Архитектура Аудит Военная наука Иностранные языки Медицина Металлургия Метрология
Образование Политология Производство Психология Стандартизация Технологии


IV Перечень лабораторных работ, наглядных пособий и средств ТСО.



Наглядные пособия:

Рисунки: 1. Реакции последовательного восстановления убихинона вдыхательной цепи; 2. Антиоксиданты водной фазы; 3. Механизм антиоксидантного действия витамина Е; 4. Окислительно-восстановителные превращения α -токоферола и сопряженных с ним коантиоксидантов; 5. Витамин С, 6. Витамин А; 7. Повреждающее действие свободных радикалов на компоненты клетки; 8. Образование супероксида в ЦПЭ,

V Наименование лабораторной работы:

VI Перечень вопросов для проверки исходного уровня знаний:

ЛАБОРАТОНАЯ РАБОТА №1

Количественное определение малонового диальдегида в ткани печени.

ОБОРУДОВАНИЕ: баня, ФЭК.

ПРИНЦИП МЕТОДА.

Основан на определении малонового диальдегида (МДА) как показателя перекисного окисления липидов при инкубации гомогенатов тканей в присутствии кислорода. В присутствии прооксидантов МДА определяется по специфической цветной реакции в кислой среде с 2-тиобарбитуровой кислотой (ТБК).

ХОД РАБОТЫ.

В трех центрифужных пробирках приготовить инкубационную смесь реактивов по следующей схеме:

Реактивы 1 пробирка “опытная” 2 пробирка “контроль” 3 пробирка “опытная” с добавлением про- оксидантов
Трис-буфер 0, 15 М 3, 4 мл 3, 4 мл 1, 4 мл
Сульфат железа FeSO4 - - 1 мл
Аскорбиновая кислота - - 1 мл
ТХУ 10 раствор с ЭДТА - 1 мл -
Гомогенат печени 1, 0 мл 1, 0 мл 1, 0 мл

Все пробирки поместить в термостат при 37оС на 15 минут. После инкубации остановить реакцию в 1 и 3 пробирках, добавляя в них по 1 мл ТХУ с ЭДТА, перемешать. Все пробирки центрифугировать в течение 20 минут при 3000 об/мин. Надосадочную жидкость осторожно слить в чистые пробирки. Затем в другие чистые пробирки отобрать по 4 мл надосадочной жидкости, добавить по 2 мл свежеприготовленного раствора ТБК (тиобарбитуровая кислота) и поместить пробирки в кипящую баню на 15 минут. Пробирки охладить в холодной воде и определить оптическую плотность на ФЭКе с зеленым светофильтром (длина волны 540 нм) в кювете 10 мм.

РЕЗУЛЬТАТЫ:

 

 

Активность ПОЛ выражается количеством микромолей МДА, накопленного за период инкубации в 1 мл гомогената

.

, где

Х - количество МДА, накопленного за период инкубации в 1 мл гомогената,

- молярный коэффициент экстинкции для малонового диальдегида при реакции с ТБК, численно равный 0.156.

Dоп и D конт- оптические плотности " опытной" и " контрольной" пробирок соответственно.

Рассчитать активность ПОЛ в 1 и 3 пробирках и сделать вывод об активности ПОЛ и влиянии ионов Fe2+и аскорбата на перекисное окисление липидов.

РАСЧЕТ И ВЫВОДЫ:

 

 

ЛАБОРАТОНАЯ РАБОТА №2

Количественное определение каталазы в крови.

ПРИНЦИП МЕТОДА.

В основе количественного определения активности каталазы лежит определение количества перекиси водорода, разложенной ферментом за определенный промежуток времени. О количестве расщепленной перекиси водорода судят по разности количества перманганата калия. израсходованного на титрование перекиси водорода до и после действия каталазы.

Активность каталазы выражают с помощью каталазного числа. Каталазным числом называют количество мг перекиси водорода, которое разлагается под действием 1 мкл крови.

ХОД РАБОТЫ.

Работу проводят по следующей схеме:

Р е а к т и в ы Стаканчик № 1 (опыт) Стаканчик № 2 (контроль)
Кровь 1 мл 1 мл
Вода дистиллированная 7 мл 7 мл
Перекись водорода 1% 2 мл -
Серная кислота 10% - 5 мл
Стаканчики оставляют на 30 мин при комн. t, изредка встряхивая Через 30 мин
Перекись водорода 1% - 2 мл
Серная кислота 10 % 5 мл -

Действие каталазы в кислой среде прекращается, т. к. этот фермент действует при рН=7, 4. Поскольку в контрольную пробу серную кислоту приливали до добавления перекиси водорода, то в контроле все добавленное количество перекиси водорода остается нерасщепленным.

Содержимое каждого стаканчика необходимо титровать раствором перманганата калия до розового окрашивания, не исчезающего в течение 30 сек.

