Біуретова реакція на пептидні зв’язки

Принцип методу. Амінокислоти, що здатні утворювати не менше двох пептидних зв’язків (—СО—NH—), у лужному розчині в присутності сульфату міді (ІІ) утворюють комплекси з атомами міді, котрі забарвлені в фіолетовий колір. Уперше реакція утворення таких комплексних сполук міді була проведена для біурету, тому вона й названа біуретовою.

Біурет, який може бути отриманий при нагріванні сечовини до температури 180⁰ С, не є амінокислотою, але має два пептидні зв’язки

 

нагрівання

2H₂N—CO—NH₂                          H₂N—CO—NH—CO—NH₂ +

 

+ NH₃.

 

У лужному середовищі біурет зазнає енолізації за схемою

 

 

H₂N—CO—NH—CO—NH₂          HN==C—NH—C==NH .

                                                               

                                                             ОН      ОН

 

Дві молекули енольної форми біурету взаємодіють із гідроксидом міді (ІІ) та утворюють комплекс, у якому координаційні зв’язки утворені за рахунок електронних пар атомів азоту імінних груп.

Подібний комплекс із міддю можуть утворювати деякі амінокислоти, в яких пептидні зв’язки виникають за рахунок карбоксильної та амінної груп. Прикладом такої амінокислоти може бути аспарагін.

Гідроксид міді (ІІ) для проведення біуретової реакції отримують, як правило, в результаті реакції взаємодії сульфату міді (ІІ) з гідроксидом натрію (або калію)

 

CuSO₄ + 2NaOH           Cu(OH)₂ + Na₂SO₄ .

 

Обладнання та реактиви: Штатив із пробірками, піпетки градуйовані, крапельниця, скляна паличка, 1 %-ий водний розчин аспарагіну, 10 %-ий розчин гідроксиду натрію (або калію), 10 %-ий розчин сульфату міді (ІІ).

Хід роботи . В пробірку з 3 мл розчину аспарагіну додати 1 мл розчину гідроксиду натрію (або калію), 1-2 краплі розчину сульфату міді (ІІ) та вміст перемішати. Вміст пробірки при цьому забарвлюється в синьо-фіолетовий колір.

 

Ксантопротеїнова реакція

Принцип методу. В ароматичних амінокислотах, які містять бензольні кільця (тирозин, триптофан, фенілаланін), під дією азотної кислоти відбувається реакція нітрування бензольного кільця з утворенням забарвленої в жовтий колір нітросполуки.

У реакції гідроксиду натрію з хіноїдною формою динітротирозину утворюється натрієва сіль динітротирозину, що має оранжевий колір.

Обладнання та реактиви : Штатив із пробірками, піпетки градуйовані, спиртівка, пробіркотримач, 1 %-ий водний розчин тирозину, концентрована азотна кислота, 10 %-ий розчин гідроксиду натрію.

Хід роботи . В пробірку внести 3 мл розчину тирозину та 1 мл концентрованої азотної кислоти. Суміш обережно нагріти в полум’ї спиртівки до появи жовтого забарвлення. Після охолодження в пробірку додати розчину гідроксиду натрію до появи оранжевого забарвлення.                         

⇐ Предыдущая9101112131415161718Следующая ⇒

Поделиться: