Архитектура Аудит Военная наука Иностранные языки Медицина Металлургия Метрология Образование Политология Производство Психология Стандартизация Технологии |
IV Перечень лабораторных работ, наглядных пособий и средств ТСО. ⇐ ПредыдущаяСтр 4 из 4
Наглядные пособия: Рисунки: 1. Реакции последовательного восстановления убихинона вдыхательной цепи; 2. Антиоксиданты водной фазы; 3. Механизм антиоксидантного действия витамина Е; 4. Окислительно-восстановителные превращения α -токоферола и сопряженных с ним коантиоксидантов; 5. Витамин С, 6. Витамин А; 7. Повреждающее действие свободных радикалов на компоненты клетки; 8. Образование супероксида в ЦПЭ, V Наименование лабораторной работы: VI Перечень вопросов для проверки исходного уровня знаний: ЛАБОРАТОНАЯ РАБОТА №1 Количественное определение малонового диальдегида в ткани печени. ОБОРУДОВАНИЕ: баня, ФЭК. ПРИНЦИП МЕТОДА. Основан на определении малонового диальдегида (МДА) как показателя перекисного окисления липидов при инкубации гомогенатов тканей в присутствии кислорода. В присутствии прооксидантов МДА определяется по специфической цветной реакции в кислой среде с 2-тиобарбитуровой кислотой (ТБК). ХОД РАБОТЫ. В трех центрифужных пробирках приготовить инкубационную смесь реактивов по следующей схеме:
Все пробирки поместить в термостат при 37оС на 15 минут. После инкубации остановить реакцию в 1 и 3 пробирках, добавляя в них по 1 мл ТХУ с ЭДТА, перемешать. Все пробирки центрифугировать в течение 20 минут при 3000 об/мин. Надосадочную жидкость осторожно слить в чистые пробирки. Затем в другие чистые пробирки отобрать по 4 мл надосадочной жидкости, добавить по 2 мл свежеприготовленного раствора ТБК (тиобарбитуровая кислота) и поместить пробирки в кипящую баню на 15 минут. Пробирки охладить в холодной воде и определить оптическую плотность на ФЭКе с зеленым светофильтром (длина волны 540 нм) в кювете 10 мм. РЕЗУЛЬТАТЫ:
Активность ПОЛ выражается количеством микромолей МДА, накопленного за период инкубации в 1 мл гомогената . , где Х - количество МДА, накопленного за период инкубации в 1 мл гомогената, - молярный коэффициент экстинкции для малонового диальдегида при реакции с ТБК, численно равный 0.156. Dоп и D конт- оптические плотности " опытной" и " контрольной" пробирок соответственно. Рассчитать активность ПОЛ в 1 и 3 пробирках и сделать вывод об активности ПОЛ и влиянии ионов Fe2+и аскорбата на перекисное окисление липидов. РАСЧЕТ И ВЫВОДЫ:
ЛАБОРАТОНАЯ РАБОТА №2 Количественное определение каталазы в крови. ПРИНЦИП МЕТОДА. В основе количественного определения активности каталазы лежит определение количества перекиси водорода, разложенной ферментом за определенный промежуток времени. О количестве расщепленной перекиси водорода судят по разности количества перманганата калия. израсходованного на титрование перекиси водорода до и после действия каталазы. Активность каталазы выражают с помощью каталазного числа. Каталазным числом называют количество мг перекиси водорода, которое разлагается под действием 1 мкл крови. ХОД РАБОТЫ. Работу проводят по следующей схеме:
