Микробиологические методы исследования крови.

Показания для исследования:

Подозрение на сепсис и/или бактериемию.

Взятие исследуемого материала:

 

- Как правило забирают кровь на подъеме температуры (а не на высоте лихорадки), до начала

специфического антибактериального лечения, или, по крайней мер, через 12-24 часа после

последнего введения препарата больному

-Для взятия крови необходимо пользоваться стерильным шприцем, системы для одноразового ис-

пользования освобождают от упаковки только непосредственно перед употреблением.

-Кровь берут у постели больного или в перевязочной стерильным шприцем или системой для

одноразового взятия крови с соблюдением всех правил асептики.

Кожу над пунктируемой веной обрабатывают 70% спиртом, затем 1-2% настойкой йода, затем

снова спиртом для удаления избытка йода. Обработку проводят круговыми движениями от центра

к периферии.

Пока один человек обрабатывает кожу больного над пунктируемой веной, пунктирует вену и бе-

рет кровь, другой –над пламенем спиртовки открывает пробки флаконов, подставляет флаконы

под струю крови из шприца, обжигает горлышки и пробки флаконов и закрывает их.

- Не следует брать кровь из внутрисосудистых катетеров, кроме случаев, когда предполагает-

Ся сепсис катетерного происхождения.

- Непосредственно перед посевом резиновую пробку флакона дезинфицируют 70% этиловым спир-

том, затем прокалывают пробку флакона иглой шприца и производят посев крови

-Для результативного бактериологического исследования необходимо сеять достаточные количе-

ства крови (не менее 10 мл у взрослых и 5 мл у детей) в большое количество питательной среды

в соотношении 1: 10, чтобы преодолеть бактерицидные свойства крови.

-Флаконы маркируют и до транспортировки в лабораторию хранят обязательно при комнатной

температуре (не в холодильнике)

-При подозрении на катетерную инфекцию исследуют внутрисосудистый катетер. В асептических условиях отрезают его дистальный конец(длиной около 5 см ), помещают в стерильный широкогор-

лый сосуд(пробирку) с завинчивающейся крышкой и без промедления доставляют в лабораторию.

 

Согласно приказа №535:

Минимально использовать 2 среды:

1) «Двойная среда», состоящая из скошенного во флаконе 150 мл 1, 7-2% питательного ага-

ра и 150 мл полужидкой среды, приготовленной на питательном бульоне. Кровь засевают в

жидкую часть среды. Инкубируют в термостате при 37⁰ С.Флаконы ежедневно просматри-

вают, при этом, наклоняя флакон, смачивают поверхность питательным бульоном.

Это исключает необходимость высева на плотные питательные среды и, следовательно,

уменьшает риск контаминации при пересевах.

2) «Среда для контроля стерильности»- тиогликолевая среда.

3) Жидкая среда Сабуро(Двойная среда Сабуро) для выделения грибов.

Согласно приказа №535 культивирование в течение 6 недель в термостате при 37⁰ С с ежедневным

просмотром в течение первых 8 дней. При появлении видимого роста делают мазки, окрашенные по Граму, и в соответствии с данными бактериоскопии делают высевы на среды.

При отсутствии видимого роста на 3, 5, 8 день из всех сред, кроме двойной среды и СКС делают вы-

севы на 5% кровяной агар и мазки на стеклах, которые окрашивают по Граму. Посевы инкубируют

в анаэробных и аэробных условиях. Выращенные бактерии идентифицируют, определяют их свойс-

тва, чувствительность к антибиотикам.

При отсутствии роста на 9-10 день выдают отрицательный ответ.

Однако флаконы с засеянной средой выбрасывать не рекомендуется, необходимо продолжать держать их в термостате в течение 4-6 недель, проверяя появление роста 2-3 раза в неделю.

 

Оценка результатов:

При наличии роста результаты оцениваются в зависимости от вида выделенных бактерий,

скорости и массивности их роста.

Многократные посевы крови повышают вероятность выделения гемокультуры и позволяют раз-

личить истинные патогенны от случайных контаминантов.

Однократное выделение коагулазонегативных стафилококков, коринебактерий, пропионибактерий, Bacillus spp., негемолитических и зеленящих стрептококков следует соотносить с клиническими данными.

Выделяемые м/о: золотистый стафилококк, энтеробактерии, листерии, синегнойная палочка.

 

 

Рекомендуется проводить повторные посевы крови.

 

Существуют автоматизированные системы для гемокультивирования BACTEC и BactAlert («Био-

мерье»), основанные на непрерывном мониторинге роста гемокультур по нарастанию концентрации CO₂ в инкубационной среде, с регистрацией газообразования методом флуоресценции или колориметрии. В зависимости от модели прибора одновременно можно исследовать 50, 120, 240 образцов.

Для посева используют флаконы с ПС для культивирования аэробных, анаэробных м/о, грибов и

микобактерий туберкулеза.

Объем исследуемой крови (8 мл для взрослых, 3 мл-для детей).Засеянные флаконы помещают в индивидуальные ячейки в инкубационном блоке прибора, в основании которых расположены светоизлучающие и светопоглощающие диоды)

Каждый флакон индивидуально считывается каждые 10-15 минут до появления признаков микробного роста, который регистриуется по нарастанию уровней флуоресценции CO₂ (BACTEC) или изменению цвета сенсора (BaсT/Alert). Данные сохраняются и анализируются на компьютере с построением кривой роста.

В течение первых суток достигается 90% положительных результатов, максимальные сроки иссле-

дования составляют 5 дней.

 

 

Исследование спинномозговой жидкости

Показания:

Воспалительные заболевания ЦНС (менинигиты, энцефалиты, менингоэнцефалиты)

Взятие материала:

Получают путем люмбальной пункции, или, что реже пункции желудочков мозга.

Материал необходимо забирать до начала антибиотикотерапии.

Взятие материала производит врач.

Место пункции обрабатывают антисептиком и 70% этиловым спиртом, иглу с мандреном вводят между поясничными L3- L4, L4-L5 или пояснично-крестцовыми L5-S1.Достигнув субарахноида-

льного пространства, удаляют мандрен, и ликвор появляется на конце иглы.

Медленно набирают ликвор в стерильные, герметично закрывающиеся пробирки.

Обычно используют 3 пробирки:

№1-для клинического анализа.

№2-для микробиологического.

№3-для биохимического анализа.

Для микробиологического присылают пробирку №2, желательно центрифужную, или одну пробир-

ку из трех с самым мутным содержимым в нужном объеме.

Ликвор немедленно доставляют в лабораторию, при отсутствии такой возможности материал сохра-

няют при 37⁰ С.

Охлаждение ликвора ниже 30⁰ С ведет к утрате жизнедеятельности менингококков.

Проведение исследования

-Центрифугирования образца (5 минут при 3500 об/мин) и из осадка делают мазки.

Если ликвор мутный, то мазки делают без центрифугирования.

Мазки после фиксирования окрашивают метиленовым синим и по Граму.

Результаты микроскопии позволяют установить наличие менингококков или условно-патогенных микроорганизмов, вызвавших

бактериальный менинигит. Посев ликвора производится на набор сред:

Сывороточный агар (д.б. свежеприготовленным)

5% кровяной агар

Шоколадный агар

Простой агар

Среда для контроля стерильности

Среда Сабуро*

0, 1 % полужидкий агар для обогащения ликвора

 

Методика посева

Проводят посев 2-4 капель гнойного ликвора или ресуспензированного осадка на чашку со

свежеприготовленным сывороточным агаром, на чашку с кровяным агаром, простым агаром,

шоколадным агаром.

Капли растирают подогретым шпателем на поверхности агара.

После этого чашку с простым агаром помещают в термостат 37⁰ С, а другие чашки инкубируют в

атмосфере с повышенным СО₂ (микроаэрофильные условия)

Инкубация в данных условиях повышает выявление менингококков, пневмококков, листерий.

В пробирку, к оставшемуся от посева и микроскопипрования осадку, добавляют 5 мл стерильного

0, 1% полужидкого агара и помещают в термостат для накопления.

Надосадочную жидкость, полученную после центрифугирования используют для обнаружения

антигена серологическими методами (РЛА-обнаружение H.influanzae, N.meningitidis, S.pneumoniae,

S.agalactiae)- метод скрининговый и не заменяет бактериологического исследования/

Если ликвора мало, то его засевают только на среду обогащения.

Если ликвор прозрачный, то центрифугирование не производят, мазок не делают, и вся его часть,

оставшаяся после посева засевается на среду обогащения.

Плотные среды следует инкубировать в течение минимум 72 часов, полужидкий агар до 5-7 дней.

При отсутствии роста колоний на плотных средах делают высев со среды накопления на чашку с

сывороточным агаром и кровяным агаром.

При появлении роста изучают характер роста, морфологию выросших бактерий при окраске по Граму.

Интерпретация результатов

В норме ликвор стерилен.

Наиболее частые возбудители менингита у новорожденных:

Энтеробактерии (E/coli, Proteus spp., Klebsiella pneumonia, Enterobacter spp.)

Pseudomonas aeruginosa

Streptococcus gr.B, D

Listeria monocytogenes

 

У детей раннего возраста:

N.meningitidis.(менингококк)

S.pneumoniae (пневмококк)

H.influanzae (гемофильная палочка)

⇐ Предыдущая1234Следующая ⇒

Поделиться: