Кумарины и хромоны. ЛР и ЛРС, содержащие кумарины и хромоны

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ:

1. Уметь:

· определять ЛР по внешним признакам на гербарных образцах и отличать от возможных примесей;

· определять подлинность сырья макро- и микроскопическим методами анализа и давать заключение о качестве сырья с использованием НД.

· проводить качественный химический и хроматографический анализы ЛРС, содержащего кумарины.

2. Знать: латинские названия, географическое распространение, условия местообитания, районы культуры; сроки, приемы сбора, сушки и хранения ЛРС; химический состав, действующие вещества, их формулы; медицинское применение ЛРС и препаратов, содержащих кумарины и хромоны.

ОБЪЕКТЫ ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ: донник лекарственный, амми большая, пастернак посевной, вздутоплодник сибирский, виснага морковевидная (амми зубная).

ВОПРОСЫ ДЛЯ САМОПОДГОТОВКИ

1. Определение понятия «кумарины», «хромоны».

2. Классификация. Физико-химические свойства кумаринов.

3. Распространение кумаринов в растительном мире.

4. Методы обнаружения кумаринов в ЛРС.

5. Методы выделения кумаринов из ЛРС.

6. Методы количественного определения в ЛРС.

7. Латинские и русские названия ЛРС, производящих растений и семейств всех объектов изучаемой темы.

8. Морфологическая характеристика растений, ареалы, места обитания, районы возделывания.

9. Рациональные приемы сбора, первичной переработки, сушка и хранение ЛРС.

10. Внешние признаки ЛРС.

11. Химический состав, структурные формулы: кумарин, дигидрокумарин, псорален, ангелицин, изопимпинеллин, бергаптен, умбеллиферон, келлин.

12. Препараты и применение в медицине.

ЛИТЕРАТУРА

1. ВФС 42-1049-80. Корневище и корень вздутоплодника сибирского.

2. ГОСТ 14101 - 69. Трава донника.

3. Долгова А.А., Ладыгина Е.Я. Руководство к практическим занятиям по фармакогнозии. М., 1977, с. 164-166.

4. Коноплева М.М. Фармакогнозия. Природные биологически активные вещества – Витебск: ВГМУ, 2002, с.102-113.

5. Муравьева Д.А. Фармакогнозия. М., 1991, с. 413-418, 419, 421-426.

6. Фармакогнозия. Атлас. Под ред. Н.И. Гринкевич, Е.Я. Ладыгиной. М., 1989, с. 424-436.

7. Фармакогнозия / Под ред. проф. Шелюто В.Л., Витебск: ВГМУ, 2003, с. 246 - 265.

8. ГФ РБ. -Молодечно: Типография «Победа», 2009, т.3, с. 704.

9. ФС 42-2548-88. Плоды пастернака посевного.

10. ФС 42-530-72. Амми зубная (смесь плодов с половой).

11. ФС 42-540-72. Плод амми большой.

12. Химический анализ лекарственных растений. Под ред. Гринкевич Н.И., Сафронич Л.Н. М., 1983, с. 94-110.

13. Шелюто В.Л. Лекарственные растения Беларуси. Справочник. – Витебск: ВГМУ, 2003.

СОДЕРЖАНИЕ ЗАНЯТИЯ

А. Проверка готовности к занятию (тестовый контроль).

Б. Выполнение лабораторной работы.

Задание 1. Определить подлинность плодов пастернака посевного.

1) Провести макроскопический анализ плодов пастернака посевного. Для этого визуально и с помощью лупы изучить строение плодов и диагностические признаки.

2) Сравнить результаты анализа с ФС и дать заключение о подлинности и качестве сырья по внешним признакам.

Задание 2. Определить подлинность травы донника лекарств.

1) Провести макроскопический анализ травы донника. Выделить диагностические признаки.

2) Провести микроскопический анализ листьев донника. Выделить и зарисовать диагностические признаки.

3) Сравнить результаты анализа с ГОСТ и дать заключение о подлинности и качестве сырья по внешним и микроскопическим признакам.

Задание 3. Изучить внешний вид ЛР и возможные примеси к ним по гербарным образцам и диагностические признаки ЛРС: плодов амми зубной и амми большой, корневища с корнями вздутоплодника сибирского.

Задание 4. Провести качественный химический анализ ЛРС на содержание кумаринов.

1) Получить спиртовое извлечение из ЛРС, содержащего кумарины. Внести в колбу 2, 5 г порошкованного сырья, залить 25 мл 95% спирта и нагреть с обратным холодильником на водяной бане до кипения. Поддерживать кипение 15-20 мин, после чего охладить, профильтровать и использовать для качественных реакций и хроматографии.

2) Определить наличие кумаринов в ЛРС.

· Лактонная проба. В 2 пробирки наливают по 2 мл спиртового извлечения. В одну из пробирок прибавляют 0, 5 мл 10 % спиртового р-ра NаОН. Обе пробирки нагревают на водяной бане до кипения и охлаждают. В каждую пробирку приливают по 4 мл воды очищенной. Жидкость в пробирке со щелочью должна быть прозрачной в сравнении с жидкостью, в которую щелочь не добавлялась. При подкислении несколькими каплями НCI (конц.) эта прозрачная жидкость теряет желтую окраску и выделяет белый хлопьевидный (иногда кристаллический) осадок.

· Диазореакция. В пробирку наливают 1-2 мл спиртового извлечения и 3-4 мл 2% р-ра натрия гидрокарбоната. Жидкость нагревают до кипения и охлаждают. В пробирку приливают 2-3 капли свежеприготовленного диазотированного n-нитроанилина. Вишнево-красное или интенсивно-буро-красное окрашивание свидетельствует о положительной реакции.

Задание 5. Провести качественный хроматографический анализЛРС на содержание кумаринов.

Нанести на пластинку " Силуфол" спиртовые извлечения, содержащие кумарины, поместить в хроматографическую камеру с системой растворителей: ЭТИЛАЦЕТАТ: БЕНЗОЛ (1: 2)

После прохождения фронта растворителей на 10-12 см хроматограмму извлечь из камеры и высушить. Наблюдать в УФ-свете голубую, синюю, фиолетовую, желтоватую флюоресценцию пятен кумариновых веществ. Отметить их хроматограмме и рассчитать значение Rf.

В. Итоговый контроль.

Протокол занятия представить преподавателю на проверку и подпись. Ответить на предложенные вопросы по теме занятия.

 

ЗАНЯТИЕ № 22

Флавоноиды.

Анализ ЛРС, содержащего флавоноиды

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ:

Знать методы выделения, очистки, обнаружения и количественного определения флавоноидов в ЛРС.

Уметь проводить обнаружение и количественное определение флавоноидов в ЛРС.

ВОПРОСЫ ДЛЯ САМОПОДГОТОВКИ

1. Классификация и особенности структуры флавоноидных соединений.

2. Физико-химические свойства флавоноидов.

3. Распространение флавоноидов в растительном мире, локализация в растениях по органам и тканям.

4. Методы выделения, очистки и разделения флавоноидов.

5. Анализ (качественный, количественный, хроматографический) ЛРС, содержащего флавоноиды.

6. Формулы: флавона, флавонола, флавана, флаванона, флаванонола, изофлавона, антоцианидина, катехина, халкона, аурона.

7. Биологическая активность флавоноидов. Пути использования ЛРС, содержащего флавоноиды.

ЛИТЕРАТУРА

1. Коноплева М.М. Фармакогнозия. Природные биологически активные вещества – Витебск: ВГМУ, 2002, с.113 - 126.

2. Выделение и анализ природных биологически активных веществ. Под ред. Сироткина В.В. Томск. 1987, с. 138-157.

3. ГФ РБ. - Молодечно: Типография «Победа», 2008, т.2.: с. 346, 356, 375, 407, 416, 417, 419, 420.

4. ГФ РБ. -Молодечно: Типография «Победа», 2009, т.3, с. 701, 702, 706.

5. ГФ СССР, ХI изд., Вып. 2. М., 1990, ст. 8, 9, 11.

4. Муравьева Д.А. Фармакогнозия. М., 1991, с. 458 – 468.

6. Фармакогнозия / Под ред. проф. Шелюто В.Л., Витебск: ВГМУ, 2003, с. 266 - 273.

7. Химический анализ лекарственных растений. Под ред. Гринкевич Н.И., Сафронич Л.Н. М., 1983, с. 82 - 93.

СОДЕРЖАНИЕ ЗАНЯТИЯ

А. Проверка готовности к занятию (тестовый контроль).

Б. Выполнение лабораторной работы.

Задание 1. Провести качественные реакции обнаружения флавоноидов в ЛРС: цветки боярышника, пижмы, лабазника, бессмертника.

Экстракция флавоноидов

В колбу на 50 мл поместить 2, 0 измельченного до 1 мм сырья, залить 20 мл (цветки бессмертника залить 30 мл) 70 % этилового спирта. Настаивать 24 часа. Затем процедить через ватный тампон в коническую колбу на 30 мл.

1) Реакции окрашивания:

· Цианидиновая проба (восстановление флавонолов, флавонов, флавaнонов до антоцианидинов).

В пробирку поместить 1 мл извлечения, добавить 3-4 капли конц. HCl и 1 гранулу металлического цинка. Нагреть до кипения. Наблюдать красное или оранжевое окрашивание.

· Реакция с раствором едкой щелочи.

К 1 мл извлечения добавить 2-3 капли 5 % спиртового раствора NаОН. Наблюдать желтое окрашивание (флавоны, флавонолы, флаваноны).

· Реакция комплексообразования с хлоридом алюминия.

К 1 мл извлечения добавить 2-3 капли 2 % спиртового раствора хлорида алюминия. Наблюдать желтое окрашивание, флюоресцирующее в УФ-свете.

2) Реакция осаждения растворами ацетата свинца:

К 1 мл извлечения добавить 3 капли раствора основного ацетата свинца. Наблюдать образование желто-оранжевого осадка.

К 1 мл извлечения добавить 3 капли раствора среднего ацетата свинца. При наличии флавоноидов с орто-дигидроксигруппировками образуется осадок.

Задание 2. Провести обнаружение флавоноидов в ЛРС методом хроматографии в тонком слое.

Использовать извлечение флавоноидов, оставшееся от проведения качественных реакций.

1) На стартовую линию хроматографической пластинки " Силуфол" нанести капилляром извлечение и " свидетель" (рутин, кверцетин, гиперозид). Пластинку поместить в хроматографическую камеру с системой растворителей:

ЭТАНОЛ: УКСУСНАЯ КИСЛОТА: ВОДА (20: 1: 1).

2) Хроматографирование вести 20 мин (пробег растворителя 13 см), затем хроматограмму высушить на воздухе под тягой.

3) Отметить окраску пятен в видимом и УФ-свете.

4) Обработать хроматограмму 2 % спиртовым раствором хлорида алюминия и высушить в сушильном шкафу при температуре 90-100^о С. Наблюдать окраску пятен в видимом и УФ-свете.

5) Рассчитать для флавоноидов величины Rf и сравнить их со " свидетелями". Хроматограмму зарисовать и результаты занести в протокол.

Задание 3. Провести количественное определение флавоноидов в ЛРС фотоэлектроколориметрическим методом.

1) Подготовка ЛРС: сырье измельчить, просеять через сито с диаметром отверстий 1 мм, взять точную навеску 0, 5 г и поместить в коническую колбу со шлифом на 100 мл.

2) Экстракция суммы флавоноидов: мерной пипеткой отмерить 50 мл 50 % этанола и внести в колбу с сырьем. Колбу закрыть пробкой, взвесить с точностью до 0, 01 г, затем экстракцию вести на кипящей водяной бане с обратным холодильником в течение 1 часа. Колбу с извлечением охладить, довести до первоначальной массы 50 % этанолом, перемешать.

3) Фильтрация: полученное извлечение профильтровать через бумажный фильтр, отбрасывая первые 20 капель, в пробирку.

4) Получение окрашенного комплекса флавоноидов и стабилизация окраски: отмерить 1 мл фильтрата, перенести в сухую пробирку и прилить 3 мл реактива А (состоящего из ацетатного буфера рН=3, 10 % р-ра ацетата натрия на 50 % этаноле, 2 % AlCl₃ в 50 % этаноле (1: 1: 1)). Параллельно приготовить контрольный р-р, состоящий из 2 мл исследуемого извлечения и 6 мл реактива Б (состоящего из 2 мл ацетатного буфера рН=3 и 4 мл 50 % этанола). Оба раствора (исследуемый и контрольный) выдержать в темном месте в течение 10 минут.

5) Фотоэлектроколориметрирование. Измерить оптическую плотность исследуемого р-ра на фоне контрольного р-ра на ФЭК-М в кювете толщиной 5 мм при синем светофильтре № 4. Используя полученное значение оптической плотности, найти содержание суммы флавоноидов в 1 мл р-ра по калибровочному графику, построенному по стандартному раствору рутина. Рассчитать результаты по формуле:

 

С * U * 100 * К * 100

% = ------------------------, где

m * U₁ * (100 - W)

m - навеска ЛРС в мкг (1, 0 = 10⁶ мкг);

С - концентрация флавоноидов (мкг/мл), найденная по калибровочному графику;

U - объем экстрагента, взятого для экстракции флавоноидов (50мл);

U₁ - объем экстракта (1мл);

W - влажность ЛРС;

К - коэффициент разбавления раствора перед колориметрированием.

ПРИМЕЧАНИЕ: При использовании кюветы на 10 мм:

· для приготовления рабочего раствора берется 2 мл фильтрата и 6 мл реактива А;

· для приготовления контроля - 4 мл фильтрата и 12 мл реактива Б.

Работу оформить в виде протокола фитохимического анализа.

На основании проведенного анализа дать заключение о качественном и количественном содержании флавоноидов в исследуемом образце.

В. Итоговый контроль.

Протокол занятия представить преподавателю на проверку и подпись. Ответить на предложенные вопросы по теме занятия.

ЗАНЯТИЕ № 23

Флавоноиды.

⇐ Предыдущая45678910111213Следующая ⇒

Поделиться: