Тема 6 «Методы культивирования и выделения чистых культур микроорганизмов»

Цель – формирование знаний о культивировании микроорганизмов, о методах выделения чистой культуры микроорганизмов в лабораторных условиях, умений проводить посев микробных культур в питательные среды, получать чистые микробные культуры, делать заключение по изученному материалу, навыков работы с источниками информации, лабораторным оборудованием и инструментами.

План

1. Изучить методические указания к занятию № 6.

2. Провести посев микробных культур в питательные среды, отчитаться преподавателю о проделанной работе.

Материальное обеспечение: музейные культуры бактерий, стерильные питательные среды в пробирках – МПА и МПБ, в чашках Петри – МПА, набор инструментов для посева бактерий, стерильные Пастеровские пипетки, спиртовки, спички, микроскопы, наборы красок.

Теоретический материал

Одним из условий проведения посева микробов на питательные среды является стерильность. Она достигается путем проведения посевов в специальных комнатах (боксах) около зажженной спиртовки. Перед посевом воздух обезвреживают в течение 15 мин. ультрафиолетовыми лучами с помощью ртутно-кварцевой лампы ПРК-4.

Посев в жидкие питательные среды. Пробирку с чистой культурой и пробирку со стерильной питательной средой берут в левую руку и слегка наклоняют. В правую руку берут, как ручку или карандаш, бактериологическую петлю, держа ее вертикально, фламбируют над пламенем спиртовки. Обе ватные пробки захватывают мезинцем и мякотью ладони правой руки и безымянным пальцем, зажимают и держат их во время посева в таком положении, но ни в коем случае не кладут пробки на стол.

Обжигают края открытых пробирок в пламени горелки. Затем вводят стерильную бактериологическую петлю в пробирку с культурой в середину жидкости на жидких средах. Быстро, но осторожно, переносят петлю в пробирку со стерильной средой и смывают ее в жидких средах. Извлекают петлю, обжигают края пробирок, закрывают их обожженными пробками и фламбируют петлю.

В процессе работы необходимо учитывать следующее:

 1)не допускать, чтобы жидкость питательной среды выливалась при горизонтальном положении пробирки;

 2)следить, чтобы жидкость не смачивала края пробирки и ватных пробок;

 3)при пересеве с жидкой среды на жидкую можно пользоваться, кроме петли, стерильной пастеровской или градуированной пипетками.

Капилляр пастеровской пипетки откалывают прокаленным пинцетом или пальцем, предварительно согнув над огнем и остудив край пипетки. Оба края пипетки слегка обжигают над пламенем спиртовки, после чего вносят в посевной материал. Посевной материал набирают в капилляр пипетки путем насасывания (в обратном конце пипетки должна быть вата), затем отверстие пипетки быстро и плотно зажимают указательным пальцем правой руки. Далее пипетку погружают в свежую питательную среду, куда и выдувают (выжимают при работе с грушей) ее содержимое. После посева пипетки сразу же погружаются в дезинфицирующий раствор (3 процентный раствор фенола). На другие жидкие среды посев проводят аналогичным образом.

Посев на плотные питательные среды

Посев на скошенный МПА. Методика посева в основном такая же, как и при посеве на жидкие среды, но при этом материал переносят петлей в пробирку с агаром не доходя до конца границы конденсационной воды, и зигзагообразными движениями распределяют материал по поверхности агара.

Посев в чашку Петри. При посеве на чашку ее устанавливают около горелки, фиксируют на столе левой рукой. Крышку поднимают большим и указательным пальцами настолько, чтобы в образующуюся щель свободно проходила петля или шпатель. Культуру из посевной пробирки захватывают петлей и штриховыми движениями распределяют по поверхности питательной среды. Можно каплю посевного материала нанести на поверхность МПА петлей или пипеткой, а потом растереть ее стерильным шпателем;

Пробирки и чашки с посевами помещают в термостат с температурой, оптимальной для определенного микроорганизма. Чашки в термостате размещают вверх дном, что предотвращает стекание конденсационной воды с крышки и размыв колоний. На другие плотные питательные среды посев проводят аналогичным образом.

