IV Перечень лабораторных работ, наглядных пособий и средств ТСО.

Наглядные пособия:

Рисунки: 1. Реакции последовательного восстановления убихинона вдыхательной цепи; 2. Антиоксиданты водной фазы; 3. Механизм антиоксидантного действия витамина Е; 4. Окислительно-восстановителные превращения α -токоферола и сопряженных с ним коантиоксидантов; 5. Витамин С, 6. Витамин А; 7. Повреждающее действие свободных радикалов на компоненты клетки; 8. Образование супероксида в ЦПЭ,

V Наименование лабораторной работы:

VI Перечень вопросов для проверки исходного уровня знаний:

ЛАБОРАТОНАЯ РАБОТА №1

Количественное определение малонового диальдегида в ткани печени.

ОБОРУДОВАНИЕ: баня, ФЭК.

ПРИНЦИП МЕТОДА.

Основан на определении малонового диальдегида (МДА) как показателя перекисного окисления липидов при инкубации гомогенатов тканей в присутствии кислорода. В присутствии прооксидантов МДА определяется по специфической цветной реакции в кислой среде с 2-тиобарбитуровой кислотой (ТБК).

ХОД РАБОТЫ.

В трех центрифужных пробирках приготовить инкубационную смесь реактивов по следующей схеме:

Реактивы	1 пробирка “опытная”	2 пробирка “контроль”	3 пробирка “опытная” с добавлением про- оксидантов
Трис-буфер 0, 15 М	3, 4 мл	3, 4 мл	1, 4 мл
Сульфат железа FeSO4	-	-	1 мл
Аскорбиновая кислота	-	-	1 мл
ТХУ 10 раствор с ЭДТА	-	1 мл	-
Гомогенат печени	1, 0 мл	1, 0 мл	1, 0 мл

Все пробирки поместить в термостат при 37оС на 15 минут. После инкубации остановить реакцию в 1 и 3 пробирках, добавляя в них по 1 мл ТХУ с ЭДТА, перемешать. Все пробирки центрифугировать в течение 20 минут при 3000 об/мин. Надосадочную жидкость осторожно слить в чистые пробирки. Затем в другие чистые пробирки отобрать по 4 мл надосадочной жидкости, добавить по 2 мл свежеприготовленного раствора ТБК (тиобарбитуровая кислота) и поместить пробирки в кипящую баню на 15 минут. Пробирки охладить в холодной воде и определить оптическую плотность на ФЭКе с зеленым светофильтром (длина волны 540 нм) в кювете 10 мм.

РЕЗУЛЬТАТЫ:

 

 

Активность ПОЛ выражается количеством микромолей МДА, накопленного за период инкубации в 1 мл гомогената

.

, где

Х - количество МДА, накопленного за период инкубации в 1 мл гомогената,

- молярный коэффициент экстинкции для малонового диальдегида при реакции с ТБК, численно равный 0.156.

Dоп и D конт- оптические плотности " опытной" и " контрольной" пробирок соответственно.

Рассчитать активность ПОЛ в 1 и 3 пробирках и сделать вывод об активности ПОЛ и влиянии ионов Fe2+и аскорбата на перекисное окисление липидов.

РАСЧЕТ И ВЫВОДЫ:

 

 

ЛАБОРАТОНАЯ РАБОТА №2

Количественное определение каталазы в крови.

ПРИНЦИП МЕТОДА.

В основе количественного определения активности каталазы лежит определение количества перекиси водорода, разложенной ферментом за определенный промежуток времени. О количестве расщепленной перекиси водорода судят по разности количества перманганата калия. израсходованного на титрование перекиси водорода до и после действия каталазы.

Активность каталазы выражают с помощью каталазного числа. Каталазным числом называют количество мг перекиси водорода, которое разлагается под действием 1 мкл крови.

ХОД РАБОТЫ.

Работу проводят по следующей схеме:

Р е а к т и в ы	Стаканчик № 1 (опыт)	Стаканчик № 2 (контроль)
Кровь	1 мл	1 мл
Вода дистиллированная	7 мл	7 мл
Перекись водорода 1%	2 мл	-
Серная кислота 10%	-	5 мл
Стаканчики оставляют на 30 мин при комн. t, изредка встряхивая Через 30 мин
Перекись водорода 1%	-	2 мл
Серная кислота 10 %	5 мл	-

Действие каталазы в кислой среде прекращается, т. к. этот фермент действует при рН=7, 4. Поскольку в контрольную пробу серную кислоту приливали до добавления перекиси водорода, то в контроле все добавленное количество перекиси водорода остается нерасщепленным.

Содержимое каждого стаканчика необходимо титровать раствором перманганата калия до розового окрашивания, не исчезающего в течение 30 сек.

Рассчитать каталазное число (КЧ) по формуле:

КЧ = (А - В) х 1, 7,

где:

А - кол-во 0, 1 N раствора КМnО4, пошедшее на титрование контрольной пробы в мл.

В - кол-во 0, 1N раствора КМnО4, пошедшее на титрование опытной пробы в мл.

1, 7 - это коэффициент, показывающий, сколько мг Н2О2содержится в 1мл 0, 1н. раствора Н₂О₂.

В норме каталазное число колеблется от 10 до 15 единиц у взрослых и 7, 5 - 9, 9 единиц у детей.

РАСЧЕТ И ВЫВОДЫ:

Самостоятельная работа: составление тестов и кроссворда по теме ПОЛ.

Тестовый контроль:

Тема: ПОЛ.

1. К активным формам кислорода относят:

1. ОН- - гидроксильный радикал;

2. супероксидный анион;

3. Н2О2 - пероксид водорода

4. все перечисленное

Отв.: 4

 

2. Образование активных форм кислорода происходит:

1. в процессе переноса электронов в митохондриальной дыхательной цепи;

2. в реакциях, которые катализируются оксидазами (образуется перекись водорода), в том числе в свободнорадикальных процессах, совершающихся в фагоцитах;

3. в реакциях микросомального окисления при обезвреживании веществ с участием цитохрома Р-450;

4. в реакциях самопроизвольного (неферментативного) окисления веществ (гемоглобина, ферредоксинов, адреналина и др.);

5. в биологических системах с наличием ионов металлов с переменной валентностью и, прежде всего, железа (свободных атомов, так называемых внегемовых);

6. верно все

Отв.: 6

 

3. Перечислите ряд причин вызывающих активацию ПОЛ в тканях:

1. снижение поступления в организм алиментарных антиоксидантов (АО), таких как: токоферол, аскорбат, биофлавоноиды и др.;

2. стресс различного генеза, в частности эмоциональный (под влиянием катехоламинов и кортикостероидов в кровь поступает избыток жирных кислот и кислород);

3. внешние химические прооксиданты (пестициды, лекарственные окислители, алкоголь, продукты смога и т.д.);

4. физические факторы (повышенный радиоактивный фон, ультрафиолетовое облучение, электромагнитное поле, ультразвук с интенсивностью выше 2 Вт/см );

5. избыточное и несбалансированное потребление жиров и углеводов на фоне недостаточного их расходования;

6. гипокинезия с низким уровнем биологического окисления ферментов, т.е. сниженный уровень восстановления пиридиннуклеотидов;

7. врожденные энзимопатии антиоксидантных ферментов (каталазы, глутатионредуктазы, глутатионпероксидазы, глюкозо-6-фосфат-дегидрогеназы);

8. падение с возрастом активности антиоксидантных ферментов.

9. верного ответа нет

10. верно все перечисленное

Отв.: 10

 

4. Антиоксиданты нужны для…, исключите неправильный ответ:

1. обновления липидного состава мембран;

2. синтеза эйкозаноидов

3. обезвреживания ксенобиотиков и токсичных продуктов метаболизма;

4. функционирования иммунной системы.

5. синтеза глюкогона

Отв.: 1, 2, 4, 5

 

5. Оксидативный стресс приводит:

1. Повреждение ДНК, белков, липидов мембран.

2. Канцерогенез, нейродегенеративные болезни, атеросклероз, сахарный диабет, сердечно сосудистые заболевания, старение.

3. 1, 2

Отв.: 1, 2

 

6. Этот витамин ингибирует свободнорадикальное окисление путём отдачи электрона, что приводит к инактивации радикала липида и превращается в стабильный, полностью окисленный токоферолхинон:

1. В1

2. РР

3. Е

4. С

5. Д

Отв.: 3

 

7. Вит. A:

1. увеличивает антиоксидантное действие Вит. Е; Вместе с Вит. E и Вит. С;

2. активирует включение Se в состав глутатионпероксидазы;

3. препятствует окислению SH-групп белков и пептидов.

4. может быть прооксидантом

5. все верно

Отв. 5

 

7. Структура, какого витамина представлена ниже:

 

1. А; 2. Д; 3. Е; 4. РР; 5. К

Отв.: 1

9. Этот витамин активирует ПОЛ так как является полиненасыщенным спиртом и легко окисляется кислородом может быть прооксидантом (в высоких дозах):

 

1. К:

2. А;

3. Д;

4. Е;

5. РР

Отв.: 2

 

⇐ Предыдущая1234

Поделиться:

Популярное:

1. Cинтетический учет поступления основных средств, в зависимости от направления приобретения
2. H)результатов неэффективной финансовой политики по привлечению капитала и заемных средств
3. I. Общее понятие о целях, содержании, средствах и видах общения
4. I. Паспорт комплекта оценочных средств
5. I. Порядок назначения лекарственных средств
6. II. Государственная регистрация транспортных средств
7. II. Средства, влияющие преимущественно на рецепторы эфферентной иннервации сердца
8. IV. ОЦЕНОЧНЫЕ СРЕДСТВА ДЛЯ ТЕКУЩЕГО И РУБЕЖНОГО КОНТРОЛЯ
9. IV. ОЦЕНОЧНЫЕ СРЕДСТВА ДЛЯ ТЕКУЩЕЙ УСПЕВАЕМОСТИ И ПРОМЕЖУТОЧНОЙ АТТЕСТАЦИИ (РУБЕЖНОГО КОНТРОЛЯ). ПРОМЕЖУТОЧНАЯ АТТЕСТАЦИЯ
10. V. Расчет потребности в удобрениях и средствах защиты растений
11. VI. ПУТИ СООБЩЕНИЯ, ТРАНСПОРТНЫЕ СРЕДСТВА