и назначением сред (199, Игла), солевых растворов (раствор Хенкса, раствор фосфатного буфера с антибиотиками), специальных реактивов (трипсин, версен).

2. Изучить методы заражения и вскрытия куриного эмбриона. Подписать способы заражения, применяемые для накопления различных вирусов.

3. Микроскопировать клеточную культуру Hela, зараженную энтеровирусами, с целью обнаружения цитопатического действия вирусов.

4. Выявить цитопатическое действие энтеровирусов по образованию бляшек в культуре клеток под бентонитовым покрытием.

5. Поставить реакцию гемагглютинации с аллантоисной жидкостью куриного эмбриона, зараженного вирусом гриппа, по схеме.

6. Учесть результат реакции гемагглютинации (РГА) и определить гемагглютинационный титр вируса. Данные внести в таблицу.

Таблица 1.

Схема постановки реакции гемагглютинации для определения титра вируса

Ингредиенты в мл	Лунки	Контроль эритроцитов
1-я	2-я	3-я	4-я	5-я	6-я
0, 85% раствор NaCl	0, 9	0, 5	0, 5	0, 5	0, 5	0, 5
Аллантоисная жидкость	0, 1	→	→	→	→
Полученные разведения	1: 10	1: 2 0	1: 40	1: 80	1: 160
1% взвесь куриных эритроцитов	0, 5	0, 5	0, 5	0, 5	0, 5	0, 5
Учет результатов

Условные обозначения:

(+) - полная агглютинация эритроцитов, имеет вид зонтика

(-) - компактный осадок эритроцитов, как в контроле, имеет вид «пуговки»

7. Зарисовать видимые проявления РГА:

Лунки полистиролового планшета

Контроль

Занятие №9

Контрольное занятие №1.

Тема: «Морфология, структура и культивирование микроорганизмов».

1. Принципы микроскопии. Основные методы микроскопирования. Методы окраски. Изучение морфологии и отдельных структур микроорганизмов.

2. Систематика микроорганизмов (прокариоты, грибы, простейшие, вирусы). Принципы классификации. Понятие о виде как основной таксономической единице. Таксономические категории. Номенклатура. Основные отличия прокариотов от эукариотов.

3. Строение и химический состав клеточной стенки грамположительных и грамотрицательных бактерий. Бактерии с дефектом синтеза клеточной стенки: протопласты, сферопласты, L – формы.

4. Капсулы. Жгутики. Пили. Химический состав и функциональное значение этих образований у бактерий. Методы выявления. Патогенные представители.

5. Споры и спорообразование. Химический состав и функциональное значение спор. Методы выявления. Патогенные представители.

6. Метаболизм бактерий. Ферменты бактерий и их роль в обмене веществ. Конститутивные и индуцибельные, экзо- и эндо- ферменты. Практическое использование биохимической активности бактерий.

7. Типы и механизмы питания бактерий. Транспорт питательных веществ в клетку.

8. Дыхание бактерий. Основные типы биологического окисления субстрата. Аэробы, анаэробы, факультативные анаэробы, микроаэрофилы.

9. Рост и размножение бактерий. Фазы размножения популяции бактерий в стационарных условиях. Периодическое культивирование. Непрерывное культивирование, его значение в биотехнологии.

10. Основные принципы и методы культивирования бактерий. Факторы, влияющие на рост и размножение. Классификация питательных сред и требования, предъявляемые к ним.

11. Бактериологический метод исследования, его этапы. Выделение чистых культур аэробных бактерий. Изучаемые свойства. Ключевые признаки в идентификации вида.

12. Методы выделения чистых культур анаэробных бактерий. Изучаемые свойства. Ключевые признаки в идентификации вида.

13. Царство вирусов. Классификация. Морфология и строение вирионов. Химический состав, функции структурных элементов. Прионы. Вироиды. Работы Д.И. Ивановского.

14. Механизмы взаимодействия вирусов с соматической клеткой. Продуктивная и интегративная формы. Особенности репродукции РНК- и ДНК – содержащих вирусов.

15. Методы культивирования вирусов в культурах клеток, курином эмбрионе, в организме лабораторных животных. Классификация и характеристика клеточных культур. Среды № 199, Игла, их назначение.

16. Методы индикации вирусной репродукции в клеточных культурах и курином эмбрионе. Сущность реакций вирусной гемадсорбции и гемагглютинации, их применение.

17. Морфология и ультраструктура вирусов бактерий - бактериофагов. Стадии взаимодействия вирулентного и умеренного фага с бактериальной клеткой. Лизогения. Фаговая конверсия. Практическое применение фагов.

18. Патогенные грибы. Морфология, структура, культивирование.

Дата__________________

Занятие №10

Тема: Генетика микроорганизмов. Структура генетического аппарата у бактерий и вирусов. Модификации. Мутации. Генетические рекомбинации. Генетика вирусов. Особенности изменчивости у вирусов.

Вопросы для обсуждения:

1. Организация генетического материала бактерий и вирусов. Генотип и фенотип.

2. Внехромосомные факторы наследственности бактерий: IS-последовательности, транспозоны, плазмиды, вирусы.

3. F – плазмида, её функция. Конъюгативные и неконъюгативные плазмиды.

4. R – плазмида, её значение. Методы выявления чувствительности бактерий к антибиотикам.

5. Плазмиды бактериоциногенности. Определение бактериоциновара и бактериоциногеновара.

6. Плазмиды, кодирующие признаки патогенности.

7. Сущность модификационной изменчивости.

8. Мутации. Молекулярный механизм мутаций. Репарации.

9. Генетические рекомбинации: трансформация, трансдукция, коньюгация.

10. Основы генетической инженерии и биотехнологии.

Практические задания:

1. Выявить изменчивость морфологических свойств бактерий под воздействием:

а) фенола (микроскопировать мазки из колоний Proteus vulgaris, образованных на обычном МПА и на 0, 1% феноловом МПА, окрашенных фуксином Пфейффера).

Рис. 1. Proteus vulgaris в препарате Рис. 2. Proteus vulgaris в препарате

из колонии на МПА из колонии на 0, 1% феноловом МПА

б) пенициллина (микроскопировать мазки из колоний Bacillus аnthracis, образованных на МПА с пенициллином, окрашенных метиленовым синим - «жемчужное ожерелье»).

Рис. 3. B. anthracis в препарате Рис. 4. B. anthracis в препарате из

из колоний на МПА колоний на МПА с пенициллином

(«жемчужное ожерелье»)

2. Изучить изменчивость культуральных свойств: S- и R- формы колоний эшерихий.

3. Определить фенотипические проявления R-плазмиды бактерий (множественная устойчивость к антибиотикам) методом стандартных дисков.

4. Ознакомиться с фенотипическими проявлениями Col-плазмиды с помощью методов колицинотипирования и колициногенотипирования.

Рис. 5. Метод колицинотипирования Рис. 6. Метод колициногенотипирования

Вывод: культура E. сoli чувствительна к колицинам__________________

Вывод: культура E. сoli продуцирует колицины: ______________________

5. Ознакомиться с фенотипическими проявлениями Hly-плазмиды (продукция гемолизина) у E. coli на кровяном агаре.

Рис. 7. Продукция гемолизина Е.coli

6. Выявить и изучить ауксотрофные мутанты эшерихий, полученные под воздействием ультрафиолетовых лучей:

а) сравнить результаты посева методом реплик облученной УФ-лучами культуры на полноценной (МПА) и минимальной средах;

Рис. 8.

Рост культуры на полноценной среде

Рис. 9. Рост культуры на минимальной среде

б) установить потребности выделенных ауксотрофных мутантов в метаболите на селективной среде, содержащей аминокислоты.


Лизин	Лейцин	Гистидин	Метионин	Триптофан

Вывод: ______________________________________________________

7. Учесть результаты опыта конъюгации между E. coli F⁺, прототроф, Str^s и E. coli F^-, ауксотроф по метионину, Str^r. Определить признак, приобретенный рекомбинантом, образующим колонии на минимальной плотной среде, содержащей стрептомицин 1000 мкг/мл.

Записать результаты опыта конъюгации.

Донор E. coli F⁺, Str ^sх Реципиент E. coli F^-, Met ^-, Str ^r

Селективная среда: минимальная плотная среда, содержащая стрептомицин 1000мкг/мл.

Выявлены колонии рекомбинантов на селективной среде в результате постановки опыта конъюгации.

Донор ____________________________________________________________

Реципиент ________________________________________________________

Рекомбинант ______________________________________________________

Вывод: ___________________________________________________________

Подпись преподавателя ________________

Дата__________________

Занятие №11

Тема: Генетические методы исследования в диагностике инфекционных болезней. Полимеразная цепная реакция. Гибридизация нуклеиновых кислот. Основы генной инженерии и биотехнологии.