Посев в мясо-пептонную желатину (МПЖ). На МПЖ посев производится уколом. Пробирку с МПЖ, застывшей в виде столбика, берут в левую руку, над пламенем спиртовки вынимают пробку и переворачивают вверх дном.

Затем петлю (в виде иглы) с культурой вкалывают снизу в центр столбика на всю его глубину . После этого петлю (иглу) извлекают, пробирку закрывают обожженной пробкой. Выращивание производится в условиях комнатной температуры (20—22°С) в течение 5—7 суток.

При бактериологическом исследовании некоторых материалов в лабораторной практической работе сталкиваются с наличием в них смеси бактерий двух или нескольких видов (в воде, молоке, воздухе, содержимом кишечника, гное и др.). Выделение из смеси одного вида микроба называют выделением чистой культуры. С этой целью специальными методами посевов достигается рост бактерий отдельными колониями (на плотных питательных). Пересев одной изолированной колонии в пробирку со стерильной питательной средой позволяет выделить чистую культуру (учитывая, что каждая колония развивается в результате размножения одной микробной клетки).

 

Рис 1 Посев на плотную среду.

Выделение чистой культуры. Один из первых методов был предложен Пастером — метод разведений, который состоит в том, что исследуемый материал последовательно разводят в жидкой питательной среде: берут ряд пробирок со стерильным МПБ (по 9—10 мл), исследуемый материал пипеткой вносят в первую пробирку, перемешивают, затем из нее небольшое количество (0,1 мл) переносят во вторую, после перемешивания — 6 третью и т. д. (иногда до 10 пробирок). Пастер полагал, что в последней пробирке возможен рост одного вида микроба, но это маловероятно, и в настоящее время метод разведений Пастера используют только как подсобный при других методах.

Метод Коха был разработан и предложен с применением плотной среды — желатиновые пластинки в чашках Петри. Но с введением в бактериологическую работу использования агар-агара желатиновые пластинки были заменены агаровыми. Суть метода Коха заключается в том, что, используя принцип Пастера, исследуемый материал разводят в 4—5 пробирках с расплавленным и остуженным до 45— 50°С МПА по 10—15 мл. Затем осторожно содержимое каждой пробирки выливают в стерильную чашку Петри и распределяют среду тонким слоем, чашку закрывают и, когда агар застынет (уплотнится), перевертывают вверх дном и помещают в термостат на 18, 20, 24 или 48 ч. В чашках на поверхности МПА вырастают колонии бактерий, но там, где концентрация микробов была меньше (больше степень разведения), вырастают изолированные друг от друга колонии. С обратной стороны (по дну чашки) карандашом по стеклу отмечают нужную колонию. Затем, приоткрыв крышку чашки, прикосновением бактериологической петли к одной (отмеченной) колонии, не касаясь других, осторожно берут небольшое количество микробной массы и переносят в пробирки со стерильными МПБ и МПА, последние помещают в термостат. Вырастает чистая культура.

Метод Дригальского — метод пластинчатого посева. Берут 4— 5 стерильных чашек Петри. Агаровую среду в колбе расплавляют на водяной бане, затем, вынув пробку, слегка прогревают края колбы и агар разливают в чашки Петри равномерным слоем (застывая, образуется агаровая пластинка). Закрытые крышкой чашки Петри оставляют на столе. После уплотнения среды чашки помещают в термостат для подсушивания вверх дном на 3—4 ч при 37—38 °С. Каплю исследуемого материала бактериологической петлей наносят на поверхность агара, шпателем Дригальского или соответственно изогнутой на пламени горелки пастеровской пипеткой каплю растирают равномерно на поверхности среды. Этим же шпателем, не обжигая его, растирают (засевают) по поверхности среды второй чашки, затем последовательно в третьей, четвертой чашках, после посева ихпомещают в термостат вверх дном. Рост изолированныхколоний обычно достигается в последних чашках. Далеепоступают, как и в первом случае: нужную колонию отмечают, отвивают в МПБ и МПА, помещают в термостат длякультивирования.

Для получения чистых культур пользуются и другими методами: нагреванием, добавлением к питательным средам (или к исследуемому материалу) химических веществ, био­логическим методом (заражение лабораторных животных) и даже используют метод Шукевича. В случаях необходимости отделения споровых форм от неспорообразующих видов бактерий готовят взвесь исследуемого материала, прогревают ее в водяной бане при 80 °С 30—40 мин — вегетативные формы микроорганизмов погибают, споры сохраняются жизнеспособными. Далее поступают так, как это описано выше: прогретую взвесь высевают по методу Дригальского или Коха.

Химический метод заключается в том, что химические вещества в определенной концентрации добавляют к пита­тельным средам. Действие этих веществ на разные виды микробов неодинаковое: одни виды погибают (бактерицидное действие), другие — задерживаются в своем росте (бактериостатическое действие), а на третьи эти вещества не оказывают губительного влияния. На этом принципе основано применение селективных и элективных сред.

Биологический метод позволяет выделить чистую культуру только патогенных (болезнетворных) микроорганизмов: исследуемый материал (суспензия ткани, взвесь бактерий) вводят восприимчивому животному (белая мышь, морская свинка, голубь, кролик). При наличии патогенного микроба в материале животные гибнут, их вскрывают, и посевы из внутренних органов обычно позволяют выделить чистую культуру.

Посев бактерий по методу Шукевича также позволяет выделить чистую культуру: подвижный микроб переходит на поверхность агара из конденсационной жидкости, из верхнего края выросшей культуры осторожно прикоснове­нием петли берут микробную массу и проводят пересев, как и при других методах получения чистой культуры.

Получение чистой культуры анаэробов. Принцип сохраняется тот же, что и при работе с аэробами, только исполь зуют специальные среды: применяя метод Дригальского, посев проводят на глюкозно-кровяной агар в чашках Петри, которые затем помещают в условия анаэробиоза (в эксикатор, микроанаэростат). Пользуются также методом посева на среду Вильсона — Блера, когда вырастают отдельные черные колонии, их пересевают в среду Китта— Тароцци, получая таким образом чистую культуру. Этой же цели может служить биологическая проба: исследуемым материалом (или смешанной культурой) заражают восприимчивое лабораторное животное. После его гибели и вскрытия — посевы в среды Китта — Тароцци, полужидкий агар высоким столбиком или на глюкозо-кровяной агар, как упомянуто выше. Есть и другие способы, они изложены при описании отдельных видов анаэробов.

Практическое задание 1: Изучить теоретический материал теме занятия.

Этапы выполнения задания:

1 Изучить методы посева и выделения чистых микробных культур.

2 Усвоить методы посева микробных культур в жидкие и плотные питательные среды.

3 Усвоить методы выделения чистых культур микроорганизмов методам, основанными на получении изолировано растущих колоний и, основанных на биологических особенностях микроорганизмов.

4 Законспектировать теоретический материал по теме занятия.

Практическое задание 2: Освоить методы посева микроорганизмов в питательные среды.

Этапы выполнения задания:

1 Провести посев музейных культур в МПБ, МПА скос, МПА в чашки Петри штрихом.

2 Провести газонный посев музейных культур в МПА.

3 Поставить пробирки и чашки Петри с посевами в термостат, отчитаться преподавателю.

Практическое задание 3: Освоить методы выделения чистых культур микроорганизмов методом Дригальского.

Этапы выполнения задания:

1 Приготовить мазки-препараты из выросших на плотной среде колоний бактерий, окрасить их по Граму.

2 При микроскопическом исследовании определить необходимую для изоляции микробную культуру

3 Пересеять выбранную колонию по методу Дригальского, поместить посевы в термостат и отчитаться преподавателю.

Изучить технику посева микробов на плотные и жидкие питательные среды, методы культивирования в аэробных и анаэробных условиях Усвоить диагностическое значение выделения чистой культуры и освоить методы, применяемые для получения чистой культуры микроорганизмов.

Вопросы и задания для контроля знаний 1 На чем основан принцип получения чистой культуры по методу Коха, Дригальского? 2 В чем суть биологического метода выделения чистой культуры? 3 на чем основан химический метод получения чистой культуры? 4 Кто первым предложил метод получения чистой культуры микроорганизмов? 5 Какие методы применяют для выделения чистой культуры анаэробов? 6 Поясните порядок работы с микробными культурами. 7 Как проводят посев микроорганизмов в жидкие, плотные, полужидкие питательные среды? 8 Какое оборудование необходимо для культивирования микроорганизмов в лабораторных условиях? 9 Как выращивают анаэробные микроорганизмы?

 

Тема 7 «Методы изучения культуральных и биохимических свойств бактерий»

 

Цель – формирование знаний о культуральных и биохимических свойствах бактерий, умений определения культуральных особенностей бактерий, их типизации по биохимическим свойствам, делать заключение по изученному материалу, навыков работы с источниками информации и лабораторным оборудованием.

План

1. Изучить методические указания к занятиям № 7.

2. Изучить биологические свойства музейных микробных культур, провести учет биохимических свойств микробных культур, определить вид микробной культуры  и отчитаться преподавателю о проделанной работе.

Материальное обеспечение: микробные культуры обучающихся с предыдущего занятия на МПА и МПБ, стерильные пастеровские пипетки, спирт, пробирки с жидкими сре­дами Гисса — с индикатором Андредэ, с углеводами и поплавка­ми, молоко с метиленовым синим и молоко с лакмусом, МПБ, МПЖ по одной пробирке, чашки Петри с агаром Эндо (или Левина) и кро­вяным агаром, индикаторные бумажки для определения сероводоро­да, индола.

Теоретический материал

Изучение культуральных свойств бактерий.

Культуральные свойства бактерий – это характер роста микроорганизма в питательной среде.

Рост бактерий на плотных питательных средах (МПА) проявляется образованием колоний двух основных форм S (гладкая) и R (шероховатая). Колония – это скопление мик­робов, образующееся в результате размножения одной бактериальной клетки. Колонии характеризуются большим разнообразием, могут быть изолированными и слившимися. Изучение их проводят невооруженным глазом и с помощью микроскопа (объектив х8) или лупы. При изучении культуральных свойств бактерий на плотной среде определяют следующие характеристики колоний (рост на МПА):

· характер роста (определить - обильный, умеренный, скудный);

· однотипность (указать, сколько различных типов колоний обнаружено в пробирке, чашке Петри);

· форма (определить S или R форма);

· размер (измерить диаметр колонии в мм; до 1 мм – росинчатые; 1-2 мм – мелкие; 2-4 мм – средние; более 4 мм – крупные колонии);

· край (S-форма - ров­ный; R-форма – шероховатый, волнистый, бах­ромчатый, зубчатый, локонообразный, изрезанный);

· профиль (рельеф) (просматривают в отраженном свете — выпуклый, плоский, конусовидный, кратерообразный,  с валиком по окружности);

· поверхность (глад­кая, бугристая, мучнистая, морщинистая, складчатая, с концентрическими кругами и др.);

· прозрачность (просматривать в проходящем свете - прозрачная, непрозрачная, мутная, тусклая, блестящая, флуоресцирующая колония);

· консистенция (определяют прикосновением к поверхности колонии бактериологической петлей) — плотная (легко снимается с агара или врастает в толщу среды), крошковатая, хрупкая, слизистая (тягучая, прилипает к петле), тестообразная, маслянистая;

· цвет (серовато-белая, бесцветная, белая, кремовая, оранжевая, голубоватая, зеленая, золотистая, желтая, красная, синяя, черная и др. Цвет колоний культуры бактерий зависит от цвета вырабатываемого ими пигмента.);

· запах (определяют при открывании пробирки, чашки Петри, осторожно, не допуская заражения исследователя аэрогенным путем).