Действие каталазы в кислой среде прекращается, т. к. этот фермент действует при рН=7, 4. Поскольку в контрольную пробу серную кислоту приливали до добавления перекиси водорода, то в контроле все добавленное количество перекиси водорода остается нерасщепленным. Содержимое каждого стаканчика необходимо титровать раствором перманганата калия до розового окрашивания, не исчезающего в течение 30 сек. Рассчитать каталазное число (КЧ) по формуле: КЧ = (А - В) х 1, 7, где: А - кол-во 0, 1 N раствора КМnО4, пошедшее на титрование контрольной пробы в мл. В - кол-во 0, 1N раствора КМnО4, пошедшее на титрование опытной пробы в мл. 1, 7 - это коэффициент, показывающий, сколько мг Н2О2содержится в 1мл 0, 1н. раствора Н2О2. В норме каталазное число колеблется от 10 до 15 единиц у взрослых и 7, 5 - 9, 9 единиц у детей. РАСЧЕТ И ВЫВОДЫ: Самостоятельная работа: составление тестов и кроссворда по теме ПОЛ. Тестовый контроль: Тема: ПОЛ. 1. К активным формам кислорода относят: 1. ОН- - гидроксильный радикал; 2. супероксидный анион; 3. Н2О2 - пероксид водорода 4. все перечисленное Отв.: 4
2. Образование активных форм кислорода происходит: 1. в процессе переноса электронов в митохондриальной дыхательной цепи; 2. в реакциях, которые катализируются оксидазами (образуется перекись водорода), в том числе в свободнорадикальных процессах, совершающихся в фагоцитах; 3. в реакциях микросомального окисления при обезвреживании веществ с участием цитохрома Р-450; 4. в реакциях самопроизвольного (неферментативного) окисления веществ (гемоглобина, ферредоксинов, адреналина и др.); 5. в биологических системах с наличием ионов металлов с переменной валентностью и, прежде всего, железа (свободных атомов, так называемых внегемовых); 6. верно все Отв.: 6
3. Перечислите ряд причин вызывающих активацию ПОЛ в тканях: 1. снижение поступления в организм алиментарных антиоксидантов (АО), таких как: токоферол, аскорбат, биофлавоноиды и др.; 2. стресс различного генеза, в частности эмоциональный (под влиянием катехоламинов и кортикостероидов в кровь поступает избыток жирных кислот и кислород); 3. внешние химические прооксиданты (пестициды, лекарственные окислители, алкоголь, продукты смога и т.д.); 4. физические факторы (повышенный радиоактивный фон, ультрафиолетовое облучение, электромагнитное поле, ультразвук с интенсивностью выше 2 Вт/см ); 5. избыточное и несбалансированное потребление жиров и углеводов на фоне недостаточного их расходования; 6. гипокинезия с низким уровнем биологического окисления ферментов, т.е. сниженный уровень восстановления пиридиннуклеотидов; 7. врожденные энзимопатии антиоксидантных ферментов (каталазы, глутатионредуктазы, глутатионпероксидазы, глюкозо-6-фосфат-дегидрогеназы); 8. падение с возрастом активности антиоксидантных ферментов. 9. верного ответа нет 10. верно все перечисленное Отв.: 10
4. Антиоксиданты нужны для…, исключите неправильный ответ: 1. обновления липидного состава мембран; 2. синтеза эйкозаноидов 3. обезвреживания ксенобиотиков и токсичных продуктов метаболизма; 4. функционирования иммунной системы. 5. синтеза глюкогона Отв.: 1, 2, 4, 5
5. Оксидативный стресс приводит: 1. Повреждение ДНК, белков, липидов мембран. 2. Канцерогенез, нейродегенеративные болезни, атеросклероз, сахарный диабет, сердечно сосудистые заболевания, старение. 3. 1, 2 Отв.: 1, 2
6. Этот витамин ингибирует свободнорадикальное окисление путём отдачи электрона, что приводит к инактивации радикала липида и превращается в стабильный, полностью окисленный токоферолхинон: 1. В1 2. РР 3. Е 4. С 5. Д Отв.: 3
7. Вит. A: 1. увеличивает антиоксидантное действие Вит. Е; Вместе с Вит. E и Вит. С; 2. активирует включение Se в состав глутатионпероксидазы; 3. препятствует окислению SH-групп белков и пептидов. 4. может быть прооксидантом 5. все верно Отв. 5
7. Структура, какого витамина представлена ниже:
Отв.: 1 9. Этот витамин активирует ПОЛ так как является полиненасыщенным спиртом и легко окисляется кислородом может быть прооксидантом (в высоких дозах):
1. К: 2. А; 3. Д; 4. Е; 5. РР Отв.: 2
Популярное:
|
Последнее изменение этой страницы: 2016-06-05; Просмотров: 1104; Нарушение авторского права страницы