Вопросы для обсуждения:

Какие свойства нуклеиновых кислот положены в основу молекулярно-генетических методов исследования?
Чем обусловлена геноидентификация видов организмов?
Сущность метода молекулярной гибридизации (МГ) нуклеиновых кислот.
«Молекулярный зонд», его назначение.
Варианты постановки МГ нуклеиновых кислот и результатов ее учета.
Отличия полимеразной цепной реакции (ПЦР) от метода МГ нуклеиновых кислот.
Ингредиенты, необходимые для постановки ПЦР.
Функция «праймеров».
Этапы цикла ПЦР.
Методы регистрации ПЦР.
Рестрикционный анализ (сиквенс-анализ), его применение.
Риботипирование, его практическое использование.
Основы генной инженерии и биотехнологии.

Практические задания:

1. Изучить схемы постановки:

а) метода молекулярной гибридизации нуклеиновых кислот;

б) полимеразной цепной реакции.

2. Учесть результаты ПЦР на агарозном геле после разделения продуктов амплификации ДНК микроорганизмов методом электрофореза и окрашивания этидием бромида. Выявить геномные фрагменты и сопоставить их с контрольным образцом.

3. Дорисовать схему постановки метода молекулярной гибридизации.

	Двуцепочечная ДНК-мишень,

	Денатурация ДНК
	Присоединение ДНК-зонда (возможные метки: изотоп, ФИТЦ, фермент)
	Разделение одно- и двуцепочечных фрагментов ДНК
	Детекция двуцепочечных ДНК

Рис. 1. Схема постановки метода молекулярной гибридизации.

4. Дорисовать схему постановки метода молекулярной ПЦР.

Ингредиенты для постановки ПЦР: праймеры, азотистые основания, термостабильная ДНК-полимераза.

	Двуцепочная ДНК-мишень
	Праймеры, комплементарные консервативным последовательностям нуклеиновых кислот
1-й цикл
	1-й этап. Денатурация ДНК при 90-95⁰С
	2-й этап. Отжиг праймеров при 50-65⁰С
	3-й этап. Достраивание комплементарнй цепи ДНК при участии ДНК-полимеразы при 72⁰С

Повторные циклы приводят к накоплению последовательности ДНК, ограниченной праймерами.

Детекция двуцепочечных ДНК.

Рис. 2. Схема постановки полимеразной цепной реакции (ПЦР)

Подпись преподавателя ________________

Дата__________________

Занятие №12

Тема: Антимикробные препараты. Антибиотики. Врожденная и приобретенная резистентность бактерий к антибиотикам.Определение чувствительности бактерий к антибиотикам. Антимикотики. Антивирусные препараты.

Вопросы для обсуждения:

1. Определение понятия «антибиотики».

2. Избирательная активность антибактериальных препаратов.

3. Классификация антибиотиков (происхождение, химический состав, спектр действия, механизм действия).

4. Основные группы антибиотиков и механизмы их противомикробного действия.

5. Механизмы устойчивости микроорганизмов к антибиотикам.

6. Генетические основы резистентности микроорганизмов к антибиотикам.

7. Методы определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам (метод дисков, метод серийных разведений, геноиндикация – ПЦР).

8. Применение автоматизированных анализаторов для определения чувствительности бактерий к антибиотикам.

9. Измерение эффективности действия антибиотиков: минимальная ингибирующая (подавляющая) концентрация (МИК, МПК). Минимальная бактерицидная концентрация (МБК).

10. Пути преодоления устойчивости микроорганизмов к антибиотикам.

11. Лечебные химиотерапевтические противогрибковые препараты.

12. Противовирусные химиотерапевтические препараты (общие понятия).

13. Классификация противовирусных химиопрепаратов в зависимости от механизма действия, мишени для действия препаратов:

§ ингибиторы депротеинизации (ремантадин);

§ ингибиторы синтеза нуклеиновых кислот (рибавирин);

§ ингибиторы обратной транскриптазы ретровирусов (азидотимидин, зидовудин);

§ ингибиторы вирусных протеаз (саквинавир).

Практические задания:

1. Определить чувствительность S. aureus к антибиотикам методом стандартных дисков и оценить полученные результаты.

12 3 Следующая ⇒