 

Рост микроорганизмов в жидких питательных средах (МПБ) определяют визуально и отмечают следующие показатели (рост в МПБ):

· характер и степень помутнения среды - равномерное (диффузное), интенсивное, умеренное, слабое и в виде опалесценции;

· наличие пленки и её характер - на всей поверхности среды, подниматься (загибаться) на стенки пробирки или колбы или покрывать только часть поверхности среды, не доходя до стенки сосуда. Учитывают цвет, оттенок пленки (голубоватый, желтоватый, серый, белый), толщину (тонкая, толстая, нежная, грубая), характер поверхности пленки (складчатая, морщинистая, гладкая, сетчатая, пушистая), консис­тенцию (хрупкая, слизистая, сальная)

· осадок и его характер - он мо­жет быть обильный и незначительный, плотный (компактный), рыхлый, зернистый, в виде комочков ваты, хлопьевидный, крошковидный, слизистый. По цвету — белый, желто­ватый, матовый, зеленоватый, сероватый и др. При встряхивании осадок либо разбивается, создавая равномерное помутнение среды, либо образуются крупные или мелкие хлопья, глыбки; слизистый осадок может подниматься вверх в виде «косички», вызывая помутнение среды, или среда при этом остается прозрачной

· наличие пристеночного кольца – определить наличие пристеночного роста бактерий, полная или частичная выраженность «кольца»;

· цвет среды (пигмент) – определить изменение цвета среды;

· запах – определить аналогично изучению свойств на плотной среде.

Рост микробов в полужидкой среде (МППА), не обладающих подвижностью, происходит по уколу в виде беловатого стержня. Окружающая среда при этом остается прозрачной. Подвижные микроорганизмы вызывают помутнение полужидкого агара разной интенсивности, распространяющееся в виде «облачков». Посев микробов в МППА, МПА (столбиком), МПЖ делают уколом строго по центру вглубь среды или в непосредственной близости к стенке пробирки.

Изучение биохимических (ферментативных) свойств бактерий.

Биохимическая активность микроорганизмов обусловлена наличием у них специфических ферментов, а также условиями окружающей среды. Ферменты играют большую роль в жизнедеятельности микробов — они участвуют в различных биохимических реакциях, лежащих в основе питания, дыхания, роста и размножения микроорганизмов.

Микробы разных видов при оптимальных условиях продуцируют постоянные ферменты или группу ферментов; отдельные виды микроорганизмов обладают способностью расщеплять только белки и углеводы с образованием конеч­ных и побочных продуктов распада, а некоторые — окислять и восстанавливать различные субстраты.

В лабораторной микробиологической практике изучение биохимических свойств бактерий является одним из важнейших дифференциально-диагностических методов точного распознавания возбудителя инфекционной болезни (идентификации возбудителя). Обычно определяют сахаролитические, протеолитические и редуцирующие свойства бактерий.

Сахаролитические свойства – это способность микроорганизма расщеплять углеводы. Сахаролитические свойства определяют при посеве бактерий на дифференциально-диагностические среды с разными углеводами и индикатором. Чаще применяют среды Гисса с индикатором Андредэ. Набор сред с разными углеводами (глюкоза, лактоза, мальтоза, сахароза, маннит, дульцит, арабиноза, сорбит и др.), стерильное обезжиренное простое молоко, молоко с лакмусом, молоко с метиленовым синим — называют пестрым рядом. Посевы культур осуществляют по общепринятой методике бактериологической петлей или пастеровской пипеткой. После инкубирования в термостате учитывают результат ферментации углеводов: изменение цвета питательной среды (в красный цвет при индикаторе Андредэ) означает расщепление углевода и образование кислоты. При расщеплении отдельных углеводов образуется не только кислота, но и газообразные вещества, которые вытесняют часть жидкости из поплавка, и пузырьки жидкости скапливаются в его верхней части. Для определения сахаролитических свойств часто применяют полужидкие среды с углеводами и индикатором ВР (смесь водного голубого с розоловой кислотой), а также плотные среды с углеводами и индикатором (например, агар Эндо, агар Левина, Плоскирева).