Рассчитать каталазное число (КЧ) по формуле:

КЧ = (А - В) х 1, 7,

где:

А - кол-во 0, 1 N раствора КМnО4, пошедшее на титрование контрольной пробы в мл.

В - кол-во 0, 1N раствора КМnО4, пошедшее на титрование опытной пробы в мл.

1, 7 - это коэффициент, показывающий, сколько мг Н2О2содержится в 1мл 0, 1н. раствора Н2О2.

В норме каталазное число колеблется от 10 до 15 единиц у взрослых и 7, 5 - 9, 9 единиц у детей.

РАСЧЕТ И ВЫВОДЫ:

Самостоятельная работа: составление тестов и кроссворда по теме ПОЛ.

Тестовый контроль:

Тема: ПОЛ.

1. К активным формам кислорода относят:

1. ОН- - гидроксильный радикал;

2. супероксидный анион;

3. Н2О2 - пероксид водорода

4. все перечисленное

Отв.: 4

 

2. Образование активных форм кислорода происходит:

1. в процессе переноса электронов в митохондриальной дыхательной цепи;

2. в реакциях, которые катализируются оксидазами (образуется перекись водорода), в том числе в свободнорадикальных процессах, совершающихся в фагоцитах;

3. в реакциях микросомального окисления при обезвреживании веществ с участием цитохрома Р-450;

4. в реакциях самопроизвольного (неферментативного) окисления веществ (гемоглобина, ферредоксинов, адреналина и др.);

5. в биологических системах с наличием ионов металлов с переменной валентностью и, прежде всего, железа (свободных атомов, так называемых внегемовых);

6. верно все

Отв.: 6

 

3. Перечислите ряд причин вызывающих активацию ПОЛ в тканях:

1. снижение поступления в организм алиментарных антиоксидантов (АО), таких как: токоферол, аскорбат, биофлавоноиды и др.;

2. стресс различного генеза, в частности эмоциональный (под влиянием катехоламинов и кортикостероидов в кровь поступает избыток жирных кислот и кислород);

3. внешние химические прооксиданты (пестициды, лекарственные окислители, алкоголь, продукты смога и т.д.);

4. физические факторы (повышенный радиоактивный фон, ультрафиолетовое облучение, электромагнитное поле, ультразвук с интенсивностью выше 2 Вт/см );

5. избыточное и несбалансированное потребление жиров и углеводов на фоне недостаточного их расходования;

6. гипокинезия с низким уровнем биологического окисления ферментов, т.е. сниженный уровень восстановления пиридиннуклеотидов;

7. врожденные энзимопатии антиоксидантных ферментов (каталазы, глутатионредуктазы, глутатионпероксидазы, глюкозо-6-фосфат-дегидрогеназы);

8. падение с возрастом активности антиоксидантных ферментов.

9. верного ответа нет

10. верно все перечисленное

Отв.: 10

 

4. Антиоксиданты нужны для…, исключите неправильный ответ:

1. обновления липидного состава мембран;

2. синтеза эйкозаноидов

3. обезвреживания ксенобиотиков и токсичных продуктов метаболизма;

4. функционирования иммунной системы.

5. синтеза глюкогона

Отв.: 1, 2, 4, 5

 

5. Оксидативный стресс приводит:

1. Повреждение ДНК, белков, липидов мембран.

2. Канцерогенез, нейродегенеративные болезни, атеросклероз, сахарный диабет, сердечно сосудистые заболевания, старение.

3. 1, 2

Отв.: 1, 2

 

6. Этот витамин ингибирует свободнорадикальное окисление путём отдачи электрона, что приводит к инактивации радикала липида и превращается в стабильный, полностью окисленный токоферолхинон:

1. В1

2. РР

3. Е

4. С

5. Д

Отв.: 3

 

7. Вит. A:

1. увеличивает антиоксидантное действие Вит. Е; Вместе с Вит. E и Вит. С;

2. активирует включение Se в состав глутатионпероксидазы;

3. препятствует окислению SH-групп белков и пептидов.

4. может быть прооксидантом

5. все верно

Отв. 5

 

7. Структура, какого витамина представлена ниже:

 

1. А; 2. Д; 3. Е; 4. РР; 5. К    

Отв.: 1

9. Этот витамин активирует ПОЛ так как является полиненасыщенным спиртом и легко окисляется кислородом может быть прооксидантом (в высоких дозах):

 

1. К:

2. А;

3. Д;

4. Е;

5. РР

Отв.: 2

 


Поделиться:



Популярное:

Последнее изменение этой страницы: 2016-06-05; Просмотров: 1104; Нарушение авторского права страницы


lektsia.com 2007 - 2024 год. Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав! (0.024 с.)
Главная | Случайная страница | Обратная связь