Протеолитические свойства – это способность микроорганизмов расщеплять белки. Протеолитические свойства определяют прямым или косвенным методами.

Прямой метод заключается в посеве исследуемой чистой культуры микроорганизма в белоксодержащие среды (МПЖ, свёрнутая сыворотка крови, молоко) и определении изменений в средах после культивирования в термостате (разжижение МПЖ, сыворотки крови, свертывание (коагуляция) молока). Микробы различных видов раз­жижают желатину (МПЖ) неодинаково. Одни из них — в виде воронки (возбудитель сибирской язвы), другие — в виде «чулка» (стафилококки). Бывает разжижение послойное (синегнойная палочка — Pseudomonas aeruginosa и др.)

Косвенный метод заключается в обнаружении газов, образующихся при гниении белков (сероводорода, индола, аммиака и др.).

Определение индола

Индол устанавливают различными методами. Наиболее доступным и удобным считается метод с использованием индикаторных бумажек, приготовленных по одному из ниже­приведенных рецептов.

1.    Фильтровальную бумагу пропитывают горячим насыщенным водным 12 % - ным раствором щавелевой кислоты, высушивают на воздухе, разрезают на полоски (10 X 0,5 см) и хранят в стеклянной банке с притертой пробкой. Чтобы выявить образование индола, исследуемую культуру бактерий засевают в пробирку с МПБ или бульоном Хоттингера, куда вставляют индикаторную бумажку, прижимая ее конец ватной пробкой (нижний край бумажки не должен касаться питательной среды). Выдерживают в термостате при 37 °С 1—3 дня. При наличии индолообразования нижняя часть индикаторной бумажки окрашивается в розовый цвет (просматривать при проходящем свете).

2.    Фильтровальную бумажку пропитывают теплой смесью, составляющей реактив Эрлиха (парадиметиламидобензальдегида – 3-5 г, 96 %-ного спирта-ректификата —50 мл, очищенной концентрированной соляной кислоты - 10мл). Бумагу высушивают на воздухе и разрезают на полоски. Цвет готовых бумажек желтый. Хранят их в стеклянной банке с притертой пробкой. При наличии индола нижний конец, бумажки (прикрепленный, как и в предыдущем способе) окрашивается от темно-розового до интенсивно-малинового цвета (другой цвет не учитывается).

Определение сероводорода проводят в жидкой среде. Метод основан на почернении полоски фильтровальной бумажки, пропитанной 10 %-ным раствором уксуснокислого свинца (образуется сернистый свинец черного цвета).

Определение аммиака ( NH₃).

 1. В пробирке с засеянной бактериальной культурой закрепляют между стенкой про­бирки и пробкой розовую лакмусовую бумажку, которая в присутствии аммиака синеет.

 2. В фарфоровую чашку пипеткой вносят каплю бульонной культуры микробов и сме­шивают с каплей реактива Несслера. При наличии аммиака (в зависимости от его количества) культура с индикатором приобретает желтое или коричневое окрашивание. Реактив Несслера представляет собой смесь двух растворов: а) йодистого калия с химически чистой сулемой и б) 50 %-ного раствора КОН.

Редуцирующие свойства – это способность бактерий разлагать или восстанавливать анилиновые краски. Редуцирующие свойства определяют на основании изменения цвета краски (метиленовой сини, малахитовой зелени, нейтрального красного и др.), внесенной в питательную среду (часто в молоко). Петлю исследуемой культуры высевают в питательную среду с краской, инкубируют в термостате 24 ч. Под действием микробных ферментов краситель восстанавливается, проис­ходит его обесцвечивание или изменение первоначального цвета.

Определение редуцирующих свойств на среде Минкевича (молоко с лакмусовой настойкой). Посевы инкубируют в тер­мостате 10 дней, ежедневно просматривая пробирки. Редук­ция лакмуса проявляется полным обесцвечиванием молока. На этой же среде выявляют кислото- и щелочеобразование. В первом случае лакмусовое молоко интенсивно розовеет, во втором — синеет.

Редукцию нитратов (денитрификацию), то есть восстановление соли азотной кислоты (нитраты) в соли азотистой кислоты (нитриты), а затем в аммиак и свободный азот, определяют посевом на специальную среду (МПБ с добавлением 2 %-ного азотнокислого калия, свободного от нитритов) исследуемой бактериальной культуры и через 48— 72 ч культивирования в термостате при 37—38 °С добавляют 1 мл реактива, содержащего в определенных пропорциях йодистый калий и 10 %-ную H₂SO₄. При редукции нитратов в нитриты среда окрашивается в темно-синий цвет.

Определение каталазы можно осуществ­лять разными способами.

1. На поверхность суточной агаровой культуры равномерно тонким слоем наносят 1 мл 1 %-ного раствора перекиси водорода. При наличии каталазы отмечают выделение пузырьков отщепленного кислорода.

2. На предметное стекло наносят каплю 3—10 % - ного раствора перекиси водорода и вносят в нее петлю бактериальной агаровой культуры. Выделение пузырьков газа (кислорода) свидетельствует о наличии у микробов каталазы.

3. Определение каталазы в бульонной культуре — в пробирку вносят 1 мл культуры и добавляют к ней 1 мл 10 % - ного раствора перекиси водорода. Выделение пузырьков газа (разной интенсивности) указывает на каталазную активность бактериальной культуры.

Определение      гемолитических свойств. Бактерии некоторых видов в процессе жизнедеятельности продуцируют особые вещества, обладающие лизирующим действием на эритроциты,— гемотоксины (белковой природы), разрушающие оболочку эритроцитов. Для определения гемолитической способности бактериальные культуры высевают на питательные среды, содержащие 5 % дефибринированной крови (чаще кровяной МПА). При росте микроорганизмов, обладающих гемолитическими свойствами, вокруг колонии в результате лизису эритроцитов образуется прозрачная зона (бесцветная или окрашенная). В жидких средах при гемолизе среда становится прозрачной (красная лаковая кровь).

Практическое задание 1: Изучить теоретический материал теме занятия.

Этапы выполнения задания:

1 Изучить понятия культуральные и биохимические свойства бактерий.

2 Усвоить методы определения культуральных свойств микроорганизмов в жидких, плотных и полужидких средах.

3 Усвоить методы определения биохимических свойств бактерий.

4 Законспектировать теоретический материал по теме занятия.

Практическое задание 2: Определить культуральные свойства микроорганизмов в питательных средах.

Этапы выполнения задания:

1 Провести учет роста микробных культур в МПБ, МПА скос, МПА в чашке Петри.

2 Результаты исследований записать в тетрадь и отчитаться преподавателю.

Практическое задание 3: Изучить биохимические свойства микроорганизмов в питательных средах Гисса.

Этапы выполнения задания:

1 Учесть результаты роста музейных культур в средах Гисса, определить биохимические свойства и типировать микробные культуры.

2 Результаты исследований записать в тетрадь, сделать заключение и отчитаться преподавателю.

Вопросы и задания для контроля знаний. 1 Что означают биохимические свойства микроорганизмов? 2 Какую роль играют ферменты в микробной клетке? 3 Как определить сахаролитическую активность бактерий? 4 Что такое протеолитические свойства и какими методами их определяют? 5 Как проводят идентификацию выделенных штаммов микроорганизмов? 6 Что означает термин «редукция»? 7 Какими методами определяют образование микроорганизмами индола, сероводорода, аммиака.  8 Как определяют редуцирующие свойства микробов? 9 С какой целью определяют гемолитические свойства бактерий, чем они обусловлены? 10 Что такое культуральные свойства микробов? 11 Чем проявляется рост микроорганизмов на плотных питательных средах? 12 Поясните особенности роста бактерий в жидких и полужидких средах. 13 На чем основан принцип идентификации микробов? 14 Колонии каких основных типов образуют бактерии в плотных питательных средах?

⇐ Предыдущая1234567Следующая ⇒

Поделиться: